d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌5-8F细胞的作用与机制

目的:探讨d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌5-8F细胞的增殖和凋亡作用及作用机制,为鼻咽癌的防治提供新思路。方法:d-δ-三烯生育酚(0,40,50,60μmol/L)干预鼻咽癌5-8F细胞48h后,显微镜下观察细胞的形态;MTT实验、流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡;Western blotting检测基因表达。结果:d-δ-三烯生育酚三组药物浓度对5-8F细胞的抑制率分别为(49.13±1.85)%、(76.13±2.6)%和(92.97±3.5)%,与对照组相比,差异具有显著意义(P<0.01);5-8F细胞的凋亡率分别为(2.80±0.72)%、(11.88±1.08)%和(22.30±0.66)%,与对照组(0.74±0.15)%比较,差异具有显著意义(P<0.01);随d-δ-三烯生育酚浓度增加,Bax表达增强,Bcl-2表达降低。结论:d-δ-三烯生育酚具有抗鼻咽癌5-8F细胞的生物学活性,其机制可能与其诱导Bax表达、抑制Bcl-2表达有关。

基于δ-生育三烯酚测定混合油脂中棕榈油的含量

根据δ-生育三烯酚为棕榈油特征物质的特点,建立以δ-生育三烯酚来分析混合油脂中棕榈油含量的方法,并对该方法进行验证。结果表明:基于δ-生育三烯酚测定混合油脂中棕榈油的方法具有较高的灵敏度和准确性,最低检出限为0.02%,实际值与计算值之间的相对误差在±20%之间。该方法简单、有效。

d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响

目的研究d-δ-三烯生育酚对人晶状体上皮SRA细胞增殖和凋亡的影响,探讨后发性白内障治疗的新方法。方法将人晶状体上皮SRA细胞分为对照组和实验组,对照组不加药物干预,实验组设3个药物浓度,分别为30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚,药物干预人晶状体上皮SRA细胞24 h和48 h后,采用MTT法、Hoechst33258荧光染色和流式细胞仪分析人晶状体上皮SRA细胞的增殖和凋亡情况。结果 d-δ-三烯生育酚呈浓度-时间依赖性抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,诱导其凋亡。30μmol·L-1、40μmol·L-1、50μmol·L-1的d-δ-三烯生育酚干预48 h对SRA细胞的增殖抑制率分别为(32.23±5.25)%、(54.17±1.63)%和(86.80±0.85)%,与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05);干预24 h增殖抑制率分别为(12.70±1.20)%、(19.53±0.95)%和(51.83±6.11)%,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。干预24 h后,各实验组细胞晚期凋亡率Q2分别为(5.87±0.15)%、(11.37±0.85)%、(22.77±2.41)%,与对照组的(1.10±0.17)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各实验组细胞早期凋亡率Q4分别为(3.57±0.32)%、(4.20±0.40)%、(8.00±0.50)%,与对照组的(2.53±0.15)%相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 d-δ-三烯生育酚抑制人晶状体上皮SRA细胞增殖,诱导其凋亡,具有抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用,为治疗后发性白内障提供一种新思路。

d-δ-三烯生育酚对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的探讨d-δ-三烯生育酚抗鼻咽癌的生物学活性。方法将低分化5-8F鼻咽癌细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别予40、50、60μmol/L d-δ-三烯生育酚干预48 h,对照组不予干预。采用MTT实验、流式细胞仪检测细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞周期;荧光染色和显微镜观察细胞形态学变化。结果观察组干预48 h后,随浓度增加,镜下观察活细胞减少,漂浮的死亡细胞增多,细胞核强荧光染色细胞比例增多,细胞出现明显的抑制和凋亡现象。观察组不同浓度细胞抑制率及凋亡率明显升高,且明显高于对照组(P均<0.01);对照组S期的细胞百分率明显低于观察组,P均<0.01。结论 d-δ-三烯生育酚能抑制5-8F细胞增殖,诱导其凋亡,具有潜在的抗鼻咽癌生物学活性。

δ-生育三烯酚促进小鼠粒细胞集落刺激因子生成作用及其促造血活性

目的探讨δ-生育三烯酚(δ-T3H)诱导小鼠体内粒细胞集落刺激因子(G-CSF)生成的作用,评价δ-T3H促健康小鼠造血活性作用。方法雄性C57BL/6J小鼠分别单次sc给予δ-T3H 12.5,25,50,100和200 mg·kg^-1,于药后24 h采血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中G-CSF水平,分析δ-T3H诱导小鼠体内生成G-CSF的剂量效应。小鼠单次sc给予δ-T3H 100 mg·kg^-1,于给药后3,6,12,24,36,48,72和96 h采血,ELISA检测血清中G-CSF水平和细胞趋化因子1(CXCL1)、粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素6(IL-6),IL-10,IL-12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。雄性小鼠单次sc给予δ-T3H 100 mg·kg^-1,于给药后24 h取材分析组织匀浆中G-CSF水平。雄性小鼠连续sc给予δ-T3H 100 mg·kg^-15 d,于给药后利用ELISA检测血清中G-CSF、红细胞生成素(EPO)、血小板生成素(TPO)和基质细胞衍生因子1β(SDF-1β)的含量,利用血细胞分析仪检测外周血常规参数。δ-T3H按照100 mg·kg^-1分为单次sc给药组和连续2 d sc给药组,于给药24 h后利用流式细胞术分析外周血造血干细胞数量。结果δ-T3H单次给药升高G-CSF的作用呈给药剂量效应,最低有效剂量≤12.5 mg·kg^-1,100 mg·kg^-1给药后升高G-CSF的作用达到饱和;δ-T3H单次给药后48 h内以及连续给药期间小鼠血清G-CSF浓度均可维持在较高水平(36±12)μg·L^-1;细胞因子检测发现,δ-T3H对CXCL1生成有显著促进作用(P<0.05),不影响血清中其他炎症细胞因子(GM-CSF,IL-6,IL-10,IL-12和TNF-α)的生成;δ-T3H显著升高小鼠淋巴-造血组织如胸腺、脾、淋巴结和骨髓组织液中G-CSF水平(P<0.05),对其他组织器官匀浆中G-CSF含量无显著影响;δ-T3H诱导小鼠血清中TPO和EPO略有升高;血常规检测发现,δ-T3H连续给药可显著增加小鼠外周血白细胞数量(主要为中性粒细胞和单核细胞的升高),血小板小幅升高,而淋巴细胞和红细胞则有一过性降低(P<0.05,P<0.01);流式细胞术分析发现,δ-T3H连续2 d sc给药组小鼠外周血造血干细胞数量显著升高(P<0.01)。结论δ-T3H促进小鼠体内G-CSF生成具有专一性以及组织特异性,同时δ-T3H通过刺激体内G-CSF的生成升高小鼠外周血粒细胞数,并促进外周血造血干细胞数量的增加,具有一定的促造血活性。

δ-三烯生育酚通过上调MicroRNA-34a抑制宫颈癌细胞增殖

目的探究δ-三烯生育酚对HeLa宫颈癌细胞增殖的影响以及microRNA-34a(miR-34a)是否介导这一过程。方法用荧光定量PCR方法检测miR-34a和细胞增殖关键基因表达的变化,CCK-8检测细胞活力变化,Western blot检测细胞增殖关键基因蛋白水平的变化,流式细胞术检测细胞周期变化;并利用miR-34a模拟剂和抑制剂,探究其对细胞增殖的影响。结果δ-三烯生育酚处理HeLa宫颈癌细胞36 h显著降低细胞活力并呈剂量依赖效应。用20μmol/Lδ-三烯生育酚处理细胞36 h显著上调miR-34a表达,显著下调细胞周期关键基因CCND1,同时S细胞比例显著下降。细胞转染miR-34a模拟剂后,CCND1表达和细胞活力都下降;而转染miR-34a抑制剂则显著减弱δ-三烯生育酚的增殖抑制作用。结论δ-三烯生育酚通过上调miR-34a抑制宫颈癌细胞增殖。

δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞抑制作用

目的探讨δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用。方法采用细胞生长曲线和real-time RT-PCR方法,观察各剂量下δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制及对丝/苏氨酸磷酸激酶(GSK-3β)、结肠癌腺瘤性息肉蛋白(APC)及轴蛋白(Axin)在mRNA水平上表达的影响。结果δ-生育三烯酚对人结肠癌SW620细胞有明显抑制作用,24 h细胞生存率为14.4%～88.8%;GSK-3β及APC mRNA表达水平无明显变化,Axin mRNA表达水平为2.24～2.58,明显高于对照组(P<0.05)。结论δ-生育三烯酚能够明显抑制SW620细胞的生长,其机制可能与上调Axin mRNA水平有关。

生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖中Notch信号蛋白的表达及意义

目的探讨δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用,研究Notch信号通路中关键蛋白在δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖中的表达及意义。方法以终浓度分别为5、10、15、20、25、30μmol/L的δ-生育三烯酚培养SW620细胞,应用噻唑蓝(MTT)试验观察δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖的作用,计算细胞存活率。应用免疫细胞化学方法检测Notch信号通路关键蛋白Notch、Jagged的表达变化。观察浓度为1μg/ml放线菌酮(CHX)对生育三烯酚抑制结肠癌细胞增殖作用的影响。结果随着δ-生育三烯酚浓度的增加,SW620细胞的存活率逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Notch信号通路关键蛋白Notch1、Jagged1在溶剂对照组结肠癌细胞中表达量最高,随着加入生育三烯酚剂量的增加,表达量逐渐降低。经CHX干预过的细胞,再加入δ-生育三烯酚,作用24 h后,细胞存活率(83.33%)较单独加入生育三烯酚作用的细胞存活率(28.51%)显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论生育三烯酚抑制人结肠癌细胞增殖并诱导其死亡的方式可能为paraptosis样死亡,Notch信号通路中关键蛋白参与了这一过程。

δ-生育三烯酚诱导结肠癌细胞SW620死亡的机制研究

目的研究δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620死亡方式,及其与内质网应激之间的关系。方法 (1)以不同剂量的δ-生育三烯酚作用于人结肠癌细胞SW620,DAPI染色,观察对SW620细胞形态学改变。(2)Caspase-3的活性测定,不同浓度δ-生育三烯酚作用SW620细胞,检测细胞中caspase-3活性。(3)DNA Ladder法检测典型凋亡阳性药物紫杉醇(PTX)及δ-生育三烯酚作用后DNA的降解情况。(4)免疫组织化学方法检测内质网膜钙连蛋白表达。(5)蛋白免疫印迹方法,测定δ-生育三烯酚对内质网应激标记蛋白(Bip)表达的影响。结果 (1)δ-生育三烯酚处理后的SW620细胞经DAPI染色,在荧光显微镜下观察,各组细胞均未出现以细胞核的半月状改变及凋亡小体出现为特征的典型凋亡现象。但可见到细胞内空泡。(2)不同浓度的δ-生育三烯酚(0、5、10、15和20·mol/L)对SW620细胞作用24h,经caspase-3分光光度法检测,随作用剂量增加caspase-3活性未显著增强(P>0.05)。(3)PTX作用24 h,可使结肠癌细胞SW620核内DNA发生梯度化降解,而20·mol/L的δ-生育三烯酚作用相同时间无同样现象。(4)20·mol/L的δ-生育三烯酚对SW620细胞作用24h,钙连蛋白表达量增多且成空泡状。内质网应激标记蛋白Bip表达量增加。结论(1)δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620死亡未出现caspase依赖性的经典凋亡现象。(2)δ-生育三烯酚诱导结肠癌细胞发生caspase非依赖性死亡可能与内质网应激有关。

δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用研究

目的探讨δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡作用及其机制。方法以MTr试验观察0～30μmol／L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620及人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞增殖作用的影响，观察1．0μmol／L放线菌酮（CHX）对15μmol/L δ-生育三烯酚诱导人结肠癌细胞SW620副凋亡的抑制作用。以Westernblot检测0～20μmol/L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620中增殖与凋亡关键信号通路Notch 1及Jagged1蛋白表达的影响。以透射电镜检测15μmol／L δ-生育三烯酚对人结肠癌细胞SW620副凋亡的形态学特征的影响。结果与溶剂对照组相比，用不同剂量的δ-生育三烯酚（终浓度为5、10、15、20、25、30μmol／L）分别作用于SW620及GES-1细胞24h，SW620细胞存活率下降（P〈0．05），而GES-1细胞存活率未见明显下降（P〉0．05）。提前给予1．0μmol／LCHX处理的细胞，经15μmol／L生育三烯酚诱导SW620凋亡作用24h后，SW620存活率较单独加入生育三烯酚作用的细胞存活率增高（P〈0．05）。1．0μmol／L CHX和15μmol／L δ-生育三烯酚共同作用于SW620细胞24h后，Notchl、Jaggedl蛋白表达量与对照组相比分别上升41．8％、41．9％。透射电镜下15μmol／L δ-生育三烯酚作用24h后，SW620细胞在形态学上呈现副凋亡特征，1．0μmol／L CHX能抑制生育三烯酚诱导SW620的副凋亡作用。结论6一生育三烯酚能诱导SW620细胞paraptosis样副凋亡，并且这一过程可以被CHX抑制。

多花山竹子果实化学成分研究

目的研究多花山竹子Garciniamultiflora果实化学成分。方法采用正、反相硅胶柱色谱及高效液相色谱等多种技术进行分离纯化,并通过谱学数据鉴定化合物结构。结果从多花山竹子果实乙醇提取物中分离得到了6个化合物,分别鉴定为多花山竹子酮素甲(1)、sargaol(2)、δ-生育三烯酚(3)、木犀草素(4)、1,3,6,7-四羟基酮(5)、对苯二甲酸二(2-乙基)己酯(6)。结论化合物1为新的类金刚烷型间苯三酚类化合物,化合物2、3、6均为首次从该植物中分离得到。

δ-生育三烯酚抑制结肠癌细胞Wnt途径的实验研究

目的依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对人结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系。方法采用MTT(噻唑蓝比色法)方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过免疫细胞化学染色法和蛋白免疫印迹方法测定Wnt信号途径中相关因子的蛋白表达情况。结果δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20μmol/Lδ-生育三烯酚作用24h对SW620细胞抑制率为70.43%,IC50值为15.18μmol/L。20μmol/Lδ-生育三烯酚可使人结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun和cylin D1蛋白表达量显著下降(P<0.05)。结论δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun和cylin D1表达降低有关。

δ-生育三烯酚对结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径的影响

目的依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系。方法采用MTT方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过Real-time RT-PCR检测Wnt途径相关因子mRNA的表达量变化情况,观察δ-生育三烯酚对细胞中wnt-1、β-catenin、c-jun、c-myc、cyclin D1及MMP-7mRNA表达水平的影响。结果δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20μmol/Lδ-生育三烯酚作用24 h对SW620细胞抑制率为70.43%,IC50值为15.18μmol/L。20μmol/Lδ-生育三烯酚对Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc mRNA表达降低(P<0.05);对cyclin D1及MMP-7 mRNA的表达无影响(P>0.05)。结论δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc表达降低有关。

红木生育三烯酚对结肠癌小鼠免疫相关细胞与细胞因子的作用

目的研究红木生育三烯酚(δ-T_3)对结肠癌小鼠CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、白介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ的调节作用。方法 75只CD1-ICR小鼠分为结肠癌造模组和阴性对照两大组,结肠癌造模组再分为肿瘤模型对照组和三个δ-生育三烯酚剂量组(分别5、10、20mg/kg·bw),每组15只。采用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠癌模型。采用全自动五分类血球仪毛细管模式检测动物血液学指标,流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚型,ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-6、干扰素(IFN)-γ水平。结果与空白对照组比较,结肠癌造模组ICR小鼠白细胞计数降低(P<0.05)。与肿瘤模型对照组比较,中、高剂量生育三烯酚组均能显著提高CD4^+/CD8^+比值和血清中IFN-γ的水平,降低IL-6水平(P<0.05)。结论δ-生育三烯酚可增强结肠癌小鼠的免疫功能,这可能与其提高CD4^+/CD8^+比值,提高IFN-γ水平,及降低IL-6水平相关。