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过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡 被引量:1
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作者 李芳芳 葛银林 +3 位作者 薛美兰 张金玉 李泉 单虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期755-760,共6页
由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱... 由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat-l)cDNA,构建了真核表达载体pEGFPC1-fat-1,将该基因转染入小鼠胚胎成纤维细胞;激发荧光与RT-PCR方法检测转染pEGFPC1-fat-1细胞表达该基因,气相色谱分析显示该转染细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs的比例降低;细胞抑制率实验显示转染细胞的MTT吸光值升高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染细胞凋亡降低,结果表明fat-1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下,依然能够发挥将ω-6PUFAs脱氢转化为与ω-3PUFAs的生理功能,抑制3T3细胞凋亡,促进细胞生长增殖,实现了较强的细胞保护功能. 展开更多
关键词 ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢 基因表达 胚胎成纤维细胞 细胞凋亡
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Mistic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在大肠埃希菌中高效表达 被引量:1
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作者 赵艳 柳欣欣 +3 位作者 王大新 李湘鸣 陈平 王昊 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第16期2190-2193,共4页
目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化... 目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达Fat-1蛋白和M110-Fat-1蛋白,通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度分析其表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a-Fat-1和pET32a-Mistic-Fat-1原核表达载体;SDS-PAGE和Western blot证实ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在原核表达系统中没有明显诱导表达,而M110-Fat-1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达,占全细胞蛋白总量的15%。结论ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因与Mistic基因融合表达,实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1。 展开更多
关键词 Mistic ω-3脂肪酸去饱和酶fat-1基因 膜蛋白 高效表达
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Fat-1基因在n-3多不饱和脂肪酸功能研究中的应用 被引量:5
3
作者 武珅 杜卫华 +3 位作者 郝海生 王栋 张诺 朱化彬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期136-141,共6页
n-3多不饱和脂肪酸是机体脂肪酸成分之一,维持体内合理的n-3多不饱和脂肪酸比例具有重要的生理意义。但n-3多不饱和脂肪酸在大多数动物体内不能合成,只能从食物中补充。fat-1基因的出现改变了这一现状,它可以将多不饱和脂肪酸从n-6形式... n-3多不饱和脂肪酸是机体脂肪酸成分之一,维持体内合理的n-3多不饱和脂肪酸比例具有重要的生理意义。但n-3多不饱和脂肪酸在大多数动物体内不能合成,只能从食物中补充。fat-1基因的出现改变了这一现状,它可以将多不饱和脂肪酸从n-6形式转化为n-3形式。综述了n-3多不饱和脂肪酸的功能,并介绍了fat-1基因的功能及转fat-1基因动物在n-3多不饱和脂肪酸功能研究上的应用。 展开更多
关键词 N-3多不饱和脂肪酸 fat-1基因 基因动物
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ω-3多不饱和脂肪酸促进1型糖尿病模型小鼠胰岛β细胞再生的作用研究 被引量:2
4
作者 邢朝凤 唐敏怡 +5 位作者 徐绮华 张宗猛 封文斌 穆云萍 李芳红 赵子建 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期2141-2148,共8页
目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加不同配比的ω-3 PUFAs,4周后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛... 目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 PUFAs)促进胰岛α细胞向β细胞转分化的作用。方法在小鼠胰岛α细胞系αTC1培养基中添加不同配比的ω-3 PUFAs,4周后,利用荧光染色观察胰岛素和胰高血糖素的表达,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胰岛α细胞和胰岛β细胞特异性基因表达情况。野生型(WT)组和mfat-1转基因组小鼠连续5天腹腔注射60 mg·kg^(-1)链脲佐霉素(streptozocin,STZ)。选取注射STZ 7周后的WT小鼠,给予97%EPA和75%鱼油(50%EPA和25%DHA)饮食干预,每周检测随机血糖。8周后,通过免疫荧光染色观察小鼠胰腺中胰岛β细胞再生情况。结果在DHA与EPA混合液培养以及与单独EPA培养后,胰岛α细胞可分泌胰岛素,而对照组细胞没有胰岛素染色阳性;qRT-PCR结果显示,经过ω-3 PUFAs处理的细胞中,胰岛β细胞特异性基因明显上调。注射STZ后,mfat-1组和饮食干预组小鼠不仅随机血糖水平明显低于WT组,而且免疫荧光结果显示mfat-1组和饮食干预组小鼠胰岛中出现胰岛素和胰高血糖素共定位的细胞。结论初步证明ω-3 PUFAs能够促进胰岛α细胞分泌胰岛素,缓解1型糖尿病小鼠的高血糖症状。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 1型糖尿病 胰岛Α细胞 胰岛Β细胞 转分化 mfat-1转基因小鼠
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来源于线虫Caenorhabditis briggssae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因的合成及其功能分析 被引量:9
5
作者 朱贵明 陈宏 +4 位作者 周艳荣 卢建申 吴晓洁 陈红星 邓继先 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期763-771,共9页
ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs... ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs(其代谢方式和功能与前者不同,通常其作用也相反)相比很低。而对于人体,无论ω-3PUFAs的过低还是ω-6PUFAs的过高都会带来极为不利的影响。所以人们一直在努力寻求提高人体中ω-3PUFAs含量的途径或者大量生产ω-3PUFAs的方法。本研究经过密码子优化后,用化学合成的方法获得了C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1-sFat1-EGFP,通过脂质体转染了CHO细胞系并对其进行抗性筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染sFat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的GC-MS分析表明,sFat1基因完全能够在CHO细胞中表达和发挥其ω-3去饱和酶的作用,即促使ω-6系列不饱和脂肪酸转变为相应的ω-3系列不饱和脂肪酸(从十八碳到二十二碳)。ω-6不饱和脂肪酸总量从48.97%下降到35.29%,而ω-3不饱和脂肪酸总量则相应地从7.86%上升到24.02%。ω-6多不饱和脂肪酸和ω-3多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.23下降到转染细胞中的1.47。这说明C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1的合成是成功的,试验所获得的结果为今后的进一步的研究或应用其大量生产ω-3PUFAs奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和基因 多不饱和脂肪酸 基因合成 脂肪酸分析
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牛胎儿成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因 被引量:1
6
作者 于永生 罗晓彤 +1 位作者 张立春 朴庆林 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第23期12-16,共5页
为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础。 展开更多
关键词 牛胎儿成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和 基因转染 脂质体
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mfat-1基因疗法有效预防及治疗小鼠多发性硬化症
7
作者 唐敏怡 毕欣耘 +4 位作者 王帅 邢朝凤 吴晓丽 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1930-1936,共7页
目的 探讨mfat-1基因疗法对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的预防及治疗作用。方法 利用mfat-1基因治疗方法来提高小鼠体内内源性的ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFAs)含量的同时,降低ω-6 PUFAs含量,改变ω-3/ω-6... 目的 探讨mfat-1基因疗法对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的预防及治疗作用。方法 利用mfat-1基因治疗方法来提高小鼠体内内源性的ω-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFAs)含量的同时,降低ω-6 PUFAs含量,改变ω-3/ω-6 PUFAs的比例,并使用气相色谱分析小鼠外周血中PUFAs的比例;运用小鼠神经功能障碍评分评估小鼠神经功能缺损情况;通过小鼠脊髓切片HE染色以及LFB染色观察中枢神经系统炎症浸润和脱髓鞘病变;利用流式细胞术微球芯片技术检测血清中细胞因子的含量。结果 mfat-1基因治疗能明显提高小鼠外周血ω-3/ω-6 PUFAs的比例(P<0.01);有效延缓实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠疾病高峰期,并明显降低神经功能障碍评分(P<0.05);改善小鼠中枢神经系统炎症浸润程度和神经髓鞘损伤(P<0.05);明显下调血清中的IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-17的含量(P<0.05)。结论 利用mfat-1基因疗法提高外周血ω-3/ω-6PUFAs的比例能有效预防及治疗小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎。 展开更多
关键词 mfat-1 基因治疗 ω-3多不饱和脂肪酸 ω-6多不饱和脂肪酸 多发性硬化症 实验性自身免疫性脑脊髓炎
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牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因研究
8
作者 于永生 罗晓彤 +2 位作者 曹阳 张立春 王晓阳 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期87-90,98,共5页
为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 为了核移植法制作转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛耳成纤维细胞并进行了线虫-ω3脂肪酸去饱和酶基因。采用胰蛋白酶消化法分离培养牛耳皮肤成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染细胞,通过G418筛选9 d获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后,利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明:细胞贴壁后9 d可获取原代皮肤成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶基因整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶基因在转基因传代细胞中得到有效转录。本研究为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了条件。 展开更多
关键词 牛耳皮肤成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和 基因转染 脂质体
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我国首次成功获得转ω-1脂肪酸去饱和酶基因猪
9
《今日畜牧兽医》 2008年第4期67-67,共1页
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、湖北省农业科学院畜牧兽医研究所和军事医学科学院生物工程研究所通力合作,成功培育出转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪。此种转基因猪肉预计对人类的心血管疾病具有比较重要的预防作用和保健功能。
关键词 ω-3脂肪酸 基因 猪肉 饱和 中国农业科学院 畜牧兽医研究所 生物工程研究所 心血管疾病
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家蚕类ω3-脂肪酸脱氢酶基因的克隆、表达及功能研究 被引量:4
10
作者 于海彦 周志峰 +1 位作者 贾俊强 桂仲争 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期577-586,共10页
ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基... ω3-脂肪酸脱氢酶是生物体内催化多不饱和脂肪酸合成的关键酶之一,其表达受生物胁迫和非生物胁迫因素的影响。从家蚕蛹中克隆了类ω3-脂肪酸脱氢酶基因(Bm FAD3-like),该基因具有一个长度为1 083 bp的开放阅读框,编码由360个氨基酸残基组成的分子质量为41.5 k D的蛋白质。将该基因克隆到p YES2.0载体,构建重组表达载体p YBm FAD3-like及重组酿酒酵母工程菌株YBm FAD3-like后进行诱导表达,收集菌体提取脂肪酸,经气相色谱检测表明异源表达的重组Bm FAD3-like能够将诱导表达体系中加入的外源底物亚油酸(LA)转化为α-亚麻酸(ALA)。半定量RT-PCR检测Bm FAD3-like基因mRNA几乎在家蚕5龄第3天幼虫的所有组织中都有转录,在5龄幼虫期、蛹期和蛾期的转录水平较高,并且其转录水平受低温(0℃)和真菌(球孢白僵菌Beauveria bassiana)侵染(6~36 h)诱导显著上调。对家蚕蛹体注射siRNA沉默目的基因12~72 h后,Bm FAD3-like mRNA转录水平显著下调。研究结果表明,Bm FAD3-like的表达产物能催化LA在ω3位脱氢生成ALA,并且该基因在蚕体受到低温诱导和真菌侵染等胁迫时显著上调表达,外源siRNA能够介导该基因的沉默,显著下调其转录水平。 展开更多
关键词 家蚕 ω3-脂肪酸脱氢 基因克隆 酿酒酵母表达系统 表达谱 多不饱和脂肪酸合成 诱导表达
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ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定 被引量:1
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作者 吴静 杨利敏 +2 位作者 施振声 黄立纲 刘文军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期44-47,共4页
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测... 目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢 fat1 人胚肾细胞
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富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪制备的关键技术研究 被引量:4
12
作者 潘登科 陈红星 +2 位作者 冯书堂 李奎 邓继先 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第5期22-25,共4页
作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基... 作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基因小鼠,sFat-1基因能够在转基因小鼠中产生更多更长链的而且更有价值的DHA以及DPA。在确认sFat-1基因功能的基础上,将载体转染到猪胎儿成纤维细胞,利用阳性的细胞克隆通过核移植方式制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和基因 多不饱和脂肪酸 sFat1 基因小鼠 克隆猪
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内源性ω-3多不饱和脂肪酸对AKT/Ras小鼠肝癌细胞抑制作用 被引量:6
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作者 柳欣欣 赵艳 +1 位作者 陈平 陈昕 《肠外与肠内营养》 北大核心 2016年第4期237-241,共5页
目的:探讨ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因对细胞脂肪酸谱的影响,并对AKT/Ras癌基因激活小鼠肝癌细胞的抑制作用。方法:通过构建p Lenti-CMV-Fat-1过表达慢病毒载体,使小鼠AKT/Ras肝癌细胞转染Fat-1基因,以p Lenti-CMV-GTP空载体病毒作为对照... 目的:探讨ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因对细胞脂肪酸谱的影响,并对AKT/Ras癌基因激活小鼠肝癌细胞的抑制作用。方法:通过构建p Lenti-CMV-Fat-1过表达慢病毒载体,使小鼠AKT/Ras肝癌细胞转染Fat-1基因,以p Lenti-CMV-GTP空载体病毒作为对照,观察Fat-1基因对小鼠AKT/Ras肝癌细胞增殖及克隆形成率的影响。Westernblot检测癌基因信号通路p-AKT和p-Erk的表达情况,并检测两组细胞脂肪酸谱的改变情况。结果:Fat-1基因可明显增加细胞ω-3/ω-6脂肪酸的比率,并抑制AKT/Ras癌基因信号通路,抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成。结论:Fat-1基因通过增加内源性ω-3多不饱和脂肪酸来抑制AKT/Ras肝癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 ω-3多不饱和脂肪酸 fat-1基因 脂肪酸脱氢 肝癌 AKT/Ras信号通路
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向日葵FAD2-1基因克隆与功能分析
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作者 周菲 王文军 +4 位作者 马军 王静 谢鹏远 刘岩 黄绪堂 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期954-964,共11页
为解析向日葵Δ12脂肪酸脱氢酶基因的功能,根据前期转录组测序结果,采用RT-PCR方法克隆了向日葵Δ12脂肪酸脱氢酶基因HaFAD2-1的开放阅读框(ORF)序列,其核苷酸序列长度为1137 bp,编码378个氨基酸,生物信息学预测表明HaFAD2-1编码蛋白为... 为解析向日葵Δ12脂肪酸脱氢酶基因的功能,根据前期转录组测序结果,采用RT-PCR方法克隆了向日葵Δ12脂肪酸脱氢酶基因HaFAD2-1的开放阅读框(ORF)序列,其核苷酸序列长度为1137 bp,编码378个氨基酸,生物信息学预测表明HaFAD2-1编码蛋白为碱性且亲水性蛋白,二级结构为α螺旋。系统进化分析发现HaFAD2-1基因与异果菊(Dimorphotheca sinuata DC.)FAD2进化关系最近。qRT-PCR分析表明HaFAD2-1基因是种子中特异高表达的基因,且在低油酸种子中表达量明显高于高油酸种子,相关性分析发现HaFAD2-1表达量与油酸含量呈显著负相关,与亚油酸含量呈显著正相关。亚细胞定位发现HaFAD2-1编码蛋白定位于细胞质中,与野生型对照相比,异源表达转HaFAD2-1拟南芥种子的总不饱和脂肪酸含量显著升高,亚油酸合成下游的大部分脂肪酸含量显著升高,而亚油酸合成上游的大部分脂肪酸含量显著降低,表明HaFAD2-1可能是参与向日葵不饱和脂肪酸合成的重要基因。 展开更多
关键词 向日葵 HaFAD2-1 脂肪酸脱氢 饱和脂肪酸 基因拟南芥 功能分析
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n-3多不饱和脂肪酸对糖尿病心肌病小鼠心脏的保护作用 被引量:4
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作者 陈显桐 左盛佳 +6 位作者 李可欣 刘已斌 王超群 肖佩仪 赵泽新 余细勇 江雪燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1376-1386,共11页
目的:探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对糖尿病心肌病(DCM)小鼠心脏的保护作用及调控机制。方法:将6~8周龄雄性野生型(WT)C57BL/6J小鼠和Fat-1(编码n-3脂肪酸脱饱和酶,促n-3 PUFAs合成)转基因(Fat-1^(+/+))小鼠随机分成4组:WT组、Fat-... 目的:探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对糖尿病心肌病(DCM)小鼠心脏的保护作用及调控机制。方法:将6~8周龄雄性野生型(WT)C57BL/6J小鼠和Fat-1(编码n-3脂肪酸脱饱和酶,促n-3 PUFAs合成)转基因(Fat-1^(+/+))小鼠随机分成4组:WT组、Fat-1^(+/+)组、WT+DCM组和Fat-1^(+/+)+DCM组。通过腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素并以45%高脂饲料喂养20周建立DCM模型;对照组则腹腔注射等体积柠檬酸缓冲液并给予普通饲料喂养。造模期间每隔2周测定小鼠血糖及体重,并采用小动物超声仪检测小鼠左心室收缩及舒张功能变化。DCM造模结束后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),并采用RT-qPCR和Western blot检测心肌凋亡、纤维化及NLRP3炎症小体通路相关分子的mRNA和蛋白水平。结果:DCM造模20周后,WT+DCM组和Fat-1^(+/+)+DCM组小鼠血糖比造模前均显著升高且体重显著降低(P<0.05),但Fat-1^(+/+)+DCM组与WT+DCM组相比血糖显著降低,体重显著升高,OGTT曲线下面积显著减少(P<0.01)。心脏超声检测结果显示DCM造模20周后WT+DCM组和Fat-1^(+/+)+DCM组小鼠左心室收缩功能(LVEF和LVFS)和舒张功能(E/A和E´/A´)与造模前相比均显著降低,但Fat-1^(+/+)+DCM组小鼠左心室收缩和舒张功能较WT+DCM组显著改善(P<0.01)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,心肌组织中凋亡执行蛋白caspase-3和促纤维化蛋白TGF-β的表达在DCM造模后均显著升高,但Fat-1^(+/+)+DCM组两者表达均比WT+DCM组显著减少(P<0.05)。此外,经DCM造模后心脏组织中NLRP3炎症小体及相关炎症细胞因子(NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18)的mRNA和蛋白表达水平较造模前均显著升高,但其在Fat-1^(+/+)+DCM组较WT+DCM组显著降低(P<0.05)。结论:n-3 PUFAs对糖尿病小鼠的血糖、体重及左心室收缩和舒张功能均有显著改善作用;其机制可能是通过减少心肌细胞凋亡和纤维化并抑制NLRP3炎症小体及相关炎症因子的转录激活,从而减轻心肌损伤。 展开更多
关键词 N-3多不饱和脂肪酸 糖尿病心肌病 NLRP3炎症小体 fat-1转基因小鼠
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应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因 被引量:7
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作者 朱贵明 陈宏 +4 位作者 卢建申 周艳荣 吴晓洁 陈红星 邓继先 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1123-1128,共6页
人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的... 人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法,即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60~68bp)拼接组装起来,获得了完整的总长为1226bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应),而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少,技术简单,出错极少,是合成长基因序列很好的选择。 展开更多
关键词 基因合成 聚合链式反应 ω-3脂肪酸去饱和基因
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fat-1转基因动物研究进展 被引量:3
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作者 杨慧婷 王洪梅 +3 位作者 方永志 刘文浩 武建明 何洪彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期8-12,共5页
转染秀丽隐杆线虫fat-1基因后的哺乳动物具备了将n-6多不饱和脂肪酸(PUFAs)转化为n-3 PUFAs的能力,可降低动物机体的n-6/n-3 PUFAs比例。n-3 PUFAs有益于人类健康,可减少多种相关疾病发生的风险,但人体内不能合成n-3 PUFAs,其必须依赖... 转染秀丽隐杆线虫fat-1基因后的哺乳动物具备了将n-6多不饱和脂肪酸(PUFAs)转化为n-3 PUFAs的能力,可降低动物机体的n-6/n-3 PUFAs比例。n-3 PUFAs有益于人类健康,可减少多种相关疾病发生的风险,但人体内不能合成n-3 PUFAs,其必须依赖于富含n-3 PUFAs的食品,fat-1转基因动物将成为人类必需的n-3 PUFAs的重要来源。对fat-1及其转基因动物的研究现状进行综述。 展开更多
关键词 fat-1基因 基因动物n-3多不饱和脂肪酸
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sFat-1转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察 被引量:1
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作者 华文君 刘西梅 +2 位作者 程妮 乔宪凤 郑新民 《福建农业学报》 CAS 2011年第2期180-183,共4页
转基因猪可能因为外源基因导入造成体质损伤,健康体质下降的转基因猪对常见疾病的感染比率有可能超过正常生产猪,不仅使猪生产性能下降,也加大对环境传播疾病。转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察是转基因猪环境安全性评价的一项重... 转基因猪可能因为外源基因导入造成体质损伤,健康体质下降的转基因猪对常见疾病的感染比率有可能超过正常生产猪,不仅使猪生产性能下降,也加大对环境传播疾病。转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察是转基因猪环境安全性评价的一项重要研究内容。本试验对21头阴性试验对照猪和20头转sFat-1基因猪9种主要传染性疾病的感染情况进行了检测,并对日常饲养疾病感染情况进行了统计。这9种疾病分别是:口蹄疫、猪瘟、蓝耳病、猪伪狂犬病、结核病、猪水泡病、布鲁氏杆菌病、非洲猪瘟、肠病毒性脑脊炎,检测使用ELISA检测试剂盒和核酸扩增检测试剂盒完成。在阴性猪中猪水泡病感染比率为5%,阳性猪感染比率为20%,sFat-1转基因猪对猪水泡病的易感性显著提高,另外8种疾病易感性没有明显差别。阴性成年猪的死亡率为8%,阳性成年猪的死亡率为37%,阳性猪死亡率明显提高。测试结果表明有一部分转sFat-1基因猪体质下降,这种情况与转sFat-1基因猪生理生化指标与繁殖性能测试结果相符合,sFat-1转基因猪对猪水泡病的易感性显著提高是部分转基因阳性猪肝功能受到轻度损伤造成的。 展开更多
关键词 基因 ω-3脂肪酸去饱和 易感性
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多不饱和脂肪酸调控基因表达的分子机制的研究进展 被引量:4
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作者 帅丽芳 段铭 高宏伟 《畜牧与兽医》 北大核心 2002年第12期36-38,共3页
本文综述了多不饱和脂肪酸 (PUFA) ,尤其是n 3系的PUFA ,可以降低脂肪酸以甘油三酯形式的沉积 ,同时促进脂肪酸氧化和葡萄糖合成糖原。其具体机制是PUFA通过激活过氧化物酶体活化增生因子受体α (PPARα)来控制氧化途径过程中的基因表... 本文综述了多不饱和脂肪酸 (PUFA) ,尤其是n 3系的PUFA ,可以降低脂肪酸以甘油三酯形式的沉积 ,同时促进脂肪酸氧化和葡萄糖合成糖原。其具体机制是PUFA通过激活过氧化物酶体活化增生因子受体α (PPARα)来控制氧化途径过程中的基因表达 ,而对脂肪合成途径中有关基因的抑制则是通过降低能传递胰岛素和碳水化合物信息的转录因子与DNA的亲和力和转录因子的核内丰度。尤其是PUFA抑制了类固醇调控单元结合蛋白 1 (SREBP 1 )的核内丰度和表达 ,降低了核因子Y (NF Y)、Spl和肝核因子 4(HNF 4) 展开更多
关键词 基因表达 分子机制 多不饱和脂肪酸 过氧化物体活化增生因子α受体 类固醇调控单元结合蛋白-1 调控机制 脂肪氧化 脂肪合成
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Fat-1转基因小鼠的研究进展 被引量:5
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作者 高翔 李文德 《药学研究》 CAS 2014年第4期215-218,共4页
多不饱和脂肪酸(PUFAs)为人体必需脂肪酸,与人体健康密切相关,其中主要分为n-6和n-3两大类,在哺乳动物中n-6和n-3不能自身合成,只能通过饮食获取。人体内n-6/n-3 PUFAs比例均衡,是人类保持健康的一个重要组成部分。为了研究n-6/n-3 PUFA... 多不饱和脂肪酸(PUFAs)为人体必需脂肪酸,与人体健康密切相关,其中主要分为n-6和n-3两大类,在哺乳动物中n-6和n-3不能自身合成,只能通过饮食获取。人体内n-6/n-3 PUFAs比例均衡,是人类保持健康的一个重要组成部分。为了研究n-6/n-3 PUFAs的比例在疾病中的预防作用,研究者培育了可自身将体内n-6转化为n-3的fat-1转基因小鼠,解决了以往研究PUFAs只能通过对动物喂养富含n-3和n-6饲料的不便。因而,fat-1小鼠可以作为一种理想的动物模型去研究在不改变饮食结构的状态下,体内的n-6/n-3 PUFAs比例的生物学作用。本文将对fat-1转基因小鼠的研究现状进行综述。 展开更多
关键词 fat-1转基因小鼠 n-6 N-3多不饱和脂肪酸 研究进展
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