“红阳”猕猴桃茎段高效再生体系的建立

以"红阳"猕猴桃茎段为外植体,MS为基本培养基,培养温度25±2℃,光照强度4 500lx,16h/d,继代周期20～30d,愈伤组织暗培养.在MS+1mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA培养基中,外植体脱分化率达100%.在MS+2.0mg/L 2,4-D+0.4mg/L 6-BA培养基中,1～4代愈伤组织增殖倍数达3.38;在MS+5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA中,60d不定芽诱导率达83.33%.在MS+3mg/L 6-BA+1mg/L NAA中,不定芽1～6代平均繁殖系数达6.78;不定芽用0.01%IBA处理40min后在1/2MS培养基中生根率达100%;85株试管苗移栽到田间土营养钵中,15d成活81株,成活率达95.29%.

‘红阳’猕猴桃叶盘高频直接再生体系的建立

以‘红阳’猕猴桃雌株幼叶为外植体，直接诱导产生不定芽，并对不定芽增殖以及生根体系进行优化，建立了高频再生体系。结果表明，在MS＋3．0mg／LBA＋1．0mg／LNAA培养基中，不定芽诱导率达100％，平均出芽数达18．67个／叶盘；在MS＋2．0mg／LBA＋1．0mg／LNAA＋0．1mg／LGA3培养基中，增殖率达100％，1～6代不定芽平均繁殖系数达8．63；不定芽在1／2MS＋0．8mgmIBA培养基中培养15d，然后继代至含1／2MS液体培养基的珍珠岩中培养15d，生根率达100％，且其根系发育良好；98株试管苗移栽到土壤盆钵中，成活95株，成活率达96．94％。本试验成功建立了‘红阳’猕猴桃叶片高频直接再生体系，该体系诱导产生不定芽周期短，出芽率高，不定芽增殖系数大，生根率高且根系发达，为‘红阳’猕猴桃试管苗的工厂化生产和遗传转化奠定了基础。

农杆菌介导LJAMP2基因导入‘红阳’猕猴桃及分子鉴定

为了获得抗溃疡病的‘红阳’猕猴桃转基因植株,以红阳猕猴桃试管苗叶盘为转基因受体材料,通过根癌农杆菌介导将CaMV35S启动子调控下的LJAMP2基因导入红阳猕猴桃。450个叶盘与携带表达载体质粒pBI121的根癌农杆菌菌珠LBA4404共培养2 d后,转入含25 mg/L Kan的筛选培养基培养40 d,15 d转接1次,之后30 d继代1次。结果表明,在MS+3.0 mg/L BA+1.0 mg/L NAA筛选培养基中,Kanr芽率达85%以上,在1/2 MS+0.8 mg/L IBA培养基中,Kanr芽生根率达100%。共获得Kanr再生植株40株,经GUS组织染色和PCR分析证明,其中23株为转基因植株。阳性率为57.50%,转化率达5.11%。抗溃疡病基因LJAMP2已成功导入红阳猕猴桃,为红阳猕猴桃的抗病基因工程育种奠定了基础。