石蒜1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶基因LrACS的克隆及功能鉴定

为了解1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶(ACS)基因在石蒜〔Lycoris radiata(L'Hér.)Herb.〕乙烯合成中的作用,对石蒜ACS基因LrACS进行了克隆,并通过系统进化树和氨基酸序列比对分析明确LrACS与其他同源蛋白的进化关系。利用亚细胞定位分析LrACS在细胞中的定位,对LrACS重组蛋白进行体外活性检测,并利用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)分析不同生长时期LrACS的组织特异性表达。结果显示:LrACS的开放阅读框长度为1473 bp,编码490个氨基酸。LrACS的理论相对分子质量为54954.97,理论等电点为pI 8.21。系统进化树分析结果表明LrACS与忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕LaACS的亲缘关系最近,均属于Ⅰ型ACS蛋白。亚细胞定位结果显示LrACS主要定位于细胞质基质。体外活性检测结果证实LrACS重组蛋白能够催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)生成1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)。qRT-PCR分析结果显示:LrACS在花期和叶期的石蒜各组织中均有表达,但其表达具有组织特异性,其中,花期花瓣中LrACS的相对表达量极显著(P<0.01)高于根、鳞茎、花茎,叶期根中LrACS的相对表达量极显著高于鳞茎和叶。综上所述,LrACS主要定位于细胞质基质并在石蒜不同生长时期行使催化SAM生成ACC的功能。

重组球形红细菌5-氨基乙酰丙酸合酶同工酶hemA和hemT的特性

将编码光合细菌Rhodobactersphaeroides 5- 氨基乙酰丙酸合酶(ALAS)的同工酶基因hemA、hemT转入E .coli中进行高表达,并将高表达的同工酶进行分离、纯化.纯化的hemA是可溶的,并具有催化活性,而hemT大部分是不溶的,且在体外条件下无活性.与其它重组ALAS相比,R .sphaeroides的hemA活性表达需PLP作为催化因子,除去PLP或用硼酸钠破坏与PLP的连接,hemA活性下降90 % .hemA PLP的紫外 可见光谱分析表明hemA与PLP之间形成一个醛亚胺键,而hemT与PLP之间未形成该键.hemA对修饰组氨酸、精氨酸、胱氨酸残基的试剂很敏感,对可切割Arg15 1和Ser15 2的类胰蛋白酶也很敏感,PLP也不能阻止该酶的切割作用.抗血清试验表明,hemA、hemT的抗血清均可与小鼠的ALAS杂交,并都有一个抗原决定簇.

番茄红素β-环化酶和新黄质合酶功能差异关键氨基酸的发掘

酶是天然存在的高效催化剂,长期的进化过程产生了诸多的同源酶,同源酶的序列相似高却有不同的功能,而导致功能差异的原因也倍受关注。类胡萝卜素合成过程中,番茄红素β-环化酶(lycopene β-cyclase,LCYB)和新黄质合酶(neoxanthin synthase,NSY)序列高度相似但对番茄红素的环化功能不同,且并未有研究报道导致环化差异的原因。因此该研究选用氨基酸序列相似性为88.2%的枸杞来源LyLCYB和番茄来源SoNSY为研究对象,通过将基因soNSY的片段替换为lyLCYB对应位置的片段构建不同的嵌合体基因,并且利用定点突变策略构建差异位点的点突变蛋白,将改造后的基因在大肠杆菌中异源表达,测定其番茄红素环化活性。最终发现了219位点是导致LyLCYB和SoNSY番茄红素β-环化功能差异的关键氨基酸,为进一步探究影响其他来源的LCYB和NSY功能差异提供了理论支持。

5-氨基乙酰丙酸对中华稻蝗(Oxya chinensis)的杀虫活性及对3种酶活性的影响

【目的】研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)对中华稻蝗(Oxya chinensis)的杀虫活性及对3种酶活性的影响。【方法】以中华稻蝗4龄若虫为试验材料,用不同剂量的ALA(A1:250mmol·L-1;A2:450mmol·L-1;A3:750mmol·L-1;A4:1000mmol·L-1)处理中华稻蝗,观察其对中华稻蝗的毒性效应和对其体内乙酰胆碱酯酶(AChE)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性的影响。【结果】不同剂量ALA处理组中华稻蝗死亡率依处理剂量呈现上升趋势,高浓度处理组A3、A4的死亡率分别达到66.19%和80.21%;LD50值为3.61(3.29～3.93)mg·g-1虫重(95%置信范围)。生化研究结果显示,最高浓度A4处理组雌、雄虫体内AChE活性分别较对照组下降了51.53%和42.65%,差异显著(P<0.05);GPx活性分别较对照组下降了42.82%和43.85%,差异显著(P<0.05)。同时,中华稻蝗GSTs活性随ALA处理剂量升高而增高,A4处理组雌、雄虫体内GSTs活性分别较对照组升高了171.05%及97.42%,差异显著(P<0.05)。【结论】ALA对雌、雄中华稻蝗均有明显的毒性效应;ALA可引起AChE和GPx光失活,从而导致中华稻蝗神经传导受阻同时抵御氧化损伤的能力下降;高剂量ALA激活GSTs,可引发昆虫对光毒性物质的自身反馈抵御反应。

5-氨基乙酰丙酸对黄瓜幼苗抗冷性的影响

用0、0.05、0.5、1、5 mg/L 5个浓度的5-氨基乙酰丙酸(ALA)处理两叶一心的黄瓜幼苗后,再于5℃下低温胁迫4 d,研究了ALA对黄瓜幼苗抗冷性的影响。结果表明,在低温胁迫下,以0.5 mg/L ALA处理的幼苗叶片电解质渗漏率和丙二醛含量最低,SOD、POD活性和抗坏血酸含量最高,冷害指数较小,脯氨酸和可溶性糖积累量及根系活力较高,说明0.5 mg/L ALA处理的幼苗能够明显增强黄瓜幼苗的抗冷性。

产5-氨基乙酰丙酸酿酒酵母工程菌株的构建

5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,ALA)是一种天然存在的非蛋白质类氨基酸,在医学和农业领域应用广泛。为构建生产ALA的酿酒酵母细胞工厂,作者首先在酿酒酵母中分别表达了来源于酿酒酵母和类球红细菌中编码ALA生物合成C4途径ALA合酶的hem1和hemA基因,同时又表达了来源于大肠杆菌编码C5途径关键酶谷氨酰-tRNA还原酶和谷氨醛氨基转移酶的基因hemA和hemL。结果表明,表达酿酒酵母自身来源的hem1基因更利于ALA的合成,ALA产量为327.6 mg/L。在此基础上将C4和C5途径的基因hem1、hemA和hemL在酿酒酵母中过量表达,在添加前体物质甘氨酸和琥珀酸的条件下,ALA产量为525.8 mg/L,实现了在酿酒酵母中合成ALA。

γ-氨基丁酸对情绪应激大鼠额叶皮质一氧化氮合酶和一氧化氮水平的影响

目的观察γ-氨基丁酸(GABA)对情绪应激大鼠一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)含量的影响,结合行为学实验,探讨γ-氨基丁酸抗焦虑作用机制。方法将40只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为5组:对照组,模型组,GABA 0.5、1、2 mg/kg组,采用不确定性空瓶刺激的方法建立焦虑大鼠模型,并在应激前分别给予大鼠灌服生理盐水或相应剂量的GABA,14 d后进行旷场实验并分析各组大鼠额叶皮质一氧化氮合酶和一氧化氮水平的差异。结果应激14 d后对照组与其余各组的食物利用率差异极显著(P<0.01);各组大鼠在中央区域的停留时间差异极为显著(P<0.01);对照组、GABA 1 mg/kg和2 mg/kg组进入中央区域的次数显著高于模型组(P<0.05);模型组的修饰次数显著高于GABA 1 mg/kg和2 mg/kg组(P<0.05);总运动距离和直立次数均无显著性差异(P>0.05);对大鼠额叶皮质NOS及NO的分析显示对照组和GABA 2 mg/kg组的NOS活力及NO含量显著高于模型组(P<0.05)。结论 GABA与焦虑大鼠额叶皮质的NOS及NO均呈剂量-效应关系,提示GABA可能通过调节焦虑大鼠额叶皮质中的一氧化氮含量发挥抗焦虑作用。

果实膨大期5-氨基乙酰丙酸处理对富士苹果贮藏性的影响

为提高富士苹果的贮藏性,于果实膨大期进行3次叶面喷施外源5-氨基乙酰丙酸(5‑aminolevulinic acid,ALA)处理,喷施质量浓度分别为0(清水,CK)、0.5、5、10 mg/L,研究富士苹果冷藏期间(0~200 d)硬度、可溶性固形物(Total soluble solids,TSS)含量、可滴定酸(Titratable acid,TA)含量、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量及过氧化物酶(Peroxidase,POD)和多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)活性的变化,并分析最优质量浓度处理富士苹果冷藏后的常温货架期品质。结果表明,叶面喷施外源ALA能显著促进苹果果实着色,提高果肉TSS含量并降低TA含量,有利于冷藏期间果实硬度维持,抑制冷藏期间TSS含量的下降,使苹果果实保持较高的POD活性、较低的PPO活性和MDA含量。其中,10 mg/L ALA处理效果最好,冷藏200 d时,果实硬度、TSS含量、TA含量、POD活性分别较CK提高7.5%、17.0%、45.5%、69.5%,MDA含量和PPO活性分别降低17.7%和39.5%。同时,此处理可保持富士苹果冷藏200 d后常温货架期10 d的果实品质,果实硬度、TSS含量和TA含量均高于对照。综上,果实膨大期多次喷施10 mg/L外源ALA,可显著提高富士苹果果实的采收品质和贮藏品质。

5-苄基-4-叔丁基-2-苄亚氨基噻唑的合成及其对环氧合酶-2的抑制活性

5-苄基-4-叔丁基-2-氨基噻唑与芳香醛缩合制备了1 1种5-苄基-4-叔丁基-2-苄亚氨基噻唑.结构经1H NMR和元素分析确证,并用单晶X-射线衍射测定了化合物Ⅰc的晶体结构.化合物Ⅰc晶体属单斜晶系,空间群为P21/n,晶胞参数为:a=1.43753(11)nm,b=0.98665(8)nm,c=1.46565(12)nm,β=114.2560(10)°;Z=4,V=1.8953(3)nm3,Dc=1.349 g/cm3,F(000)=808,R1=0.0507,wR2=0.1163,S=1.03.体外筛选结果表明,化合物Ⅰb,Ⅰk在10μmol/L浓度下对COX-2的抑制率超过50%.

特异性环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响

目的研究特异性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对嘌呤霉素氨基核苷(puromycin aminonucleoside,PA)诱导的足细胞凋亡的影响,初步探讨特异性COX-2抑制剂对足细胞保护作用的机制。方法以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象,分为正常对照(CON)组、PA组、塞来昔布(CEL)组和地塞米松(DEX)组。在0、8、24和48h检测各组足细胞活性和凋亡水平,并检测足细胞凋亡过程中caspase-3的活性水平,运用Western印迹法检测各组足细胞P53及COX-2的表达。结果与CON组比较,PA、CEL、DEX组在24、48h的足细胞凋亡率均显著升高(P值均<0.05),但各组这两个时点间的足细胞调亡率的差异无统计学意义(P值均>0.05)。与PA组比较,CEL、DEX组在24、48h的足细胞凋亡率均显著降低(P值均<0.05)。与CON组比较,各组细胞caspase-3活性无明显变化(P值均>0.05)。与CON组比较,PA组在24、48h的P53、COX-2表达均显著增多(P值均<0.05),各组这两个时间点间P53、COX-2表达的差异无统计学意义(P值均>0.05)。与PA组同时间点比较,CEL、DEX组在24、48h的P53、COX-2的表达显著下降(P值均<0.05)。结论 PA诱导的足细胞凋亡呈时间依赖性,随时间延长,足细胞凋亡逐渐增多。PA诱导的足细胞凋亡过程中P53、COX-2的表达增加,足细胞凋亡过程与caspase-3无关。COX-2抑制剂具有抑制足细胞凋亡的作用,与地塞米松相当。

诱导型一氧化氮合酶及氨基胍在脑缺血-再灌流损伤中的作用

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)产生的一氧化氮对缺血-再灌流脑组织产生毒性作用,氨基胍是iNOS的选择性抑制剂,具有脑保护作用。本文对iNOS的特点、缺血时的变化规律、脑损伤的作用机制和氨基胍的特点、酶抑制机制及缺血时脑保护作用的研究进展作一综述。

视神经挫伤对大鼠视网膜谷氨酰胺合酶和兴奋性氨基酸转运蛋白-2表达的影响

目的通过谷氨酰胺合酶(glutamine synthetase,GS)、兴奋性氨基酸转运蛋白-2(GLT-1)表达的改变,研究视神经挫伤后视网膜谷氨酸代谢变化的机制。方法建立大鼠右眼视神经挫伤模型48只。术后1d、7d、14d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS、GLT-1的表达。结果视神经挫伤后1d、7d、14d,大鼠玻璃体谷氨酸浓度升高,与对侧眼比较差异具有统计学意义(P=0.0011、P=0.0000、P=0.0000)。视神经挫伤后1d,GS高表达(P=0.0054);挫伤后7d,GS表达与对侧眼比较差异无统计学意义(P=0.1379);挫伤后14d,GS低表达(P=0.0333)。视神经挫伤后1d、7d,GLT-1的表达与对照组的差异无统计学意义(P=0.1985、0.6537);但挫伤后14d,GLT-1低表达(P=0.0403)。结论视神经挫伤后玻璃体谷氨酸浓度升高,与视网膜GS、GLT-1的表达降低有关。

21-氨基类固醇对脑外伤鼠一氧化氮合酶的影响

目的探讨21-氨基类固醇U-74389G对鼠脑外伤后一氧化氮合酶的影响。方法用一氧化氮合酶(NOS)试剂盒测定中度脑损伤后脑组织及血清中NOS的活性。结果对照组脑组织及血清中NOS活性较假外伤组增高,而治疗组比对照组下降。结论U-74389G能抑制NOS活性,可能是其脑保护作用的机制之一。

反复热性惊厥过程中γ-氨基丁酸B受体对一氧化氮／一氧化氮合酶体系的调节作用

目的:探讨γ-氨基丁酸B受体(γ-aminobutyric acid B receptor,GABABR)对热性惊厥(febrile seizure,FS) 大鼠一氧化氮(nitric oxide,NO)／一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)体系表达的影响。方法:将21 d龄SD 大鼠随机分为对照组、FS组、FS+巴氯芬(baclofen)组和FS+法克罗芬(phaclofen)组。采用热水浴诱导大鼠FS, 隔日诱导1次,共10次。采用分光光度计法测定大鼠血浆中NO含量;用原位杂交方法观察神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)mRNA表达情况;用免疫组化方法观察nNOS蛋白表达情况。结果:FS+ baclofen组NO含量低于FS组[(19．02±9．31)μmol／L比(40．03±9．12)μmol／L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组减弱;而FS+phaclofen组NO含量高于FS组[(66．46±8．15)μmol／L比(40．03±9．12)μmol／L],同时nNOS蛋白和mRNA表达也较FS组增强。结论:反复热性惊厥过程中,GABABR的改变可影响NO／NOS体系的表达。

大豆1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶顺式天然反义转录物的分析鉴定

1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylate synthase,ACS)是植物乙烯生物合成途径中的关键酶,催化了乙烯生物合成中由S-腺苷蛋氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)转化为1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane-1-carboxylate,ACC)这一限速步骤。ACC合酶由多基因家族编码,在转录及转录后水平上受到多种生物和非生物因素的差异调节,其表达调节机制复杂,尚未完全清楚。最近的研究揭示,在植物中发现的一些天然反义转录物(Natural antisense transcripts,NATs)在基因表达调节机制中发挥了不可忽视的作用,因而天然反义转录物的研究受到了广泛的关注。本研究利用RT-PCR法在6种中国东北大豆中克隆出一种ACC合酶基因天然反义转录物,序列测定结果表明这是一种顺式天然反义转录物(cis-NAT),命名为ASACS2。实时定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)测定结果表明,ASACS2与其高丰度表达的正义转录物SACS2伴随表达,并且在营养生长期得到了积累。令人感兴趣的是,6个大豆品种中ASACS2和SACS2的表达量保持一定比例,且表现出品种特异性。目前的研究工作揭示了一种新的NATs可能参与的乙烯生物合成的调控机制,为转基因育种和植物发育调控研究提供了新的思路。

SD大鼠红藻氨酸诱导性癫痫发作时一氧化氮合酶与γ-氨基丁酸的共同表达

根据形态学观察对一氧化氮（NO）在癫痫发作中的意义、NO与抑制性神经递质γ－氨基丁酸（GABA）的关系进行探讨．方法：选用红藻氨酸（KA）诱导的复杂部分性痫病模型．SD大鼠20只，随机分为KA30，60，90，200min组及对照组．脑组织进行还原性辅酶见依赖性黄递酶（Nd）染色，在Nd染色的基础上进行GABA免疫组织化学染色．结果：在海马CA1区、CA3区、齿状回（DG），KA建模组各时点一氧化氮合酶（NOS）与GABA双标阳性细胞数较对照组为低，具有显著性统计学差异．结论：Nd与GABA在脑内共存；GABA释放的减少导致GABA能系统解抑制；NO的释放减少，使其负反馈性抑制减弱，因而使神经元同步的阵发性放电增加．说明GABA与NO通过各自的途径起抗癫痫，也许在抗癌的发生、发展中起协同作用．

重组酿酒酵母5-氨基酮戊酸合酶在大肠杆菌的表达

以酿酒酵母基因组为模板,采用PCR扩增出编码成熟5-氨基酮戊酸合酶(第一个氨基酸残基为Asn63)的基因hem1,将其克隆到pMAL-2x中构建重组表达载体,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),在0.5 mmol.L-1的IPTG诱导下,SDS-PAGE显示分子量约为49 kD的特异条带。重组菌在紫外灯下显示红色荧光,表明酶在大肠杆菌体内活性表达。体外反应表明,在浓度超过0.1 mmol.L-1的IPTG诱导下,酶活力下降,培养基的初始pH值约为6.5,5-氨基酮戊酸产量达最大,且主要分泌到胞外。

人支气管上皮细胞5-脂氧合酶介导4-氨基联苯的活化及DNA损伤

目的探讨人支气管上皮(HBE)细胞内5-脂氧合酶(5-LOX)对4-氨基联苯(4-ABP)的氧化活化及所致DNA损伤,为LOX作为前致癌物氧化活化的代谢途径提供依据。方法①体外酶系统实验:4-ABP在含有大豆脂氧合酶(SLO)的体外酶体系中反应,用分光光度法检测体系中反应产物生成。②细胞实验:4-ABP 100～800μmol.L-1染毒HBE细胞,MTT法检测HBE细胞存活率;Western印迹法检测5-LOX蛋白表达;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。同时,检测特异性5-LOX抑制剂AA861对5-LOX蛋白表达和多种酶抑制剂对细胞存活率和DNA损伤的影响。结果在过氧化氢参与下,SLO可以协同氧化4-ABP,LOX抑制剂去甲二氢愈创木酸可抑制该协同氧化作用。4-ABP可以使HBE细胞内5-LOX蛋白表达增加,AA861对5-LOX蛋白表达没有影响;4-ABP 400μmol.L-1可以使HBE细胞产生明显的DNA损伤,彗星细胞的阳性率达47.7%(P<0.01),AA861和萘普生可以抑制该浓度4-ABP所致的DNA损伤,最大保护率分别为58.1%和21.7%。结论 4-ABP上调HBE的5-LOX蛋白表达。5-LOX可能通过介导4-ABP协同氧化,导致DNA损伤,这可能是4-ABP致癌的机制之一。

氨基胍对兔缺血-再灌注损伤后视网膜形态学及一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响

背景临床研究表明，多种眼科疾病如青光眼、视网膜中央动脉阻塞、缺血性视神经病变等均可导致视网膜缺血-再灌注损伤（RIRI），严重影响视功能，因而对治疗RIRI药物的研究是非常必要的。目的观察并探讨氨基胍对兔RIRI后形态学的变化，并研究其对一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（iNOS）在视网膜中表达的影响及其机制。方法清洁级日本大耳白兔66只，以随机数字表法分为正常组、RIRI模型组和氨基胍治疗组。用前房灌注生理盐水法升高眼压60min后恢复灌注建立兔RIRI模型，氨基胍治疗组每日在模型兔腹腔内注射氨基胍注射液80mg／kg，而RIRI模型组以同样的方法注射等量生理盐水。RIRI模型组和氨基胍治疗组分别于缺血即时、再灌注后6、24、72h各取2只兔活体行眼底彩色照相及荧光素眼底血管造影（FFA）。各组兔分别于再灌注后1、6、24、72h用空气栓塞法处死并摘除眼球以制备视网膜切片，用TUNEL法检测视网膜组织神经细胞的凋亡变化，通过硝酸还原酶法检测NO浓度，比色法检测iNOS活力。结果各时间点眼底彩色照相及FFA检查结果表明，与RIRI模型组比较，氨基胍治疗组视网膜水肿程度减轻，血管闭塞程度及比例降低，荧光素渗漏量及面积减轻并减少。TUNEL染色凋亡细胞计数检测表明，正常组兔视网膜未见TUNEL阳性细胞，而缺血-再灌注1、6、24、72h后RIRI模型组兔视网膜凋亡细胞计数均明显高于氨基胍治疗组（F分组=2762．37，P=0．00；F时间=894．24，P=0．00）。RIRI模型组和氨基胍治疗组各组内相邻时间点之间TUNEL阳性细胞的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=24．47、36．59、-20．37，P〈0．05；氨基胍治疗组：q=20．94、16．79、-6．92，P〈0．05），再灌注后24h各组TUNEL阳性细胞数量达到高峰。各时间点RIRI模型组兔视网膜NO浓度明显高于氨基胍治疗组（q=3．84、4．01、8．91、3．75，P〈0．05），各组内相邻时间点之间NO浓度的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=4．77、13．40、-10．29，P〈0．05；氨基胍治疗组：q=4．55、9．05、-5．08，P〈0．05），各组24h视网膜中NO浓度达峰值。各时间点RIRI组视网膜iNOS活力均明显高于氨基胍治疗组（q=-3．74、-4．94、-6．53、-3．98，P〈0．05）；各组内相邻时间点间iNOS活力的差异均有统计学意义（RIRI模型组：q=8．43、6．71、-6．39，P〈0．05；氨基胍治疗组：q=4．16、5．08、-3．93，P〈0．05），各组24h iNOS活力达峰值。结论氨基胍对维持RIRI后的视网膜形态和功能起保护作用，其作用机制可能为抑制iNOS的活性，减少NO的生成。

川芎嗪与氨基胍联合治疗对n0-STZ大鼠肾功能的影响

目的:研究川芎嗪与氨基胍的联合治疗对新生链脲佐菌素糖尿病大鼠(n0-STZ)肾功能的影响。方法:出生当日Wistar大鼠,一次性腹腔内注射STZ诱导n0-STZ大鼠模型。实验大鼠分4组:(1)正常对照组;(2)胰岛素抵抗组;(3)二甲双胍组;(4)川芎嗪与氨基胍联合治疗组。第32周检测空腹血糖(FPG)、空腹血浆胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿蛋白和肾小球滤过率(GFR),外周血白细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达,肾组织中NO浓度和iNOS活性以及iNOS和3-硝基酪氨酸(3-NT)的蛋白表达。结果:(1)造模第8周,82.5%的Wistar大鼠空腹血糖≥7.0 mmol/L,肾功能受损。(2)两种治疗均能降低FPG、FINS、IRI,以联合治疗组提高胰岛素敏感性更显著;两种治疗方案都能改善大鼠肾功能,联合治疗组降低血BUN、Cr,提高肾小球滤过功能作用更强。(3)两种治疗都能下调iNOS活性和NO浓度,抑制肾组织中3-NT和iNOS表达,联合治疗组效果更显著。结论:二甲双胍和川芎嗪与氨基胍联合治疗都能通过抑制硝基化应激改善肾功能,但川芎嗪与氨基胍保护肾功能的作用优于二甲双胍。