κ-阿片受体激动剂U50488H通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环致大鼠急性肺损伤的研究

目的探讨κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H是否通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环(CPB)引发的大鼠急性肺损伤(ALI)。方法将24只成年雄性清洁级SD大鼠(50~450 g)随机分为Sham组(假手术)、CPB组(CPB)和U50488H组(KOR激动剂+CPB),每组8只。U50488H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H。分别于CPB后0、1、2 h行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(A-aDO_(2))和呼吸指数(RI)。3组大鼠均在停CPB后2 h处死,取完整右肺下叶。采用重力法测定血管外肺水(EVLW),采用苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆酯多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-4(IL-4)含量。采用免疫荧光法测定大鼠肺组织iNOS和CD206水平。结果与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW和TNF-a、血浆IL-6水平及肺组织iNOS表达增高,血浆IL-4水平和肺组织CD206表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB后0、1、2 h,CPB组的A-aDO_(2)和RI、LPS高于Sham组,U50488H组的A-aDO_(2)和RI、LPS低于CPB组,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB组大鼠出现严重肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50488H组肺损伤显著减轻。结论KOR激动剂U50488H可促进CPB后大鼠肺巨噬细胞向M2表型极化,减轻炎症反应,增加抗炎因子释放,进而减少CPB后ALI的发生。

κ-阿片受体激动剂对体外循环大鼠肺细胞焦亡和NLRP3炎症小体的影响

目的通过观察κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H对心肺转流(CPB)大鼠肺组织NLRP3炎症小体和细胞焦亡的影响,探讨U50488H减轻CPB致急性肺损伤(ALI)的可能机制。方法24只成年雄性清洁级SD大鼠,350~450 g,随机分为假手术组(Sham组)、CPB组和CPB+KOR激动剂组(U50448H组),每组8只。U50448H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H。分别于CPB后0 h、1 h和2 h各时点行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(AaDO2)和呼吸指数(RI)。三组大鼠均在停CPB后2 h时处死,取完整右肺下叶,采用重力法测定血管外肺水(EVLW),HE染色观察肺组织形态学变化。采用ELISA方法检测血浆脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6和IL-4的含量,Western blot测定肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸酶前体(pro-Caspase-1)蛋白的表达。结果CPB组大鼠在CPB后0 h、1 h和2 h各时点的AaDO2和RI、LPS明显高于Sham组(P<0.05);U50488组三个时点的AaDO2和RI、LPS明显低于CPB组(P<0.05)。与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW、血浆TNF-a和IL-6、肺组织GSDMD-C、GSDMD-N和NLRP3、pro-Caspase-1表达明显增高,血浆IL-4水平明显降低,其差异有统计学意义(P<0.05);而U50488组上述指标与Sham组无明显差异(P>0.05)。CPB组大鼠出现了严重的肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50448H组肺损伤明显减轻。结论KOR激动剂U50488H对CPB所致ALI期间NLRP3炎性小体诱导的细胞焦亡具有抑制作用,从而减轻了CPB后的肺损伤。

κ-阿片和肾上腺素受体激动在缺血再灌注心脏中的交互作用

目的 :探讨心脏缺血及再灌注 (I- R)期间 ,阿片受体和肾上腺素受体激活在跨膜信息传递中的交互作用。方法 :采用离体心脏 L angendroff模型 ,全心停灌 2 0 min复灌 30 min造成 I- R。在心脏 I- R期间用κ-阿片肽受体激动剂 U5 0 4 88h(10 -6mol/ L)和β1肾上腺素受体激动剂 NE(10 -7mol/ L )进行干预。结果 :1NE单独作用与 I- R对照组左室收缩压 (L VSP)在心脏缺血起始 ,复灌 10、2 0及 30 min分别为 [(86 .31± 17.86 vs4 8.0 5± 15 .0 3) % ,P<0 .0 5 ]、[(136 .6 2± 16 .33vs93.33± 15 .4 5 ) % ]、[(12 7.2 3± 17.33vs73.39± 12 .92 ) % ]、[(15 3.4 8± 18.31vs6 8.11± 13.18) % ,均 P<0 .0 1];NE和 U5 0 4 88h一起灌流时及 U5 0 4 88h单独作用时不明显。 2 U5 0 4 88h与 NE同时灌流心律失常评分仅在复灌 10～ 2 0 min(0 .70± 0 .4 8)较单纯 I- R组 (1.6 4± 1.19)明显减小 (P<0 .0 5 ) ,单独 NE或 U5 0 4 88h在各时间段心律失常评分与单纯 I- R组比差别无显著性 (P>0 .0 5 )。 3在心脏缺血后再灌注 10、2 0和30 min时 ,U5 0 4 88h单独作用以及与 NE同时应用心率分别是 (185 .71± 5 5 .33)和 (197.2 2± 2 6 .97) ,(181.86±4 3.0 3)和 (195 .5 6± 5 8.6 8) ,(195 .0 0± 17.35 )和 (179.

mito K_(ATP)和κ-阿片受体介导肢体缺血后处理对抗大鼠脑缺血/复灌损伤

目的:观察肢体缺血后处理(LIPC)在大鼠局灶性脑缺血/复灌损伤中的神经保护作用及其作用机制。方法:将大鼠随机分为6组:空白对照组,单侧LIPC组,双侧LIPC组(bLIPC),bLIPC+mito KATP阻断剂5-hydroxyde-canoate(5-HD)预处理组,bLIPC+κ-阿片受体拮抗剂nor-binaltorphimine(nor-BNI)预处理组,bLIPC+双侧后肢体外循环组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,术后进行神经系统症状评分,血浆强啡肽和脑啡肽水平测定,大脑梗死面积测定。结果:单侧LIPC能改善大鼠局灶性脑缺血/复灌损伤后的神经系统功能评分(P<0.05),并减少大脑梗死面积(P<0.01);而双侧LIPC能显著提高大鼠局灶性脑缺血/复灌损伤后的神经系统功能评分,并显著减少大脑梗死面积(P<0.01),比单侧LIPC的作用更为明显(P<0.05)。双侧LIPC后5、15、30min,1和2h这五个时间点,血浆强啡肽水平显著增高(P<0.01),12和24h这两个时间点恢复至正常水平;而血浆脑啡肽水平的改变与双侧LIPC前比较无显著差异(P>0.05)。nor-BNI预处理(25nmol)和5-HD预处理(10mg/kg)均消除了双侧LIPC所致的神经系统功能评分增加和大脑梗死面积减少(P<0.01)。结论:LIPC在大鼠局灶性脑缺血/复灌损伤中具有显著的神经保护作用,其作用可能与LIPC诱导内源性阿片激动剂释放和激活mitoKATP有关。

κ-阿片受体激动剂U50488H对缺血/再灌注损伤大鼠冠状微循环和室性心律失常的影响

目的探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对缺血/再灌注损伤大鼠冠状微循环和室性心律失常的影响,明确其对缺血/再灌注心肌是否有直接的保护作用。方法32只大鼠按照随机原则分为四组,每组8只,分别为假手术组(A组)、缺血/再灌注(I/R)组(B组),U50488H+I/R组(C组)和Nor-BNI(特异性阿片受体阻滞剂)+U50488H+I/R组(D组)。实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠缺血/再灌注模型,观察各组大鼠的心肌超微结构的改变和对室性心律失常的影响。结果①C组与B、D组比较,微血管显著扩张(P<0.05);②C组与B、D组比较,室性心律失常的发生率明显下降。结论U50488H可通过激活心脏κ-阿片改善缺血/再灌注大鼠的微循环、降低大鼠心肌缺血/再灌注室性心律失常的发生率,从而发挥心脏直接保护作用,该作用也可被选择性κ-阿片受体阻滞剂Nor-BNI所拮抗。

电脱耦联延迟参与κ-阿片受体兴奋引起的心肌保护作用

目的:研究κ-阿片受体兴奋诱导的心肌保护作用是否与其对心肌缺血期间电耦联的影响有关,并探讨这种作用的可能机理。方法:采用雄性SD大鼠心脏Langendorff离体灌流模型。①全心停灌30min,复灌2h,观察不同浓度κ-阿片受体特异激动剂U50,488H(10-7、10-6、3×10-6、和10-5mol/L)及其特异阻断剂nor-BNI(5×10-6mol/L)和线粒体ATP敏感性钾离子通道特异阻断剂5-HD(10-4mol/L)对缺血/复灌心肌的作用。测量指标:以分光光度计在490nm波长下测定氯化三苯基四氯唑(TTC)与活细胞反应的产物formazan含量的方法测定心肌细胞活性、测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以及心室内压;②全心停灌70min,应用四电极法观察不同浓度U50,488H、nor-BNI和5-HD对缺血期间心肌整体阻抗和电脱耦联参数(电脱耦联时间、平台时间、电脱耦联最大速率和阻抗倍数)的影响。结果:①U50,488H可诱导心肌保护作用,并呈浓度依从性,与对照组比较,表现为for-mazan含量增加,LDH释放减少,心室功能恢复增强;②经较高浓度U50,488H(10-6、3×10-6、和10-5mol/L)预处理后,电脱耦联时间和平台时间均延迟,电脱耦联最大速率降低;③U50,488H在10-7-10-5mol/L范围内对电脱耦联时间的延迟与其对formazan含量增加和LDH释放减少的作用呈线形相关;④U50,488H对formazan含量增加、LDH释放减少和电脱耦联时间和平台时间延迟的作用均可被nor-BNI或5-HD所阻断。结论:κ-阿片受体兴奋对电脱耦联的延迟作用与其诱导的心肌保护作用有关,这种作用受到线粒体ATP敏感性钾离子通道的调节。

联合应用α2-肾上腺素能受体激动剂和κ-阿片受体激动剂对复苏后家兔心肌保护的实验研究

目的观察α2肾上腺素能受体激动剂（米伐西醇，mivozer01）和κ-阿片受体激动剂（U50488H）联用是否减轻复苏后心肌损伤，改善复苏后心功能不全。方法采用体外致颤法建立家兔心搏骤停模型，室颤持续3min后复苏，30只兔随机分为五组：肾上腺素组（E）、血管加压素组（V）、U50488H组（U）、米伐西醇组（M）和米伐西醇组＋U50488H组（M＋U），于诱发室颤前15min、复苏后30、60、120、180、240min，检测心肌损伤标志物肌钙蛋白T（cTnT），并于实验结束时处死动物，光镜观察心肌组织病理学改变。结果①M＋U组cTnT值复苏后各时间点明显低于其余四组，与两常规复苏组E、V组相比差异非常显著（P〈0．01），与M组、U组差异显著（P〈0．05）。U组与E、V组在各时间点有差异（P〈0．05）。②光镜下心肌组织病理改变显示，常规复苏组（E、V组）心肌结构损伤程度最重，M组次之，U组更轻，而M＋U组明显轻于上述各组。结论联用α2-肾上腺素能受体激动剂（米伐西醇）和κ-阿片受体激动剂（U50488H）可减少心肺复苏后早期cTnT的释放．减轻心肌病理损害．改善复苏后心功能不全。

κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注损伤的直接保护作用

目的:探讨选择性κ-阿片受体激动剂U50488H对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤冠状微循环和心肌超微结构的影响,明确其对I/R心肌是否具有直接保护作用.方法:将32只大鼠随机分为4组,即假手术组,I/R组,U50488H+I/R组和Nor-BNI(特异性阿片受体阻断剂)+U50488H+I/R组,每组8只.实验组通过开胸结扎冠脉前降支制备大鼠I/R模型,观察各组大鼠心肌超微结构和冠状微循环的改变.结果:①U50488H+I/R组与I/R组和Nor-BNI+U50488H+I/R组比较,微血管显著扩张(P<0.05),毛细血管腔内血细胞明显减少,心肌间质中偶见红细胞.②U50488H+I/R组与I/R组和Nor-BNI+U50488H+I/R组比较,心肌超微结构损伤明显减轻.结论:U50488H可通过激活心脏κ-阿片受体,明显改善大鼠I/R心肌的微循环,减轻心肌超微结构的损伤,从而发挥对心脏的直接保护作用,该作用可被选择性的κ-阿片受体阻断剂Nor-BNI所拮抗.

κ-阿片受体在抑制心肌肥厚中的作用

目的与方法 :在儿茶酚胺诱导的大鼠心肌肥厚及培养的心肌细胞中 ,观察 κ-阿片受体选择性激动剂 U5 0 ,4 88H对心肌肥厚及心肌细胞生长的作用。结果 :大鼠静脉注射异丙肾上腺素 2周 (3mg· kg- 1· d- 1 )发生心肌肥厚 ,表现为心脏重量指数明显增加 ,光镜和电镜显示明确的肥厚性组织病理学改变。 U5 0 ,4 88H可明显改善这些异常改变。且对去甲肾上腺素引起的促心肌细胞生长具有明显的抑制作用。结论

κ-阿片受体激动剂防治低氧性肺动脉高压的研究进展与展望

低氧性肺动脉高压(HPH)尚缺乏较为理想的治疗方法。预防内皮功能失调和抑制平滑肌细胞的增殖是防治HPH新的潜在策略。κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50、488H既可以内皮依赖性地舒张正常大鼠的肺动脉又可显著舒张HPH大鼠的肺动脉,其作用机制与电压依赖性钾通道(KV通道)及一氧化氮(NO)途径密切相关,预防性给予U50、488H可显著升高HPH大鼠血液及肺组织NO水平的同时,降低内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,显著改善低氧诱导的内皮功能失调,另一方面发现U50、488H能有效降低HPH大鼠的平均肺动脉压(mPAP),并能明显减轻HPH大鼠的肺血管重建和右心室肥厚程度。另外,U50、488H可抑制低氧下的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖,这可能是其抑制肺血管重建的原因,提示U50、488H对大鼠HPH具有明确的防治作用。U50、488H内皮依赖性的舒张肺动脉、降低肺动脉压、改善内皮功能失调及抑制PASMC增殖等作用均由κ-OR所介导,提示κ-OR有可能成为临床防治HPH新的药理学靶点。

κ-阿片受体和缝隙连接蛋白Cx43与心律失常的关系

心肌缺血时,交感神经兴奋可激活β受体介导cAMP依赖的信号途径导致心肌细胞内的钙升高,以及Cx43的结构和功能改变;而Cx43蛋白的改变已被证明是导致心律失常的重要原因。研究发现,κ-阿片受体激活后,对缺血心肌具有明确的保护作用和抗缺血性心律失常的作用,但κ-阿片受体是否可能通过调节Cx43蛋白进而产生抗心律失常的作用几无报道。本文就κ-阿片受体以及Cx43蛋白与心律失常的关系做一综述。

κ-阿片受体激动剂U50488H对内皮素-1所致大鼠室性心律失常的影响

目的:研究κ-阿片受体选择性激动剂U50488H是否可通过调节内皮素-1(ET-1)表达的水平,进而影响c-Src蛋白酪氨酸激酶(PTK)的表达以实现抗心律失常的作用。方法:将42只大鼠随机分为7组(每组6只):正常对照组、U50488H组、U50488H+nor-BNI组、nor-BNI组、ET-1组、ET-1+U50488H组及ET-1+U50488H+nor-BNI组。左心室及股动脉插管观测大鼠心率(HR)、动脉压(ABP)、左心室内压(LVP)及心脏收缩和舒张功能(±LVdp/dtmax)等血流动力学指标,并计算大鼠室性心律失常的发生情况和大鼠的死亡率。实时荧光定量PCR检测ET-1及ET-1受体(ETRA)mRNA表达;Western blot测定ETRA及下游分子c-Src PTK的表达水平。结果:U50488H可显著抑制ET-1所致大鼠ABP、LVP以及心脏收缩、舒张功能的升高,并可显著降低ET-1所致大鼠室性心律失常的发生率和死亡率(P<0.01),以及抑制心肌ET-1 mRNA的水平(P<0.01)。给予ET-1后,磷酸化(P)-c-Src PTK的表达水平升高,U50488H可显著降低c-Src PTK的水平以及ET-1引起的P-c-Src PTK表达的水平(P<0.05),此作用可被κ-阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断。结论:κ-阿片受体选择性激动剂U50488H可抑制ET-1所致大鼠室性心律失常发生。该作用可能与抑制ET-1及其下游分子c-Src PTK的表达有关。

布托啡诺对大鼠κ-阿片受体mRNA表达的影响

目的观察鞘内注射布托啡诺对大鼠中枢神经系统κ-阿片受体mRNA(κ-mRNA)表达的影响。方法 96只成年雄性SD大鼠随机分为布托啡诺10、20、30μg组(L、M、H组)和生理盐水组(N组),每组24只。观察鞘内注射不同剂量布托啡诺或生理盐水后甩尾潜伏期(TFL)的变化,检测脊髓、脑干及脑皮质κ-mRNA的表达。结果鞘内注射布托啡诺具有镇痛作用,并呈时间和剂量依赖性地增加脊髓、脑干、脑皮质中的κ-mRNA的表达。结论鞘内注射布托啡诺可促进大鼠脊髓、脑皮质和脑干κ-mRNA的表达。

κ-阿片肽受体激活抑制内皮素-1诱导的心肌细胞肥大与细胞外信号调节激酶通路有关

目的讨论κ-阿片肽受体(kappa-opioid receptor,κ-OR)激活后通过细胞外信号调节激酶通路对内皮素-1(vascular endothelin-1,ET-1)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用。方法体外原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,ET-110 nmol·L^(-1)诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂(U50488H)1μmol·L^(-1)对心肌细胞的作用,并探讨细胞外信号调节激酶1/2特异性抑制剂(U0126)1μmol·L^(-1)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))、百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)5 mg·L^(-1)、κ-OR拮抗剂nor-binaltorphimine(NOR-BNI,1μmol·L^(-1))存在时,κ-OR的激活对心肌细胞肥大的影响及相关机制。心肌细胞的体积应用消化分离法及计算机图像分析系统测定;心肌细胞的心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)的mRNA相对表达利用RT-PCR法测定;心肌细胞ERK1/2的相对表达水平应用Western blot法测定;心肌细胞的形态变化利用相差显微镜观察。结果ET-1可以使心肌细胞体积增大,ANPmRNA表达增多,ERK1/2表达增多;与ET-1(10 nmol·L^(-1))组相比,U50488H(1μmol·L–1)可明显使ET-1诱导的心肌细胞体积变小,ANPmRNA表达减少,ERK1/2表达减少,U0126(1μmol·L^(-1))、Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))与其抑制程度相似,三者差异无显著性;当用U0126(1μmol·L^(-1))、Ro-31-8220(50 nmol·L^(-1))预处理时U50488H(1μmol·L^(-1))的抑制现象部分消失,但当用PTX(5 mg·L^(-1))、NOR-BNI(1μmol·L^(-1))(κ-OR受体拮抗剂)预处理时U50488H(1μmol·L^(-1))的抑制现象基本消失。结论κ-OR激动剂U50488H能抑制内皮素-1诱导的大鼠心肌细胞肥大,其作用机制主要与其能抑制胞外信号调节激酶通路的上游元件PKC的激活有关。

κ-阿片受体激活后通过caveolin-eNOS途径抑制由软脂酸钠诱导的内皮损伤

目的探讨κ-阿片受体在对抗软脂酸钠(sodium palmitate,SP)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用及其作用机制。方法体外培养HUVECs并分为6组即正常对照组、κ-阿片受体激动剂U50,488H组、SP组、SP+U50,488H组、SP+U50,488H+κ-阿片受体阻断剂nor-BNI组、SP+U50,488H+eNOS抑制剂L-NAME组。检测各组细胞生存率、测定各组caveolin-1、eNOS的蛋白表达水平,以及NO的产生及细胞凋亡情况。结果与正常对照组相比,SP组细胞的生存率明显降低(P<0.01),caveolin-1的蛋白表达显著增加(P<0.01),eNOS的活性明显受到抑制(P<0.05),NO生成量大幅下降(P<0.01),细胞凋亡显著增加(P<0.01);而κ-阿片受体激动剂U50,488H可以显著抑制SP的上述作用,使细胞生存率升高(P<0.01),caveolin-1的蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01),eNOS的蛋白表达显著增加(P<0.05),NO生成量显著增多(P<0.01),细胞凋亡明显减少(P<0.01)。U50,488H的作用可被κ-阿片受体阻断剂nor-BNI或NO合酶抑制剂L-NAME所阻断(P<0.05或P<0.01)。结论激活κ-阿片受体能够抑制软脂酸钠诱导的内皮损伤,其机制可能与下调caveolin-1表达,增强eNOS活性有关。

κ-阿片受体信号通路介导针刺抗缺血性心律失常的机制

心肌缺血引起的心肌细胞内钙超载与缺血性心律失常的发生关系密切,因而防止钙超载是减轻心律失常的有效举措。现代医学研究提示,κ-阿片受体(κ-opioid receptor,κ-OR)系统在心肌细胞内钙调节和缺血性心律失常的发生发展中具有重要的病理生理学意义,为临床治疗缺血性心律失常提供了新的靶点。而有关针刺镇痛的研究表明,针刺可增加体内阿片类物质并激活阿片受体,因此针刺极有可能通过作用于κ-OR系统,再经由κ-OR及其受体后信号传导通路,参与介导改善缺血性心律失常的保护作用。本文以κ-OR及其受体后信号传导通路为切入点,提出针刺改善缺血性心律失常机制研究的新思路,以期为缺血性心律失常的防治提供一条安全有效的新途径。

强啡肽/κ-阿片受体系统在痛情绪中作用的研究进展

痛情绪是指痛诱发的情绪和情感体验,目前研究仅发现强啡肽(DYN)/κ-阿片受体(KOR)系统参与调控慢性疼痛所致痛情绪的产生,但神经痛相关痛情绪的具体机制尚不清楚。目前研究认为,促肾上腺皮质激素释放因子和谷氨酸都可能与DYN/KOR系统互相调节,参与神经痛相关痛情绪的调控。此外,DYN/KOR系统对中脑边缘多巴胺系统和腹侧被盖区-伏隔核环路兴奋性的调控作用也可能是神经痛相关痛情绪的机制之一。本文通过综述DYN/KOR系统与情绪相关递质的关系、与痛情绪密切相关的脑区以及与痛感觉和痛情绪的相关信号通路,为整体研究DYN/KOR系统在痛情绪中的作用机制以及临床药物研发提供参考。

κ-阿片受体激动剂U50,488H抑制缺血/再灌注心肌线粒体分裂的作用及机制

目的研究外源性κ-阿片受体激动剂U50,488H对缺血/再灌注心肌线粒体分裂的影响及机制。方法将SD大鼠随机分为6组:假手术(Sham)组,心肌缺血/再灌注(MI/R)组,MI/R+κ-阿片受体激动剂U50,488H(MI/R+U)组,MI/R+κ-阿片受体阻断剂nor-BNI+U50,488H(MI/R+N+U)组,MI/R+磷脂酰激醇3-激酶(pi 3-kinases,PI3K)抑制剂wortmannin+U50,488H(MI/R+W+U)组,MI/R+蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂MK2206+U50,488H(MI/R+M+U)组。血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)试剂盒检测血清CK水平;三苯基氯化四氮唑(triphenyte-trazoliumchloride,TTC)-伊文氏蓝双染检测心肌梗死面积;Western blot检测细胞内磷酸化PI3K、磷酸化Akt(Ser 473)、磷酸化线粒体动力相关蛋白(dynamin-related protein,Drp)1(Ser 637)的表达;透射电镜观察线粒体形态。结果与Sham组相比,MI/R组血清CK水平明显升高(P<0.01),出现明显的心肌梗死(P<0.01),磷酸化PI3K、磷酸化Akt表达增加(P<0.05),磷酸化Drp1表达降低(P<0.01),线粒体分裂明显增加(P<0.01);与MI/R组相比,MI/R+U组血清CK水平明显降低(P<0.01),心肌梗死面积减小(P<0.01),磷酸化PI3K、磷酸化Akt和磷酸化Drp1的表达显著增加(P<0.01),线粒体分裂减少(P<0.01)。给予nor-BNI、wortmannin或MK2206后,U50,488H的上述作用均被阻断。结论缺血/再灌注可引起心肌损伤和线粒体分裂增加,κ-阿片受体激活后通过PI3K-Akt通路使Drp1磷酸化增加,抑制缺血/再灌注心肌的线粒体分裂,减轻心肌损伤。

κ-阿片受体激动剂对缺血/再灌注大鼠心肌及线粒体的保护作用

目的探讨κ-阿片受体(κ-OR)激动剂U50488H对大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌线粒体的保护作用。方法20只8周龄雄性SD大鼠被随机分成假手术组(sham)、缺血/再灌注组(I/R)、κ-OR激动剂组(I/R+U50488H)、κ-OR阻断剂(nor-BNI)组(I/R+N+U50488H),每组5只。比色法检测大鼠血清CK和LDH活力,TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡,透射电镜观察大鼠心肌线粒体的形态,Western blot法检测胞质和线粒体内细胞色素C的含量。结果与sham组相比较,I/R组血清CK和LDH显著增加、心肌细胞凋亡率增加、线粒体空泡化增加、线粒体平均面积减小(均P<0.01),线粒体内部细胞色素C释放到胞质的量更大(P<0.01);与I/R相比较,I/R+U50488H组血清CK和LDH降低(P<0.01),心肌细胞凋亡率降低(P<0.05),线粒体空泡化下降(P<0.01),线粒体平均面积增加(P<0.05),线粒体释放色素C减少(P<0.01);与I/R+U50488H组相比较,I/R+N+U50488H组血清CK和LDH增加、心肌细胞凋亡率增加(均P<0.05),线粒体空泡化增加(P<0.01),线粒体平均面积减小(P<0.05),线粒体释放细胞色素C增加(P<0.05)。结论激活κ-OR可以通过改善心肌线粒体的形态与功能,减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。

κ-阿片受体激活抗糖尿病心肌损伤的作用

目的 探讨κ-阿片受体在抗糖尿病(diabetes mellitus,DM)心肌损伤中的作用及可能机制。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为3组,即正常对照(Con)组、糖尿病模型(DM)组、糖尿病+κ-阿片受体激动剂U50,488H(DM+U50,488H)组。小鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,150 mg/kg)和高脂饮食结合的方式诱导DM模型,STZ注射1周后检测空腹血糖水平大于16.7 mmol/L的小鼠随机分为DM组和DM+U50,488H组;这两组小鼠高脂饲养7周后,DM+U50,488H组给予κ-阿片受体激动剂U50,488H治疗1周,共计9周。实验中观察各组小鼠的一般体征,实验结束后检测各组小鼠的血糖和胰岛素水平、心脏结构和功能、心肌细胞凋亡、心肌组织和体液因子中氧化应激指标的变化。结果 与CON比较,DM组小鼠血糖水平显著增加(P<0.01)、血清胰岛素水平明显降低(P<0.01),心脏功能显著下降(P<0.01),心肌细胞凋亡增加(P<0.01),血清和心肌组织中丙二醛(MDA)的水平均显著增加(P<0.01),血清或心肌组织中总抗氧化物(T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)等因子水平则显著降低(P<0.01);κ-阿片受体激动剂U50,488H可以显著降低糖尿病小鼠的血糖水平(P<0.01)、增加其血清胰岛素水平(P<0.01),使糖尿病小鼠心脏功能显著增加(P<0.01),减少心肌细胞凋亡(P<0.01),降低血清和心肌组织中MDA的水平,增加血清或心肌组织中T-AOC、SOD、CAT、GSH等因子的水平(P<0.05或P<0.01)。结论 κ-阿片受体激活具有明显改善糖尿病小鼠心肌损伤的作用,其作用机制是否与抗氧化应激、提高抗氧化物活力有关有待进一步证实。