利用T7和PR双启动子的新型表达载体的构建及其应用

目的：构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达、降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法：采用ｐＢＶ２２０与ｐＥＴ－３表达载体作为原始材料，将ｐＥＴ－３上包括Ｔ７启动子与Ｔ７ｇ－１０翻译起始序列的一段序列克隆到ｐＢＶ２２０载体λＰＲ启动子的下游，构建了双启动子表达载体ｐＤＯＧ。结果：ｐＤＯＧ载体含有λＰＲ与Ｔ７两个启动子，可以选择性地使用热诱导或在较低温度下使用化学诱导表达重组蛋白。该载体带有三个相位的多克隆位点，外源基因可以融合载体的少数几个氨基酸表达，也可以直接表达。该载体已成功地用于ＨＩＶ－１核心蛋白、人ＩＬ－６等外源基因的高效表达。