κ-阿片受体激动剂U50488H通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环致大鼠急性肺损伤的研究

目的探讨κ-阿片受体(KOR)激动剂U50488H是否通过调节巨噬细胞极化减轻体外循环(CPB)引发的大鼠急性肺损伤(ALI)。方法将24只成年雄性清洁级SD大鼠(50~450 g)随机分为Sham组(假手术)、CPB组(CPB)和U50488H组(KOR激动剂+CPB),每组8只。U50488H组于CPB前30 min静脉注射1.5 mg/kg U50488H。分别于CPB后0、1、2 h行动脉血气分析,计算肺泡-动脉氧分压差(A-aDO_(2))和呼吸指数(RI)。3组大鼠均在停CPB后2 h处死,取完整右肺下叶。采用重力法测定血管外肺水(EVLW),采用苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织形态学变化。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆酯多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-4(IL-4)含量。采用免疫荧光法测定大鼠肺组织iNOS和CD206水平。结果与Sham组比较,CPB组大鼠EVLW和TNF-a、血浆IL-6水平及肺组织iNOS表达增高,血浆IL-4水平和肺组织CD206表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB后0、1、2 h,CPB组的A-aDO_(2)和RI、LPS高于Sham组,U50488H组的A-aDO_(2)和RI、LPS低于CPB组,差异有统计学意义(P<0.05)。CPB组大鼠出现严重肺损伤和肺泡内充血/出血,并伴有广泛的炎症细胞浸润,U50488H组肺损伤显著减轻。结论KOR激动剂U50488H可促进CPB后大鼠肺巨噬细胞向M2表型极化,减轻炎症反应,增加抗炎因子释放,进而减少CPB后ALI的发生。

联合应用α2-肾上腺素能受体激动剂和κ-阿片受体激动剂对复苏后家兔心肌保护的实验研究

目的观察α2肾上腺素能受体激动剂（米伐西醇，mivozer01）和κ-阿片受体激动剂（U50488H）联用是否减轻复苏后心肌损伤，改善复苏后心功能不全。方法采用体外致颤法建立家兔心搏骤停模型，室颤持续3min后复苏，30只兔随机分为五组：肾上腺素组（E）、血管加压素组（V）、U50488H组（U）、米伐西醇组（M）和米伐西醇组＋U50488H组（M＋U），于诱发室颤前15min、复苏后30、60、120、180、240min，检测心肌损伤标志物肌钙蛋白T（cTnT），并于实验结束时处死动物，光镜观察心肌组织病理学改变。结果①M＋U组cTnT值复苏后各时间点明显低于其余四组，与两常规复苏组E、V组相比差异非常显著（P〈0．01），与M组、U组差异显著（P〈0．05）。U组与E、V组在各时间点有差异（P〈0．05）。②光镜下心肌组织病理改变显示，常规复苏组（E、V组）心肌结构损伤程度最重，M组次之，U组更轻，而M＋U组明显轻于上述各组。结论联用α2-肾上腺素能受体激动剂（米伐西醇）和κ-阿片受体激动剂（U50488H）可减少心肺复苏后早期cTnT的释放．减轻心肌病理损害．改善复苏后心功能不全。

κ-阿片受体激动剂U50488H对内皮素-1所致大鼠室性心律失常的影响

目的:研究κ-阿片受体选择性激动剂U50488H是否可通过调节内皮素-1(ET-1)表达的水平,进而影响c-Src蛋白酪氨酸激酶(PTK)的表达以实现抗心律失常的作用。方法:将42只大鼠随机分为7组(每组6只):正常对照组、U50488H组、U50488H+nor-BNI组、nor-BNI组、ET-1组、ET-1+U50488H组及ET-1+U50488H+nor-BNI组。左心室及股动脉插管观测大鼠心率(HR)、动脉压(ABP)、左心室内压(LVP)及心脏收缩和舒张功能(±LVdp/dtmax)等血流动力学指标,并计算大鼠室性心律失常的发生情况和大鼠的死亡率。实时荧光定量PCR检测ET-1及ET-1受体(ETRA)mRNA表达;Western blot测定ETRA及下游分子c-Src PTK的表达水平。结果:U50488H可显著抑制ET-1所致大鼠ABP、LVP以及心脏收缩、舒张功能的升高,并可显著降低ET-1所致大鼠室性心律失常的发生率和死亡率(P<0.01),以及抑制心肌ET-1 mRNA的水平(P<0.01)。给予ET-1后,磷酸化(P)-c-Src PTK的表达水平升高,U50488H可显著降低c-Src PTK的水平以及ET-1引起的P-c-Src PTK表达的水平(P<0.05),此作用可被κ-阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断。结论:κ-阿片受体选择性激动剂U50488H可抑制ET-1所致大鼠室性心律失常发生。该作用可能与抑制ET-1及其下游分子c-Src PTK的表达有关。

κ阿片受体激动剂对血管系统和呼吸系统的影响及临床应用进展

阿片类药物是临床上常用的一类镇痛药物。经典阿片类受体有δ阿片受体(δ-opioid receptor, DOR)、κ阿片受体(κ-opioid receptor, KOR)和μ阿片受体(μ-opioid receptor, MOR)3种[1]。阿片类药物可作为激动剂、拮抗剂或部分激动剂作用于阿片受体。阿片受体激动剂通过G蛋白与细胞内机制偶联受体引起细胞超极化[2]。

血红素加氧酶介导κ-阿片受体激动剂对体外循环老年大鼠围手术期神经功能的保护作用

目的评价κ-阿片受体激动剂(kappa-opioid receptor agonists,KORs)对CPB老年大鼠围手术期神经认知障碍(perioperative neurocognitive disorders,PND)的影响。方法清洁级老年SD大鼠60只,体重400~500 g,按随机数字表法分为5组(每组12只):假手术组(S组)、CPB组(C组)、KORs+CPB组(U组)、KORs+CPB+κ-阿片受体拮抗剂(Nor-BNI)组(N组)、KORs+CPB+血红素加氧酶(heme oxygenase-1,HO-1)拮抗剂(ZnPP-IX)组(Z组)。各组大鼠于CPB后1 d行水迷宫测试(记录潜伏期、穿越平台次数和目标象限游行距离)后,放血处死大鼠取海马,置于福尔马林和-80℃冰箱中待测。H-E染色观察海马形态学变化,ELISA检测海马超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(methylene dioxyamphetamine,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)等指标浓度,Western blot检测海马组织中HO-1蛋白水平。结果与S组比较,其他4组潜伏期延长,穿越平台次数和目标象限游行距离减少(P<0.05);与C组比较,U组潜伏期缩短,穿越平台次数和目标象限游行距离增加(P<0.05);N组、Z组潜伏期、穿越平台次数及目标象限游行距离与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。H-E染色显示:S组海马细胞结构整齐,界限清楚;C组、N组、Z组海马细胞受损严重,细胞分布稀疏,胞内见不均匀空泡;U组上述损伤有所减轻,细胞排列整齐。与S组比较,其他4组海马组织中MPO、MDA浓度升高,SOD浓度降低(P<0.05);与C组比较,U组海马组织中MPO、MDA浓度降低,SOD浓度升高(P<0.05);N组、Z组MPO、MDA及SOD浓度与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与S组比较,其他4组海马组织中HO-1蛋白水平升高(P<0.05);与C组比较,U组海马组织中HO-1蛋白水平升高(P<0.05),Z组HO-1蛋白水平降低(P<0.05);N组海马组织中HO-1蛋白水平与C组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论KORs可增加HO-1蛋白的表达,抑制氧化应激,改善CPB老年大鼠认知功能。

κ阿片受体激动剂对心肺转流大鼠术后认知功能及α7nAChR表达的影响

目的探讨κ阿片受体(kappa opioid receptors,KORs)激动剂U50488H对心肺转流(cardiopulmonary bypass,CPB)后大鼠认知功能及α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAChR)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠32只,体重400～450g,随机分为四组:Sham组(S组)、CPB组(C组)、CPB+U50488H组(K组)、CPB+KORs拮抗剂Nor-BNI+U50488H组(N组),每组8只。四组大鼠于术前5d开始进行水迷宫训练,每天4次。S组不建模型,动静脉穿刺后进行机械通气60min,其余三组心肺转流60min。术后1d进行Morris水迷宫实验,随后处死大鼠,采集血清,取海马组织。采用ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α、S100-β浓度、海马ACh含量及ChAT和AchE活性;采用Western blot法检测海马α7nAChR蛋白含量。结果与S组比较,C、K和N组逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数明显减少,目标象限游泳距离和停留时间明显缩短(P<0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100-β浓度明显升高,海马α7nAChR蛋白含量明显降低(P<0.05)。与C组比较,K组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增多,目标象限游泳距离和停留时间明显延长(P<0.05);血清IL-1β、TNF-α和S100-β浓度明显降低,海马α7nAChR蛋白含量明显升高(P<0.05)。与S组比较,C组、N组海马Ach含量及ChAT活性明显降低,AchE活性明显升高。与C组比较,K组海马Ach含量及ChAT活性明显升高,AchE活性明显降低(P<0.05)。结论 KORs激动剂激活胆碱能抗炎通路,上调α7nAChR的表达,减轻炎症反应,从而改善CPB后大鼠认知功能。

U50488H对感染性休克大鼠细胞因子的影响

目的 观察κ-阿片受体激动剂(U50488H)对感染性休克大鼠细胞因子的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠40只,按照随机数字表法分为假手术组、感染性休克组、U50488H+感染性休克组、nor-BNI+ U50488H+感染性休克组和nor-BNI+感染性休克组(每组n=8).假手术组仅行腹腔正中切开、腹腔探查、翻动盲肠后关腹;感染性休克组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立大鼠感染性休克模型;U50488H+感染性休克组在休克即刻静脉注射U50488H,余同感染性休克组;nor-BNI+ U50488H+感染性休克组在关闭腹腔后3.5h静脉注射κ-阿片受体特异性拮抗剂(nor-BNI),余同U50488H+感染性休克组;nor-BNI+感染性休克组不静脉注射U50488H,余同nor-BNI+ U50488H+感染性休克组.各组大鼠分别于关闭腹腔时及术后3、6、12h时留取血样,检测中心静脉血氧饱和度(ScvO2)、血乳酸水平(Lac);外周血中性粒细胞比例;检测血清中细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和血管内皮细胞黏附分子(VCAM)]、血清酶学[乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平.另取30只大鼠分别构建假手术组、感染性休克组、U50488H+感染性休克组大鼠模型(每组n=10),用于观察24 h存活率.结果 与假手术组比较,感染性休克组大鼠术后3、6、12 h ScvO2明显下降(P<0.01),中性粒细胞比例明显升高(P<0.01),血Lac、TNF-α、IL-1β、IL-6和VCAM等细胞因子水平明显升高(P<0.01),IL-10水平明显下降(P<0.01),LDH水平明显升高(P<0.01),SOD水平明显下降(P<0.01).与感染性休克组比较,U50488H+感染性休克组大鼠术后3、6、12 h ScvO2无明显变化(P>0.05);而外周血中性粒细胞比例明显著下降(P<0.01),血Lac、TNF-α、IL-1β、IL-6和VCAM等细胞因子水平明显降低(P <0.01,P<0.05),IL-10水平明显升高(P<0.01),LDH水平明显下降(P<0.01),SOD水平明显回升(P<0.01).U50488H的上述效应可被κ--阿片受体阻断剂nor-BNI所阻断(P<0.01).U50488H+感染性休克组大鼠存活率高于感染性休克组(P<0.05).结论 U50488H能通过κ-阿片受体介导,明显改善感染性休克大鼠组织灌注,抑制炎症反应,减轻组织损伤,增强机体抗氧化能力和降低病死率.