重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定

构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体（ｕ－ＰＡＲ）的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母中高效表达．利用ＰＣＲ扩增截断型可溶性ｕ－ＰＡＲｃＤＮＡ片段，并分别连入酵母及原核表达载体中，构建成表达质粒．后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔，获得抗ｕ－ＰＡＲ的抗血清，用于对酵母表达产物的鉴定．前者在甲醇的诱导下表达，产物分泌至培养液中．结果表明，原核表达的ｕ－ＰＡＲ蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清，利用此抗血清所作Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实酵母表达蛋白具有ｕ－ＰＡＲ的免疫原性，表观分子量４０ｋＤ左右．Ｍｕｔ－表型在第５ｄ为最高（２．５μｇ／ｍｌ），Ｍｕｔ＋表型在第４ｄ为最高（７．５μｇ／ｍｌ）．因此，构建的可溶性ｕ－ＰＡＲ表达质粒在Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ酵母细胞获得表达，为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础．