软枣猕猴桃休眠芽超低温保存技术研究

【目的】探讨软枣猕猴桃种质资源的长期保存技术体系。【方法】以软枣猕猴桃‘魁绿’休眠芽为试材,研究了预培养液种类、预培养时间、装载时间、玻璃化保护液、恢复培养基等因素对玻璃化法超低温保存后休眠芽成活率的影响。【结果】休眠芽在0.3 mol·L^-1蔗糖+1 mol·L^-1甘油的预培养液中震荡培养2 d,常温下用装载液(2 mol·L^-1甘油+0.4mol·L^-1蔗糖+MS)处理20 min,0℃条件下用PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol·L^-1蔗糖+MS)脱水120 min,换新鲜PVS2后迅速投入液氮中冻存24 h以上。取出后立即用38℃水浴解冻2 min,用含1.2 mol·L^-1蔗糖的MS卸载液洗涤30 min,无菌滤纸吸干后接种到MS+2 mg·L^-16-BA+0.02 mg·L^-1NAA恢复培养基上,休眠芽成活率达86.30%。用流式细胞仪鉴定再生植株倍性,没有发现明显变化。【结论】建立了高效的软枣猕猴桃‘魁绿’休眠芽玻璃化超低温保存体系。