茁霉多糖酶基因的克隆

以λEMBL3DNA为载体，产气克氏杆菌染色体的部分酶切片段为供体，成功地构建了产气克氏杆菌的基因文库，重组噬菌体数为1．7×103ρfu／ugDNA，达到了Clarke与Carbon公式的要求。经支链淀粉平板初筛和茁霉多糖平板复筛，从此文库中得到三个产茁霉多糖酶的噬菌体。酶切分析证明这三个重组噬菌体含有相同的酶切片段。由此我们构建了产气克氏杆菌的基因文库，并从中钓到了茁霉多糖酶基因。

橡胶树基因文库的构建

本文以λ噬菌体 EMBL_4作为载体,用体外包装技术构建了橡胶高产品系 RRIM600的基因文库。所得重组子为1.43×10~6pfu,符合建库要求的理论值。以大豆 rDNA 为探针对该文库的鉴定结果表明,重组子中的确含有橡胶树的 DNA。

枯草芽胞杆菌基因文库的构建

以λEMBL3为载体,以大肠杆菌Q358及Q359为宿主成功地构建了枯草芽胞杆菌808的基因文库。采用Marmur的方法从供体菌中提取大于50Kb的染色体DNA,酶切后用5～25％NaCl梯度离心,分部收集15～20Kb的DNA片段作为供体,从甘油梯度纯化的噬菌体提取λEMBL3 DNA经BamHI,EcoRI双酶解,退火处理,纯化得左、右臂作为载体,供体与载体DNA以1:2浓度进行连接反应,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统制备的包装抽提物进行体外包装,感染大肠杆菌Q358及Q359,测定重组噬菌体数目,实验结果表明:重组体滴定达7.5×10~4pfu/μgDNA,超过Clarke和Carbon公式的理论值的要求,并从该文库中钓出淀粉酶基因,证明所建文库是有效的。

高等真菌LMPQ39基因文库的构建

以噬菌体λＥＭＢＬ３ＤＮＡ为载体，用ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ双切酶切后，与Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切的１０－２１ｋｂＤＮＡ片段连接，体外包装，感染Ｅ·ｃｏｌｉＬＥ３９２，所得重组子数为２．２１×１０４ｐｆｕ，超过建库所需的理论值．随机挑选的１４个克隆子，其ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ酶切，有９个出现了不同于载体ＤＮＡ的酶切带型．