日本囊对虾核因子κB抑制蛋白激酶ε2基因克隆及表达

【目的】了解核因子κB抑制蛋白激酶ε2(IKKε2)基因在日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)受细菌刺激后的应答情况,以阐释IKKε2在对虾先天免疫中所起的作用。【方法】从日本囊对虾转录组数据中获得日本囊对虾IKKε2(命名为PjIKKε2)的cDNA序列,并进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR分析PjIKKε2的组织表达以及受哈维弧菌(Vibrio harveyi)刺激后在肝胰腺组织的表达情况。【结果】PjIKKε2全长为4009 bp,其中开放阅读框长2337 bp,编码778个氨基酸,5′UTR(Untranslated region)174 bp,3′UTR 1498 bp。PjIKKε蛋白含有一个激酶结构域、一个类泛素结构域和一个TANK结合激酶卷曲螺旋结构域。多重序列比对结果显示,PjIKKε2蛋白序列与其他甲壳类IKKε的相似性高,在激酶结构域保守性高。系统进化树结果显示,PjIKKε2与其他对虾属的IKKε聚集在一支。PjIKKε2在日本囊对虾9个组织中均有表达,在淋巴组织中表达量最高(P<0.05)。在哈维弧菌刺激6 h后,PjIKKε2在肝胰腺中表达量显著上调,达到最大值(P<0.05)。【结论】PjIKKε2参与了日本囊对虾的先天免疫。

pEGFP-N1-APOE ε2重组质粒的构建与鉴定

目的构建pEGFP-N1-APOEε2真核表达重组质粒。方法应用基因定点突变手段,根据载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因cDNA克隆基因序列和表达载体增强绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP-N1)质粒上的多克隆位点设计引物,对质粒APOE基因cDNA克隆(pMD18-T-APOE3)进行基因定点突变,得到含有APOE2基因的目的片段,将此目的片段插入载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的基因融合。重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序,鉴定目的基因是否成功插入pEGFP-N1质粒。结果对所得pEGFP-N1-APOEε2质粒插入部分测序结果显示,pEGFP-N1-APOEε2质粒的方向及序列正确,阅读框正确无误,表明APOEε2基因定点突变正确,重组pEGFP-N1-APOEε2质粒构建成功。结论成功构建了pEGFP-N1-APOEε2真核表达重组质粒。

前列腺素Ε2栓与缩宫素用于妊娠期糖尿病引产的对比分析

目的探讨妊娠期糖尿病采用前列腺素Ε2栓与缩宫素引产的效果对比。方法本次研究选择的对象共80例,均为本院2010年6月～2012年8月收治的妊娠期糖尿病行引产术者,随机按观察组和对照组各40例划分,对照组采用缩宫素治疗,观察组采用前列腺素Ε2栓治疗,回顾两组临床资料。结果两组用药前Bishop评分差异无统计学意义(P>0.05),用药后12h观察组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组临产时间短于对照组,阴道顺产率高于对照组,产后出血量及出生5min新生儿Apgar评分无明显差异(P>0.05)。结论妊娠糖尿病患者引产中应用前列腺素Ε2栓药物,可缩短临产时间、促进宫颈成熟和引产,降低剖宫产率,为母婴安全提供了保障。

脑淀粉样血管病性出血与载脂蛋白E等位基因ε2关系的研究

目的 探讨脑淀粉样血管病性出血 (CAAH)与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性的关系。方法 应用聚合酶链反应—限制性长度多态技术 (PCR -RFLP)检测了112例脑淀粉样血管病性出血患者 (患者组 )和120例健康志愿者 (对照组 )的ApoE基因和等位基因 ,同时检测他们的血脂、脂蛋白和载脂蛋白等。结果 患者组ApoE基因型ε2/2、ε2/3、ε2/4、ε3/3、ε3/4和ε4/4的频率分别为1.8%、46.4%、8.9 %、19.6%、19.6%和3.6% ,ApoE等位基因ε2、ε3和ε4的频率依次为29.5 %、52.7 %和17.8% ;而对照组分别为1.7%、15.0%、3.3 %、63.3%、16.7%、0,10.8%、79.2%和10.0 % ;两组之间的差别具有显著性意义 (均P=0.0001)。与对照组相比较 ,患者组ApoE基因ε2/3和等位基因ε2的频率明显增高 ,差别具有显著性意义 (均P=0.0001) ;而ε3/3、ε3的频率则明显降低 ,差别具有显著性意义 (均P=0.0001) ;ApoEε基因型2/3和ApoE等位基因ε2的相对危险度及其95%可信区间分别为4.911(2.632～9.163)和3.438(1.700～6.955)。 结论 ApoE等位基因ε2在CAAH患者中出现的频率显著增高 ,很可能是引发CAAH潜在的危险因子。

维吾尔族人群代谢性疾病与ApoEε2等位基因

目的探讨维吾尔族代谢性疾病与载脂蛋白Eε2等位基因(ApoEε2)的关系。方法收集2006年1月-2006年12月在新疆医科大学附属中医医院和宝科达医院健康体检的386名维吾尔族人,采集血液标本,检测血液生化指标以及ApoE基因型。结果新疆维吾尔族ApoEε2等位基因的携带率为31.9%(123/386);与非携带组比较,除了高密度脂蛋白-胆固醇升高外,ApoEε2等位基因携带组的其余指标均有下降趋势,其中收缩压、舒张压及低密度脂蛋白差异有统计学意义(P<0.05);与非携带组比较,携带者代谢性疾病检出率降低,尤其是对高胆固醇血症和高血压影响较大,其中高血压检出率差异,P=0.058。结论ApoEε2等位基因携带者血脂水平及代谢性疾病的检出率降低,是代谢性疾病的保护因素。

人IgE重链恒定区2～4区蛋白的真核表达、纯化及其相互作用分子捕获

目的真核表达、纯化人IgE重链恒定区2～4区(IgECε2-4)蛋白,利用表面等离子体共振技术(SPR)捕获其相互作用蛋白。方法构建3个含不同信号肽序列的IgECε2-4重组真核表达载体,分别瞬时转染HEK293FT悬浮细胞,优化选用表达量最高的重组质粒进行大量瞬转表达,镍柱亲和层析纯化。免疫荧光技术鉴定重组蛋白与KU812细胞表面IgE受体FcεRⅠ的结合,采用SPR技术捕捉人血清中与IgECε2-4相互作用的蛋白。结果含信号肽3(SP3)的重组质粒表达量最高,表达量约为6.2 mg/L;亲和纯化获得高纯度的人IgECε2-4蛋白;免疫荧光技术鉴定显示重组蛋白IgECε2-4可与KU812细胞表面受体结合。通过SPR技术捕获到人血清中39种可能与IgECε2-4结合的蛋白。结论获得纯化的重组蛋白IgECε2-4,IgECε2-4能与KU812细胞表面FcεR1α受体结合,靶标垂钓结果显示IgECε2-4能与人血清中的39种蛋白存在相互作用或有间接结合作用。

载脂蛋白E与阿尔茨海默病相关性的临床研究进展

诸多证据表明载脂蛋白E(ApoE)对阿尔茨海默病(AD)患者脑内β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积有重要影响,ApoE被认为是AD的病理性伴侣蛋白,备受神经精神疾病研究领域的关注。其中ApoEε4为AD的主要易感基因,而ApoEε2可能有保护作用,但至今大多限于描述性研究,而分析性研究包括发病危险因素和干预性研究很少,且其分子机制及疾病的渐进过程仍未完全明确,有待于进一步探索。本文归纳总结近年ApoE与AD相关的临床研究,进一步明确二者在分子机制和试验结果中的联系,阐明ApoE将为AD的预防和治疗带来新的契机。面对社会人口老龄化的到来,如何预防及治疗AD将成为当务之急。

Banach空间的不动点性质

Banach空间中的许多几何性质在不动点理论中起着很重要的作用,其中包括一致凸性,Banach-Saks性质和正规结构等等.文中引入了一个新的几何性质(Aε2)*,通过建立Banach空间X中(Aε2)*性质和Banach-Saks性质及UKK性质、一致Frechet可微的关系,得到的结论是:如果Banach空间X是可分的且其对偶空间X*具有(Aε2)*性质,则X及X*具有弱不动点性质.

压缩生热试验机在全钢轮胎配方中的应用

本文主要阐述了Goodrich压缩生热试验机在全钢载重子午线轮胎胎面胶、肩垫胶配方中的应用。结果表明,通过实验室测试数据,结合生产试制进行配方的优选,从而降低了胎面、肩垫的生热,提高了产品的耐久性能。

湍球塔内三维流场的数值计算

采用ｋ－ε双方程紊流模型对湍球塔（ＴＣＡ）内三维流场进行了数值模拟，并对塔内复杂结构如整流板、湍球层、底部液面及其它不可流通区域进行了合理的处理。计算结果与试验结果基本相符合。本文的计算程序可为ＴＣＡ的设计及保证其长期安全经济运行提供理论依据。

模糊模式识别理论的空间实体最佳表达研究

为了寻找和确定空间实体的最佳表达,提出符合实体三维表达的基本条件和评价指标,包括图形清晰性、立体感、易作图性和可度量性。为着具体化清晰性和立体感的评价指标,提出和构建投影角方法和轴向伸缩系数比方法。运用模糊模式识别空间实体的三维最佳表达方案,系统阐述和确定空间实体表达的具体方法和实际步骤。采用贴近度算法和层次因素分析方法构建模糊关系矩阵,进而得到最佳表达方案。以叉架类零件为例进行模糊模式识别和计算,结果表明,提出的理论方法有效实用。

载脂蛋白Eε等位基因与癫痫患者认知功能的关系

目的探讨载脂蛋白E(APOE)ε等位基因对癫痫患者认知功能的影响。方法收集2021-01—2022-07在中国人民解放军北部战区总医院神经外科就诊的72例癫痫患者,应用基因芯片杂交方法检测外周血中APOE的基因分型,应用Addenbrooke认知评估量表评估患者的认知功能,分析APOE*ε等位基因对癫痫患者认知功能的影响。结果携带APOE*ε4等位基因的癫痫患者认知功能评分[(78.24±12.25)分]低于APOE*ε4等位基因非携带的癫痫患者[(86.51±12.07)分],差异有统计学意义(P<0.05)。APOE*ε2和ε3等位基因对癫痫患者认知功能评分无显著影响(P>0.05)。3种等位基因中,携带APOE*ε4等位基因的癫痫患者认知功能评分最低[(78.24±12.25)分]。结论APOE*ε4等位基因对癫痫患者认知功能有显著影响,而APOE*ε2和ε3等位基因对癫痫患者认知功能无影响。

表面等离子体无掩膜干涉光刻系统的数值分析(英文)

表面等离子体激元具有近场增强效应,可以代替光子作为曝光源形成纳米级特征尺寸的图像.本文数值分析了棱镜辅助表面等离子体干涉系统的参量空间,并给出了计算原理和方法.结果表明,适当地选择高折射率棱镜、低银层厚度、入射波长和光刻胶折射率,可以获得高曝光度、高对比度的干涉图像.入射波长为431nm时,选择40nm厚的银层,曝光深度可达200nm,条纹周期为110nm.数值分析结果为实验的安排提供了理论支持.

冠心病患者载脂蛋白E基因型与血脂、脂蛋白水平的相关性

目的 :探讨冠心病 (CHD)患者载脂蛋白E(apoE)基因型与血脂、脂蛋白水平的相关性。 方法 :应用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性法 (PCR RFLP) ,检测 119例CHD患者和 112例正常人 (对照组 )的apoE基因型 ;按常规方法测定血脂及脂蛋白水平。结果 :CHD组及对照组共检出 6种基因型 ,分别为 :ε2 /2、ε2 /3、ε3/3、ε3/4、ε4/4、ε2 /4 ;CHD组ε3/4基因型及ε4等位基因频率均显著高于对照组 (分别为P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;CHD组ε2 /3、ε3/3、ε3/4基因型之间胆固醇 (TC)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)水平差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :apoE3/4基因型明显升高CHD患者TC、LDL C水平 ;

人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定

利用哺乳动物细胞表达、纯化具有生物学功能的人IgE Fc段与受体结合的功能区(Fcε2-4)。以CRL8033细胞株为模板,PCR扩增人IgE Fcε2-4的cDNA并构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体转染CHO-K1细胞并以G418加压筛选。利用有限稀释法、Dot-blot及FACS筛选出高表达目的蛋白的稳定细胞株并进行扩增。CHO-K1培养上清经偶联抗IgE抗体(Omalizumab)的亲和层析柱分离纯化后,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯度,并采用表面等离子共振(SPR)法对该蛋白与其抗体的亲和力进行检测。结果表明,SDS-PAGE显示最终获得了纯度高于95%的人IgE Fcε2-4蛋白,呈二聚体状态,分子量约78kD,SPR检测结果显示,该蛋白与Omalizumab抗体特异性高亲和力结合(kD值约3.8nmol/L)。提示,本实验获得了结构及糖基化修饰正确的人IgE Fcε2-4结构域,为进一步研究其功能及探索新的抗体药物奠定了基础。