人T细胞受体ζ链基因在昆虫细胞中的表达

目的 :克隆人T细胞受体 (TCR) ζ链基因 ,运用昆虫杆状病毒系统表达该蛋白。方法 :用RT PCR从人外周血单个核细胞 (PBMC)中克隆TCRζ链cDNA ,构建到昆虫杆状病毒系统专用的Transfer载体中 ,并与杆状病毒共转染昆虫sf9细胞。用SDS PAGE电泳和用小鼠抗人ζ链蛋白的单抗在流式细胞仪中鉴定重组蛋白的表达。 结果 :克隆的人TCRζ链cD NA插入昆虫杆状病毒载体 ,并在昆虫sf9细胞中特异地表达了蛋白。表达量约为细胞裂解上清液总蛋白的 11%。经SDS PAGE分析 ,其分子量大小与预期的重组ζ链蛋白一致。用胞内标记流式细胞仪检测证实 ,转染重组杆状病毒的昆虫细胞含有人的 ζ链蛋白。 结论 :从人PBMC中成功克隆了T细胞受体 ζ链的基因 ,并在昆虫细胞中获得高效表达。用生物工程技术获得TCRζ链蛋白有利于深入研究其生物学功能。