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题名粪肠球菌内源性质粒的序列分析及其穿梭载体的构建
被引量:2
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作者
袁林
曾静
郭建军
魏国汶
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机构
江西省科学院微生物研究所
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出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第23期141-149,共9页
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基金
国家自然科学基金地区科学基金项目(32060772)
江西省杰出青年基金项目(20202ACBL215001)
江西省重点研发计划项目(20192BBFL60020)。
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文摘
为了对粪肠球菌EXW27的内源性质粒pXW进行DNA序列的测定和分析,并基于其最小复制子构建大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体。本研究从具有优良益生特性的粪肠球菌EXW27中分离得到了内源性质粒pXW,对其进行了DNA序列的测定及分析,然后利用质粒pXW的复制子构建大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体,并研究大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体的宿主范围、转化效率和稳定性。结果表明该质粒大小为8617 bp,GC含量为33.29%,包含8个ORF,推定为θ型复制质粒。质粒pXW在粪肠球菌EXW27中拷贝数最高可达32.09±0.93,表明质粒pXW属于高拷贝数质粒。本研究确定了质粒pXW的最小复制子,并基于该复制子构建了大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体pXWM1。该穿梭载体具有较宽的宿主范围,可成功转化至不同类型乳酸菌,转化效率介于1.96×10^(2)~8.96×10^(4) CFU/μg (质粒DNA)之间,质粒丢失率介于28.54%~54.17%之间。本研究成功构建了一个具有宽宿主范围、高转化效率以及高稳定性的大肠杆菌-粪肠球菌穿梭载体,为乳酸菌基因操作提供了新工具。
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关键词
粪肠球菌
内源性质粒
θ型复制
穿梭载体
大肠杆菌
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Keywords
Enterococcus faecalis
endogenous plasmid
θ-type replication
shuttle vector
Escherichia coli
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分类号
Q933
[生物学—微生物学]
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