肠炎沙门菌greB基因缺失株构建及其生物学特性初步研究

目的研究旨在探究转录延长因子GreB对肠炎沙门菌致病力相关生物表型的影响。方法以肠炎沙门菌ATCC13076为亲本株,利用λ-Red重组系统构建ΔgreB基因缺失株及其回补株,测定肠炎沙门菌及其衍生菌在多种抑菌环境中生存能力、对细胞感染能力及在雏鸡体内繁殖动态,并采用RNA-seq检测和分析GreB对肠炎沙门菌致病力相关基因转录的影响。结果结果显示,greB基因缺失对肠炎沙门菌体外生长、生物被膜形成、SDS和高渗透压抵抗力无显著影响,但ΔgreB基因缺失株抗氧化能力显著提升;greB基因缺失减弱肠炎沙门菌对HCT116细胞入侵;与亲本株相比,ΔgreB基因缺失株在雏鸡肝脏、脾脏和肺脏的载量均下降,对雏鸡致病力下降约4倍;greB基因缺失导致肠炎沙门菌85个基因差异表达,其中34个基因表达下调,主要包括fim操纵子和inv操纵子,51个基因表达上调,主要包括pdu操纵子和ssa操纵子。结论greB基因缺失引致肠炎沙门菌多种毒力相关基因差异转录表达,增强肠炎沙门菌抗氧化能力,但降低其对上皮细胞侵袭力和动物致病力。

沙门氏菌sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpW表达的调控作用

为探究sRNA RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpW表达的调控作用,研究利用λred同源重组系统构建ompW基因lacZ融合菌株,再通过P22噬菌体转导技术构建颜色指示菌株中rybB和hfq相关基因的单缺失株、双缺失株,通过β-半乳糖苷酶活性试验和qPCR分析,确定sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpW表达的调控作用。结果显示:成功构建了颜色指示菌株ΔompW∶∶LacZ和相对应的基因缺失菌株;与标准株LT2相比,ΔhfqY25A、ΔhfqK56A、Δhfq65、Δhfq87基因使ompW蛋白表达水平极显著下调(P<0.01),具有正调控作用,而Δhfq72、Δhfq∶∶tet、ΔrybB、ΔrybBΔhfq∶∶tet基因使ompW蛋白表达水平极显著上调(P<0.01),具有负调控作用;与标准株LT2相比,缺失hfq定点突变和rybB对ompW基因具有负调控作用。研究表明,沙门氏菌伴侣蛋白Hfq及RybB对孔蛋白ompW基因的蛋白表达水平和转录水平产生不同程度的影响,初步阐明了伴侣蛋白Hfq、sRNA RybB和靶基因三者的内在关系,为沙门氏菌减毒活疫苗与新型抗菌药物研制的研究奠定基础。

利用Red系统快速敲除家蚕核型多角体病毒orf60基因

用Red重组系统和最近构建的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)bacmid在大肠杆菌BW25113中快速地敲除BmNPVorf60基因。从大肠杆菌BmDH10Bac中提取BmNPVbacmid,将其电转化到含有质粒pKD46(能表达Red重组酶)的大肠杆菌菌株BW25113中,获得了可用于BmNPV基因打靶的菌株BW25113-Bac。设计一对长63bp的引物(5′端为orf60基因的左右同源臂,长45bp;3′端长18bp,为氯霉素抗性基因(cat)的首尾序列),以pKD3质粒(含cat)为模板,PCR扩增携带orf60左右同源臂的cat,即打靶线性化片段。将该线性化片段电转入BW25113-Bac菌株,在Red重组酶的作用下,线性化片段与BmNPVbacmid中的orf60基因发生同源重组。设计3对特异引物,用PCR方法证明cat成功地替换了BmNPVorf60基因。重组bacmid DNA转染BmN细胞后,Western blot分析未检测到orf60基因的表达。

三光子干涉对Λ型能级体系电磁感应透明的影响

在双光子探测、强耦合场驱动的Λ型能级体系中,我们在基态与低激发态之间加入一个驱动场,并应用密度矩阵方程理论研究了驱动场对双光子探测的电磁感应透明和Autler-Towns分裂的影响。

大肠杆菌基因无痕敲除技术及策略

基因敲除技术是大肠杆菌基因组减小和代谢途径改造的有效手段,其中基于同源重组原理的基因无痕敲除技术显现出其他技术所不具备的应用优势和发展潜力。该技术可以快速敲除大肠杆菌基因组中的目标基因,并且在基因组中不残留任何外源片段,所以不会干扰后续的基因操作。我们分类介绍了无痕敲除技术中所涉及载体的结构、功能及其相应的敲除策略,着重介绍了无痕敲除技术的原理及载体构建方法。

利用λ-Red重组系统和平衡致死系统改造抗药性致腹泻工程疫苗

质粒pMM085是含有猪毒素源性大肠杆菌(ETEC)的黏附素K88与无毒肠毒素LTA-B+基因的重组质粒,含氯霉素抗性基因,由此构建的菌苗株带有抗药性。利用平衡致死系统改建此疫苗株,即将质粒上的氯霉素抗性基因cat替换成asd基因,并把新构建的质粒转移到缺失asd基因的大肠杆菌X6097中。但由于质粒pMM085是一个23kD的大质粒,传统的基因工程操作不易进行,利用λ-Red重组系统,将表达Red重组蛋白的质粒pKD46转化含pMM085的大肠杆菌X6097,并用两端各带有39ntcat基因同源区、含全长asd基因的PCR产物电击转化此感受态细胞,在λ-Red重组系统的帮助下,成功实现了asd基因对cat基因的置换。

类型系统与程序正确性问题

类型系统能检出合法程序的语义错误，可以缩短调试时间，在执行程序之前捕获代码中的错误。类型系统的理论基础是类型化的λ演算。带子类型的高阶类型系统腿已成为类型化语言的演算核心。类型系统和直觉主义极小逻辑是同构的。证明系统的能力取决于类型系统，因而类型系统可以表迭程序的性质，并自动进行验证。

基于优化方法的GM(1,1,λ)模型

对GM(1,1)模型背景值进行分析,给出了GM(1,1,λ)模型,利用MATLAB优化函数进行单值λ优化和多值λ优化得到λ的最佳取值,最终求解出该模型.

肠炎沙门氏菌rpoH基因缺陷株的构建及其热激响应特性

构建肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis IFO3313株的rpoH基因缺陷株IFO3313-ΔrpoH,比较不同温度下缺陷株与野生株的热激响应特性。利用λ-Red重组系统对Salmonella enteritidisIFO3313的rpoH基因进行缺失突变,并使用PCR方法对其进行验证,在此基础上使用不同培养基对缺陷株与野生株进行不同温度下的热激应答结果和亚致死热损伤修复能力的考察:野生株比缺陷株有更强的热激耐受能力,在DHL平板上对亚致死热损伤的肠炎沙门氏菌的分离检测可能具有假阴性,野生株比缺陷株在TSYA平板上有更强的修复能力。利用λ-Red重组系统敲除了肠炎沙门氏菌rpoH基因,有助于了解肠炎沙门氏菌的热激亚致死及其修复机制,对亚致死状态食源性病原微生物的检测做出初步研究。

一种快速筛选海藻糖合成酶突变体体系的建立

利用λRed重组系统对大肠杆菌JM109的6-磷酸海藻糖合成酶基因OtsA和6-磷酸海藻糖酯酶基因otsB进行敲除,获得otsA和otsB基因失活的大肠杆菌突变体,该突变体由于对渗透压变得非常敏感,在含5%NaCl和0.5%麦芽糖的培养基中生长缓慢,然而当导入有活力的外源海藻糖合成酶基因后,由于能在胞内合成海藻糖,增强了细胞抗高渗透压培养基的能力,因而可让otsA和otsB基因缺失后的JM109得以恢复其生长能力。通过比较它们在高渗透压的培养基中的生长速度,可以筛选出含有不同活力的海藻糖合成酶突变体。

非线性系统的迭代学习控制及其算法实现

研究了非线性系统的学习控制方法 .首先 ,对学习控制方法在目前发展中所存在的一些问题进行了分析 ;在此基础上 ,通过引进新的 (λ ,ξ) 范数及新的算法 ,克服了这一理论研究中所存在的一些困难 ,避免了以上问题的出现 ,获得了控制算法全局收敛和目标跟踪精度较高的结果 .

基于非线性系统的高增益自适应λ跟踪控制研究

针对多变量、相对阶为一、全局最小相位非线性系统,对已有的高增益自适应控制策略进行改造,结合跟踪方法构造了一种高增益自适应跟踪控制策略.应用Matlab 7.0对三容水箱的仿真证明该控制方法是有效的.

光纤照明光源发生器的设计与制作

采用金属卤化物作发光物质,将发光管设计成球泡形状,给出了金属卤化物发光管的结构及制作工艺;将光学界面设计为椭球形状,采用3个不同中心波长的λ/4膜堆叠加而成的多层介质膜系对反射聚光器进行镀膜,从而获得所需要的高反射波长区域.将发光管和光学界面精确定焦,使出射光束均匀聚焦到光纤首端面,提高了光纤照明系统的发光效率.测试结果表明:设计制作的100W和150W的两种光纤照明光源的稳定性好、寿命长.

非直角互连——布线技术发展的新趋势

由于集成电路制造工艺的不断提高 ,集成电路的设计规模遵循Moore定律持续向前发展 ,并出现了系统级芯片 (SOC)这一新的集成电路设计概念 .同时遇到的困难之一是互连线成为影响电路性能的决定因素 :芯片速度变慢、功耗增大、噪声干扰加剧 .若采用以往基于直角互连结构的基础模型进行互连线性能的优化 ,其能力受到限制 .于是 ,人们试图采用其他互连结构作为突破途径 ,以实现高性能的集成电路 .在这种技术需求与目前工艺支持的背景下 ,从 2 0世纪 90年代初出现的关于非直角互连的零散的、试探性的研究 ,将成为国际上布线领域新的热点研究方向 .文中将针对非直角布线方面以往零散的研究工作进行总结与分析 ,指出了目前需要解决的关键技术 ,并结合自己的研究工作基础提出了可行的技术路线与设想 .

一种新的FH迭代学习控制器设计

针对具有不确定性或干扰的重复非线性时变系统,设计一种新的FH(Feedback-assisted Highorder)迭代学习控制器。在传统高阶迭代学习控制的基础上,该控制器引入PD控制作为反馈部分,利用反馈控制来抑制扰动对系统的影响,并采用λ-范数方法讨论其算法的收敛性。分析表明:在初态误差和干扰均有界的情况下,系统跟踪误差有界收敛。仿真结果表明了该控制器的有效性。

全角度反射的多层介质膜系

在总结金属反射镜及多层介质反射镜的优缺点的基础上 ,按照一维光子晶体的设计思想 ,提出用λ/4膜系设计特定波长范围内的全偏振全角度反射镜的方法 ,给出了反射带中心波长、边缘波长及带宽的表达式 ,并对如何避免 Brewster窗作了定量分析。

非线性离散系统的学习控制方法

对非线性离散系统的学习控制方法进行了研究，引进了离散的λ（ξ）－范数，给出了新的学习控制算法，实现了不依赖于学习控制初始数据的目标跟踪问题．为离散系统的学习控制方法的顺利发展和相应基本理论的建立进行了尝试性的探索工作．

自适应λ-跟踪控制在非线性系统控制中的应用

针对相对阶为1的非线性系统,在高增益自适应控制策略u=-k(t)y(t),.k(t)=‖y(t)‖2的基础上,通过在自适应律中加入死区控制,提出了一种自适应λ-跟踪控制器,并把该控制器应用于连续搅拌反应釜中对反应物浓度进行控制.仿真结果表明,该控制器是有效的.在跟踪信号是常数、控制变量受约束以及控制信号变化的情况下进行仿真,当控制变量受约束时该控制器能达到满意的控制效果;当参考信号发生变化时,系统仍然能够很好地跟踪参考信号,具有较好的跟踪能力.

基于多步回溯Q(λ)学习算法的多目标最优潮流计算

为了克服传统的最优化算法面对复杂、非线性描述的多目标最优潮流时无法满足电力系统实时调度运行的这一缺点,提出了一种基于半马尔可夫决策过程的多步Q(λ)学习算法,该算法不依赖于对象模型,将最优潮流问题中的约束、动作和目标转换成算法中的状态、动作与奖励,通过不断的试错、回溯、迭代来动态寻找最优的动作.将该算法在多个IEEE标准算例中与其他算法进行比较,取得了良好的效果,验证了多步Q(λ)学习算法在处理多目标最优潮流问题时的可行性和有效性.

双Λ型原子系统中制备相干叠加态的研究(英文)

本文讨论了在双Λ型原子系统中制备相干叠加态的方法:一个Λ型系统通过控制激光而另一个Λ型系统采用部分受激拉曼绝热通道的方法.在理论上分析了产生任意相干叠加态的可能性并且讨论了透热系统在产生相干叠加态过程中的重要性.研究表明,没有透热过程是不可能制备出任意的叠加态.应用数值方法验证理论分析是正确,并且指出任意叠加态的产生只与控制脉冲的时间延迟有关.