载脂蛋白Eε4基因与阿尔茨海默病关系的研究进展

目前研究认为,载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)ε4基因是与晚发性阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病及预后关联最强的风险基因,与较高的发病风险、较差的认知功能预后有关。APOEε4可通过引起脑内神经病理蛋白沉积、加剧神经炎症和氧化应激、破坏血-脑屏障和脂质稳态等机制造成突触损伤,从而导致AD的发生和进展。现就APOEε4与AD流行病学、临床症状、神经病理和发病机制的关系进行综述,旨在为AD的早期诊治提供新思路。

携带载脂蛋白ε4基因脑出血患者短期预后、预后不良危险因素及其预测效能

目的分析携带载脂蛋白ε4基因脑出血患者的短期预后、预后不良危险因素及其预测效能。方法选取脑出血患者175例,携带ApoEε4基因43例(ApoEε4基因组)、未携带ApoEε4基因132例(非ApoEε4基因组),比较两组入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)、国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。再根据出院后90天改良Rankin量表(mRS)评分分为预后良好组91例和预后不良组84例,比较两组携带ApoEε4基因者的病例数。采用Logistic回归分析脑出血患者短期不良预后独立影响因素,ROC评估独立影响因素对脑出血短期不良预后的预测效能。结果ApoEε4基因组、非ApoEε4基因组入院时GCS评分分别为9(4~13)、12(9~14)分,两组比较,Z=-2.27,P=0.023;NIHSS评分分别为17(11~35)、12(6~19)分,两组比较,Z=-2.736,P=0.006。预后不良组携带ApoEε4基因者31例(36.9%)、预后良好组携带ApoEε4基因者12例(13.2%),两组比较,P<0.01。Logistic回归分析显示,ApoEε4基因、中性粒细胞(NEU)为脑出血不良预后的独立危险因素(P均<0.05)。ApoEε4基因预测脑出血不良预后的ROC下面积为0.619(95%CI:0.535~0.702,P=0.007),灵敏度、特异度分别为36.9%、86.8%;ApoEε4、NEU联合检测对脑出血短期不良预后预测的ROC下面积为0.724(0.649~0.799,P<0.001),灵敏度、特异度分别为53.6%、82.4%。结论携带载脂蛋白ε4基因脑出血患者的短期预后差。ApoEε4基因、NEU水平升高是脑出血患者短期不良预后的危险因素。ApoEε4基因对脑出血短期不良预后有一定的预测效能,联合ApoEε4基因和入院时NEU水平对脑出血患者的预后预测效能更佳。

基于metaPRS与APOEε4优化轻度认知障碍遗传风险统计建模策略的应用研究

背景轻度认知障碍(MCI)是干预和延缓痴呆进展的重要阶段,既往研究发现MCI与遗传因素存在紧密关联,且载脂蛋白E(APOE)ε4是医学界公认的MCI重要风险等位基因。由于缺少MCI的全基因组关联研究(GWAS)汇总数据,当前普遍以阿尔茨海默病(AD)的GWAS汇总数据作为Base数据集来计算MCI的多基因风险评分(PRS),致使MCI的PRS遗传风险预测效果并不理想。目的本研究以多基因遗传风险综合评分(metaPRS)与APOEε4作为重要预测因子,从广义线性模型与机器学习角度,探索并优化MCI的遗传风险统计建模策略。方法计算MCI的12个亚表型PRS,并利用弹性网状Logistic回归模型将其整合为MCI的metaPRS。利用年龄矫正的APOEε4效应量计算APOEε4加权总和(SCORE_(APOE))。以metaPRS、SCORE_(APOE)及基本人口学信息(年龄、性别、受教育程度)构建不同的预测因子纳入策略,以XGBoost、GBM、Logistic回归及Lasso回归作为统计建模方法,采用AUC及F-measure评价MCI遗传风险统计建模的预测效果。结果metaPRS与SCORE_(APOE)对于MCI的遗传风险有较高的预测价值,纳入metaPRS、SCORE_(APOE)及基本人口学信息(年龄、性别、受教育程度)后,各个统计建模方法的预测效果为:XGBoost(AUC=0.69,F-measure=0.88),GBM(AUC=0.76,F-measure=0.87),Logistic回归(AUC=0.77,F-measure=0.89),Lasso回归(AUC=0.76,F-measure=0.92)。结论在样本量为325(<500)的情况下,以metaPRS、SCOR_(EAPOE)与基本人口学信息为预测因子,以Lasso回归为统计建模方法的MCI遗传风险预测效果最好。本研究为MCI等复杂疾病的遗传风险统计建模提供了新的思路与视角。

APOE ε4等位基因与尿AD7c-NTP联合检测在阿尔茨海默病早期诊断中的价值

目的探讨载脂蛋白ε4(APOE ε4)等位基因与尿阿尔茨海默病(AD)相关神经丝蛋白(AD7c-NTP)联合检测在AD早期诊断中的价值。方法根据精神疾病诊断与统计手册(DSM-Ⅳ)和美国国立神经病、语言交流障碍和卒中研究所-老年性痴呆及相关疾病学会(NINCDS-ADRDA)有关AD的诊断标准,将临床诊断疑似AD患者156例归为疑似AD(PAD)组,另选120例健康者作为对照组。分别检测各组APOE ε4等位基因频率和尿AD7c-NTP含量。结果 1APOE ε4等位基因表达频率在PAD组显著高于对照组(P<0.01);2尿AD7c-NTP在PAD组中的含量较对照组显著升高(P<0.01);3APOE ε4与AD7c-NTP联合检测具有较好的诊断价值。结论 APOE ε4等位基因与尿AD7c-NTP联合检测是监测及诊断AD早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值,为AD早期诊断及疗效监测提供参考。

载脂蛋白Eε4等位基因对阿尔茨海默病患者认知功能和P300的影响

目的:研究载脂蛋白E(ApoE)ε4等位基因对阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)患者总体认知功能和P300的影响。方法:选取做过P300检查和ApoE基因分析的所有轻中度AD患者20例作为研究对象,根据是否携带ApoEε4等位基因分为携带组8例,非携带组12例。对两组间简明精神状态检查(MMSE)成绩和P300潜伏期(P300peaklatency,P3PL)的差异进行分析,并进一步分析了年龄、MMSE成绩和P3PL之间的相关性。结果:ApoEε4等位基因携带组平均年龄高于非携带组犤(81±4)比(77±4)岁,t=2.19,P=0.0419犦,MMSE成绩低于非携带组犤(19.5±2.2)比(21.6±1.8)分,t=2.34,P=0.0309犦,P3PL表现出延长的趋势犤(386±21)比(360±30)ms,t=2.12,P=0.0481犦。但年龄与MMSE之间(r=-0.4013,P=0.0795)以及年龄和P3PL之间(r=0.3861,P=0.0927)均无相关性,MMSE对P3PL也无显著性影响(r=-0.0484,P=0.8396)。结论:AD患者中,ApoEε4等位基因携带者认知功能衰退更明显,并且其P3PL也明显延长,说明不同的ApoEε4表现型可能具有不同的认知和P300表现模式。

绝经后妇女长期低剂量激素替代疗法的研究——II.对apoEε4基因携带者海马的保护作用

目的观察阿尔兹海默病（AD）危险因子apoEε4基因型绝经后妇女长期低剂量激素替代疗法（HRT）对血浆性激素水平、脑海马体积和认知功能的影响。方法筛选50-87岁北京协和医院女职工，分为HRT组（83例）和对照组（99例），提取样本DNA后，采用聚合酶联反应（PCR）-限制性内切酶多型性（RFLP）法测定apoE基因型；酶联免疫法测血浆雌二醇（E2）、孕激素（P）和睾酮（T）水平；磁共振成像（MRI）技术，比较两组间脑海马体积占全脑容量百分比；采用WHO-加利福尼亚大学（UCLA）词语学习（CVLT）、逻辑记忆（LM）、复杂图形（FC）、词语流畅性（VF）、结构实例（CP）、数字广度（DS）评定方法共六项之和为认知总分（LSMEAN）。结果HRT组与对照组apoE基因型和等位基因分布无差异。ε4基因携带者E2水平（pmol/L）HRT组[14例，（79.48±21.55）]明显高于对照组[11例，（37.04±7.96）]（P〈0.05）；P和T未见明显差异。LSMEAN在两组间无显著差异；但海马（左、右及两侧之和）体积占全脑体积之比HRT组（0.406±0.028）明显大于对照组（0.369±0.031）（P〈0.01）。结论HRT可明显抑制ApoEε4基因携带者海马的萎缩，提示长期小剂量HRT对携带ε4绝经后妇女预防AD具有重要意义。

ApoEε4基因结合sMRI对不同亚型轻度认知功能障碍的研究

目的评价4种不同轻度认知障碍亚型之间人口统计学、心理特点、结构性磁共振成像(structural magnetic resonance imaging,s MRI)及载脂蛋白Eε4(apolipoprotein Eε4,ApoEε4)的特点。方法对94例轻度认知障碍的老年人,与53例认知程度正常老年人作为对照组进行评价。4种轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)基于神经心理学表现分类,颞叶内侧面萎缩(medial temporal lobe atrophy,MTA)和脑白质高信号(white matter hyperintensity,WMH)通过s MRI评估。另外,研究简易精神状态检查表(Minimum Mental State Examination,MMSE)评分、MTA评分、WMH和MCI亚型间与ApoEε4关系。通过s MRI评估。结果在不同亚型的MCI及对照组之间其MMSE评分、MTA差异有统计学意义,遗忘型轻度认知障碍(amnestic MCI,a MCI)亚型与非遗忘型轻度认知障碍亚型(non-amnestic MCI,na MCI)相比,MTA评分明显增加。然而,WMH无明显差异。ApoEε4基因在a MCI及na MCI亚型中显著增加。结论 MCI不同亚型可显示生物异质性,s MRI结合ApoEε4可以协同预测MCI向痴呆的发展。

ApoEε4与ACE DD等位基因对缺血性脑卒中患者执行功能的影响

目的探讨ApoEε4、ACE DD等位基因对缺血性脑卒中患者执行功能的影响。方法应用聚合酶链反应(PCR)对480例首发缺血性脑卒中患者的ApoE、ACE基因进行分析,应用威斯康星卡片测验系统(WCST)和执行缺陷综合征的行为评价(BADS)方法测试患者的执行功能。结果携带ApoEε4等位基因者WCST 6项评分、BADS各单项评分及总标准分均低于非携带者,差异均有统计学意义(P<0.05);携带ACE DD等位基因者WCST6项评分、BADS各单项评分及总标准分均低于非携带者,差异均有统计学意义(P<0.05)。但同时携带ApoEε4和ACE DD等位基因者WCST评分及BADS评分与单独携带ApoEε4或ACE DD基因者比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ApoEε4、ACE DD等位基因可增加缺血性脑卒中患者执行功能损伤的风险。

人IgE Cε3-Cε4蛋白的表达、复性、纯化及初步鉴定

目的获得IgE Fc段的Cε3-Cε4重组蛋白(E34)。方法以RT-PCR技术扩增IgE Cε3-Cε4(E34)cDNA片段,构建原核表达载体。以其转化大肠杆菌BL-21,诱导表达主要以包涵体形式存在的目的蛋白。经复性、纯化后,用Wes-tern blot和ELISA法初步鉴定所获E34蛋白与抗人IgE mAb的结合能力。结果对克隆的E34基因片段测序表明,与已报道的序列相一致。获得的可溶性E34蛋白经SDS-PAGE鉴定显示,其相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致。Westernblot和ELISA法进一步证实,E34蛋白能够被鼠抗IgE mAb特异性识别。结论成功地构建了pET28a(+)-E34表达载体,并获得能被抗IgE mAb特异性识别的可溶性蛋白E34,为下一步的工作打下了基础。

APOE ε4等位基因与尿AD7c-NTP联合检测在AD早期诊断中的初步研究

目的探讨APOEε4等位基因与尿AD7c-NTP联合检测在阿尔兹海默病(AD)早期诊断预防中的价值。方法根据中国精神障碍分类与诊断标准第三版(CCMD-3)有关精神分裂症及轻度阿尔兹海默病的诊断标准,选取76例临床诊断疑似AD患者(PAD组),另选90例健康者作为对照组。对比两组APOEε4等位基因频率和尿AD7c-NTP含量对AD的诊断价值。结果 (1)APOEε4等位基因表达频率在PAD组显著高于对照组(P≤0.05);(2)尿AD7c-NTP在PAD组中的含量较对照组显著升高(P≤0.01);(3)对APOEε4、AD7c-NTP及二者联合检测进行比较发现,APOEε4对AD诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为:44.64%、88.33%、78.13%、63.10%、0.33;尿AD7c-NTP诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为:78.57%、83.33%、81.48、80.65%、0.62;APOEε4与AD7c-NTP联合检测的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为:91.18%、91.55%、83.78%、95.58%、0.82。结论 APOEε4等位基因与尿AD7c-NTP联合检测是监测及诊断AD早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值,宜作为AD易发人群鉴别和早期诊断的生物标记物。

尿AD7c-NTP水平与载脂蛋白E ε4等位基因联合检测对轻度认知功能障碍的诊断价值

目的探讨尿AD7c-NTP水平与载脂蛋白Eε4等位基因(ApoEε4)联合检测在轻度认知功能障碍(MCI)的诊断价值。方法检测54例MCI患者(MCI组)及60例健康者(正常对照组)的尿AD7c-NTP水平和ApoEε4表达。结果 MCI组尿AD7c-NTP水平及阳性率显著高于正常对照组(均P<0.01)。MCI组ApoEε4阳性率显著高于对照组(P<0.05)。联合检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及约登指数均高于尿AD7c-NTP检测和ApoEε4检测。结论尿AD7c-NTP水平与ApoEε4联合检测是鉴别及诊断MCI早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值。

采用量子点标记的寡核苷酸探针检测ApoEε4等位基因

目的探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值。方法采用以CdSe为核心的量子点与ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针,对ApoEε4-PT7-PL质粒和正常人标本进行Southern blot检测,并与地高辛标记方法作相应比较。结果量子点与地高辛标记显影结果完全一致。结论量子点在Southern blot检测成像中表现出优良特性,可望替代传统标记物。

ApoEε4等位基因与阿尔茨海默病海马萎缩之间关系的研究

目的 :探讨ApoEε 4等位基因与AD病人海马萎缩的关系。方法 :利用MRI和PCR -FRLP方法对 34例AD病人海马体积和ApoE基因型进行测定 ,比较 17例含ApoEε4基因型和 17例不含ApoEε4基因型AD病人之间海马体积的差异性 ,分析AD病人海马萎缩与ApoEε4等位基因数目间的关系。结果 :含ApoEε4基因AD病人组海马体积和MMSE评分明显低于不含ApoEε4基因AD病人组 (P <0 0 5 ) ;ApoEε4基因数目与AD病人海马体积呈负性相关关系 (rs=- 0 2 10 ,P =0 0 0 2 4 ) ,即含ApoEε4等位基因数目越多 ,AD病人海马萎缩愈明显。结论 :ApoEε4等位基因与AD病人海马萎缩有关 ,它可能在AD的病理机理中扮演了一定的角色。

ApoEε4等位基因对认知正常老年人脑微观结构影响的扩散峰度成像研究

目的通过应用磁共振扩散峰度成像(diffusion kurtosis imaging,DKI)技术评估认知正常的老年人中携带和非携带载脂蛋白Eε4(apolipoprotein Eε4,ApoEε4)等位基因者脑微观结构的差异,进而探讨ApoEε4等位基因对脑微观结构的影响。方法收集18例正常老年人口腔黏膜,检测是否携带ApoEε4基因;同时对其行常规核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)平扫及DKI扫描,分别于双侧额、顶、颞叶,后扣带回、胼胝体压部及海马测量平均峰度(mean kurtosis,MK)值及各项异性分数(fractional anisotraphy,FA)值,采用两样本t检验对携带与非携带ApoEε4基因所得的参数进行比较。结果认知正常老年人携带ApoEε4等位基因组与非携带组比较,颞叶及海马MK值减低,且差异有统计学意义(P<0.05);海马的FA值减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论认知正常老年人携带ApoEε4等位基因的受试者脑微观结构改变更加明显,DKI能够早期发现该等位基因对于脑微观结构改变的影响。

载脂蛋白Eε4等位基因在阿尔茨海默病诊断及治疗中研究进展

阿尔茨海默病（AD）是一种严重的神经退行性疾病,临床上以记忆损失和认知功能下降为主,是老年痴呆的常见形式。据统计,全球65岁以上老年人有13%发生AD,而85岁以上AD患病率高达45%,预计到2050年,全世界将有8 000万人遭受AD困扰。

载脂蛋白Eε4等位基因与轻度认知损害患者认知功能的缺损有关

目的探讨轻度认知损害(M C I)患者认知功能改变以及认知功能改变和载脂蛋白E(A poE)ε4等位基因的关系。方法应用神经心理学方法评估患者的认知功能状况,应用分子生物学的方法进行APOE的基因型检测。结果①除记忆力显著下降外,M C I组定向力、语言能力、执行等能力也呈下降趋势。②M C I组ε4等位基因出现的频率远高于正常老年组(P<0.01)。③A poEε4的携带者的认知功能的总评分显著低于非A poEε4携带者(P<0.001)。除记忆力表现出显著下降外,A poEε4携带组的语言能力、执行也呈下降趋势(P<0.05)。结论轻度认知功能损害患者的认知功能出现改变,且A poEε4等位基因出现的频率显著高于正常老年组。A poEε4等位基因与老年人认知功能的下降相关。

ApoEε4基因对轻度认知障碍和阿尔茨海默病脑功能改变的静息态血氧水平依赖功能磁共振成像研究

阿尔茨海默病（AD）是一种起病隐匿的进行性发展的中枢神经系统退行性疾病。轻度认知障碍（MCI）是尚不达痴呆诊断标准的阶段。研究表明,每年约10%~15%的MCI进展为AD,早期检测MCI对AD的诊断至关重要。

Cε3-Cε4蛋白寡核苷酸适配子结合位点的预测与筛选

采用NPDock程序对Cε3-Cε4蛋白与其核酸适配子A1的结合位点进行了预测与筛选,筛选出A1与Cε3-Cε4蛋白结合的关键位点.同时,根据蛋白与DNA片段复合物结合界面中氨基酸残基和碱基统计分析发现,结合界面氨基酸富集碱基G能力最强,富集碱基T和C能力次之.本文建立了以NPDock程序虚拟对接为基础的高效适配子优化方法,为相关研究提供了实验参考.

Cε3-Cε4结合肽筛选及鉴定

为了获得免疫球蛋白E(IgE)特异性结合肽,采用固相筛选法,以Cε3-Cε4为靶蛋白,利用噬菌体随机多肽展示技术进行筛选,4轮筛选后,经ELISA鉴定获得19个阳性单克隆噬菌体,阳性率达38%,测序并翻译后共获得11个结合肽.竞争抑制性实验证明P7,P13,P20与Cε3-Cε4蛋白的结合能力较强,细胞水平分析表明:结合肽P7,P20可阻止IgE与其受体结合.本研究将为进一步探索IgE结合肽生物学功能奠定基础,并为设计治疗变态反应性疾病的小分子药物提供参考.

转人载脂蛋白Eε4和突变淀粉前体蛋白基因小鼠的建立

将人载脂蛋白 (ApoEε4 )转基因鼠和突变前体蛋白 (APP)转基因小鼠交配 ,以建立h ApoEε4 /突变APP双转基因小鼠。共产出仔鼠 2 3只 ,经PCR初步筛选 ,并用Southern杂交对阳性小鼠基因组DNA作进一步鉴定 ,得到 3只双转基因小鼠。该双转基因鼠的建立为进一步阐明ApoEε4的致病作用以及对AD的研究提供了理想的研究模型。