环状RNA同源性蛋白激酶3靶向微RNA-338促进胶质瘤细胞侵袭、迁移的实验研究

目的探讨人血清环状RNA同源性蛋白激酶3(CircHIPK3)靶向微RNA-338(miR-338)对胶质瘤细胞U251细胞侵袭、迁移的影响。方法2021年2-12月,在武汉大学人民医院科研中心将U251细胞分为空白(NG)组、CircHIPK3阴性对照(shcontrol)组、HIPK3敲减(sh-CircHIPK3)组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测U251细胞中CircHIPK3、miR-338表达水平;Transwell检测细胞迁移与侵袭;划痕法检测细胞迁移;流式细胞术检测细胞周期;通过Circular RNA Interactome、RegRNA2.0、CircBank Database网站预测CircHIPK3(ID:hsa_circ_0000284)的靶向miRNA并用双萤光素酶实验验证,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。结果与NG组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组中CircHIPK3(1.00±0.00、1.06±0.26比0.56±0.06)表达水平显著降低(P<0.05),miR-338(1.00±0.00、1.12±0.19比1.89±0.28)表达、G1期细胞比例[(58.72±0.36)%、(58.45±0.27)%比(64.72±0.47)%]升高(P<0.05),U251细胞侵袭数目[(164.89±12.55)个、(165.77±12.16)个比(80.13±11.37)个]、划痕愈合率[(25.66±2.37)%、(26.38±2.53)%比(10.36±1.53)%]、迁移细胞数目[(196.72±18.75)个、(194.65±17.86)个比(95.58±8.66)个]、S期细胞比例[(26.45±0.39)%、(26.57±0.41)%比(20.72±0.18)%]明显降低(P<0.05);miR-338是CircHIPK3的靶基因。与NG组、sh-control组比较,sh-CircHIPK3组MMP-2(1.31±0.23、1.33±0.20比0.61±0.05)、MMP-9(1.16±0.22、1.15±0.21比0.85±0.19)蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论沉默CircHIPK3通过靶向上调miR-338表达能抑制胶质瘤细胞U251细胞迁移和侵袭。

miR-338-3p通过靶向PPM1B促进口腔癌细胞凋亡

目的探讨miR-338-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用及其调节细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法以正常口腔组织或成人牙龈成纤维细胞(HGF)作为对照组,RT-qPCR法检测OSCC组织或OSCC细胞(TSCCA,CAL-27,Tb3.1)中miR-338-3p和PPM1B mRNA的表达情况;免疫组化法检测OSCC组织与正常组织PPM1B表达量;过表达miR-338-3p后,MTT法检测OSCC细胞增殖、Annexin V-FITC-PI双染试剂盒检测OSCC的凋亡;Western blot法检测PPM1B与凋亡相关蛋白Bax和Claved-caspase 3、Bcl-2的表达;采用生物信息学软件Target scan网站和荧光素酶检测法探索miR-338-3p和PPM1B潜在的靶向关系。通过敲除和过表达PPM1B探索其对OSCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果OSCC组织和细胞中miR-338-3p表达下调,而PPM1B mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05)。过表达miR-338-3p可抑制OSCC细胞的增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示,miR-338-3p可以促进Bax和Claved-caspase 3并抑制PPM1B、Bcl-2的表达(P<0.05)。敲除PPM1B也抑制了细胞的生长并诱导细胞凋亡(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示PPM1B和miR-338-3p之间有直接结合(P<0.05)。过表达PPM1B部分逆转了miR-338-3p对OSCC细胞增殖、凋亡的作用(P<0.05)。结论miR-338-3p在OSCC患者和OSCC细胞系中表达下调。过表达miR-338-3p通过靶向PPM1B,抑制OSCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

血清miR-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用

目的探讨血清微小RNA(miR)-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用。方法选取2020年11月至2022年11月在沧州市中心医院接受治疗的腺病毒肺炎患儿130例作为观察组,根据患儿疾病的严重程度分为轻症肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=40),选取同期在沧州市中心医院检查的130例健康儿童为对照组,比较观察组和对照组、不同病情严重程度患儿血清miR-338-3p和miR-495-3p水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-338-3p和miR-495-3p对重症腺病毒肺炎的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析重症腺病毒肺炎的影响因素。结果观察组患儿血清miR-338-3p水平比对照组低,miR-495-3p水平比对照组高(P<0.05)。轻症组和重症组电解质紊乱、循环系统并发症发生率及miR-338-3p水平、miR-495-3p水平、序贯器官衰竭评分和Murray肺损伤评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-338-3p、miR-495-3p辅助诊断重症腺病毒肺炎的曲线下面积(AUC)分别是0.745(95%CI 0.662~0.828)、0.774(95%CI 0.685~0.863),二者联合诊断的AUC为0.884(95%CI 0.821~0.946),均优于各项指标单独检测(Z=2.593、1.963,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-495-3p是影响重症腺病毒肺炎发生的危险因素,miR-338-3p为保护因素(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清miR-338-3p水平降低,miR-495-3p水平升高,且二者联合检测对重症腺病毒肺炎有一定的诊断价值,可作为评估重症腺病毒肺炎病情严重程度的血清指标。

血清miR-338-3p联合肺部超声评分预测急性呼吸窘迫综合征新生儿的预后价值

目的探讨血清miR-338-3p、肺部超声评分(LUS)对新生儿呼吸窘迫综合征(ARDS)预后价值。方法选择2019年5月至2022年5月在深圳市宝安区石岩人民医院收治的120例ARDS新生儿作为ARDS组,其中男性76例,女性44例;胎龄28~40周,平均胎龄32.32周;出生体质量1.68~3.89 kg,平均出生体质量2.18 kg;新生儿Apgar评分4~8分,平均Apgar评分6.37分;分娩方式,顺产43例,剖宫产57例;病因,脓毒症10例,早产29例,肺炎25例,胎粪吸入综合征21例,其他15例。选择同时期50例正常新生儿为对照组,其中男性34例,女性16例;胎龄31~40周,平均胎龄33.04周;出生体质量1.94~4.02 kg,平均出生体质量2.74 kg;分娩方式,顺产17例,剖宫产33例。ARDS新生儿根据预后分为生存组与死亡组,根据胸部X射线片结果分为轻度组与重度组。实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测血浆miR-338-3p水平,进行床旁肺部LUS及新生儿急性生理学评分围生期补充Ⅱ(SNAPPE-Ⅱ)评分。比较各组血浆miR-338-3p水平、LUS。Pearson相关性分析SNAPPE-Ⅱ与miR-338-3p、LUS的相关性。受试者工作特性(ROC)曲线分析miR-338-3p、LUS对ARDS新生儿死亡的预测价值。采用Logistic回归分析法分析miR-338-3p水平、LUS与ARDS新生儿预后的关系。结果ARDS新生儿LUS高于正常新生儿[(29.45±3.42)分vs(10.04±2.01)分],血浆miR-338-3p水平低于正常新生儿[(10.04±2.01)分vs(1.12±0.11)分](P<0.001)。重度组LUS、SNAPPE-Ⅱ评分高于轻度组[(34.27±4.25)分vs(18.97±2.11)分、(31.84±3.52)分vs(18.56±2.85)分],miR-338-3p水平低于轻度组[(0.28±0.02)vs(0.96±0.04)](P<0.001)。SNAPPE-Ⅱ评分与LUS呈正相关(r=0.971,P<0.001),与miR-338-3p水平呈负相关(r=-0.918,P<0.001)。死亡组新生儿LUS高于生存组,miR-338-3p水平低于生存组[(37.02±3.63)分vs(20.77±3.02)分、(0.33±0.02)vs(0.75±0.02)。P<0.001]。LUS评分、血浆miR-338-3p及两者联合预测ARDS新生儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.851、0.835、0.929。血浆miR-338-3p、LUS是影响ARDS新生儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论ARDS新生儿血清miR-338-3p低表达,LUS升高,两者可预测ARDS新生儿病情程度、预后。

circ_0061140靶向miR-338-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的:研究环状RNA 0061140(circ_0061140)对多发性骨髓瘤Sko-007细胞增殖和凋亡的影响和调控机制。方法:采用生物信息学数据库预测circ_0061140的靶miRNA,双荧光素酶报告实验证实circ_0061140与miR-338-3p靶向关系。实时定量PCR分析健康对照者和多发性骨髓瘤病人外周血中circ_0061140和miR-338-3p表达。将circ_0061140小干扰RNA(si-circ_0061140)、miR-338-3p模拟物、si-circ_0061140联合miR-338-3p抑制剂分别转染Sko-007,采用CCK-8法、流式细胞术分析干扰circ_0061140或过表达miR-338-3p或同时抑制circ_0061140和miR-338-3p对Sko-007细胞增殖、凋亡的影响。蛋白质印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)表达变化。结果:miR-338-3p是circ_0061140达靶基因。circ_0061140在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著高于健康对照者(P<0.01),miR-338-3p在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.01)。干扰circ_0061140表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),miR-338-3p和Bax表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。过表达miR-338-3p后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著升高(P<0.01)。与干扰circ_0061140比较,同时抑制circ_0061140和miR-338-3p表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著升高(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著降低(P<0.01)。结论:circ_0061140通过靶向miR-338-3p促进多发性骨髓瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,在多发性骨髓瘤中具有致癌作用。

甲状腺乳头状癌组织中miR-338-3p、PLCD3表达及其与病理参数、上皮—间质转化、预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小核糖核酸-338-3p(miR-338-3p)、磷脂酶Cδ-3(PLCD3)表达及与病理参数、上皮—间质转化(EMT)、预后的关系。方法选取2016年1月—2020年12月商洛市中心医院乳甲外科收治接受手术切除的PTC患者152例,取其癌组织及对应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白[N-钙黏蛋白(N-Cad)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、波形蛋白(VIM)];分析miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达与PTC病理参数的关系;通过Targetscan数据库预测miR-338-3p与PLCD3的结合位点,采用Pearson法和二列相关性分析miR-338-3p与PLCD3 mRNA及二者与EMT相关蛋白在PTC组织中表达的相关性;根据PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达均值分为高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达组,通过Kaplan-Meier法绘制高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达PTC患者无病生存率(DFS)生存曲线;通过Cox回归分析PTC患者DFS的影响因素。结果与癌旁组织比较,PTC组织miR-338-3p和E-Cad蛋白阳性表达率降低,PLCD3 mRNA和N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高(t/χ^(2)/P=32.875/<0.001、15.575/<0.001、37.351/<0.001、21.984/<0.001、16.604/<0.001);miR-338-3p与PLCD3 mRNA在PTC组织中表达呈负相关(r/P=-0.712/<0.001)。PTC组织中miR-338-3p与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈负相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈正相关(r/P=-0.642/<0.001、-0.617/<0.001、0.622/<0.001);PTC组织中PLCD3 mRNA与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈正相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈负相关(r/P=0.657/<0.001、0.624/<0.001、-0.632/<0.001)。不同TNM分期、淋巴结转移的PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达差异有统计学意义(F/t/P=30.778/<0.001、3.430/0.001)。miR-338-3p高表达组3年DFS高于低表达组,PLCD3 mRNA高表达组3年DFS低于低表达组(χ^(2)/P=15.615/<0.001、16.088/<0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PLCD3 mRNA≥1.83为PTC患者DFS的独立危险因素[HR(95%CI)=3.127(1.361~7.604)、2.546(1.115~5.817)、2.854(1.178~6.919)],miR-338-3p≥0.57为独立保护因素[HR(95%CI)=0.306(0.116~0.804)]。结论PTC组织中miR-338-3p低表达和PLCD3 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移、EMT和预后有关,可能成为PTC诊治新靶点。

调控circARF3/miR-338-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的:探讨调控circARF3/miR-338-3p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其可能作用机制。方法:采用双荧光素酶报告实验验证circARF3与miR-338-3p的靶向关系。人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为6组:空白对照组(未处理)、模型组(50 mg/L ox-LDL处理24 h)、pcDNA组、pcDNA-circARF3组、pcDNA-circARF3+miR-NC组、pcDNA-circARF3+miR-338-3p组,后4组基于脂质体转染法分别转染相应质粒后再用ox-LDL处理24 h。采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法分别检测细胞增殖及凋亡,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达,采用试剂盒检测培养上清液中SOD、LDH活性和MDA的水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α水平。结果:circARF3可靶向结合、负向调控miR-338-3p。与空白对照组比较,模型组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达均升高,而Bcl-2蛋白表达降低,培养上清液中SOD活性降低,MDA水平和LDH活性升高,IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);与模型组、pcDNA组相比,pcDNA-circARF3组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达提高,培养上清液中SOD活性升高,MDA水平和LDH活性降低,IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);与pcDNA-circARF3+miR-NC组比较,pcDNA-circARF3+miR-338-3p组增殖抑制率、凋亡率和Bax蛋白表达均升高,Bcl-2蛋白表达降低,培养上清液中SOD活性降低,MDA水平和LDH活性升高,IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05)。结论:circARF3过表达可能通过抑制miR-338-3p削弱ox-LDL引发的血管内皮细胞损伤。

早熟抗倒油菜新品种得中油338的选育与繁育技术

得中油338是汉中市得中农业科技发展有限公司用不育系D36A与恢复系169R组配选育成的杂交油菜新品种,该品种在2016-2018年西南冬油菜区多点区域试验中表现优良,两年度平均产量为3231.3 kg/hm^(2),比对照增产9.36%,抗倒性强,全生育期219.6 d,比对照早熟2.4 d,2019年通过国家非主要农作物品种登记。该研究介绍了该品种的选育过程、栽培技术和繁育技术,为该品种推广应用提供技术依据。

miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体影响牙槽骨成骨细胞增殖及凋亡

背景:miR-338-3p能够抑制破骨细胞分化,下调核因子κB受体活化因子配体水平能够促进骨形成。然而miR-338-3p是否通过调控核因子κB受体活化因子配体表达影响牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡尚不清楚。目的:探究miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法:分离人牙槽骨成骨细胞,对其进行细胞转染及Wnt-C59(Wnt/β-catenin通路抑制剂)处理,分为转染对照组、miR-338-3p组、miR-338-3p+对照组、miR-338-3p+核因子κB受体活化因子配体组和miR-338-3p+Wnt-C59组。双荧光素酶实验验证miR-338-3p对核因子κB受体活化因子配体的调控作用;CCK-8、EdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞周期和凋亡水平;RT-qPCR检测细胞miR-338-3p、核因子κB受体活化因子配体、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3βmRNA表达水平;Western Blot检测细胞核因子κB受体活化因子配体、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、Wnt-3a、β-catenin、糖原合酶激酶3β蛋白表达水平。结果与结论:①miR-338-3p靶向调控核因子κB受体活化因子配体;②过表达miR-338-3p后,细胞存活率、EdU阳性细胞率、S期细胞比例升高,细胞凋亡率降低,miR-338-3p、增殖细胞核抗原、Ki67、细胞周期蛋白D1、Bcl-2、Wnt-3a、β-catenin mRNA和蛋白水平升高,Bax、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3、核因子κB受体活化因子配体、糖原合酶激酶3βmRNA和蛋白水平降低(均P<0.05);③过表达核因子κB受体活化因子配体或Wnt-C59处理能够减弱过表达miR-338-3p对细胞增殖、凋亡的影响(均P<0.05);④结果表明,miR-338-3p靶向核因子κB受体活化因子配体表达可促进牙槽骨成骨细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

未破裂颅内动脉瘤病人血清miR-338-3p表达变化及临床意义

目的:分析未破裂颅内动脉瘤(UIAs)病人血清微小RNA-338-3p(miR-338-3p)的表达情况及其临床意义。方法:选取住院的UIAs病人105例作为观察组,另选取同期无脑动脉瘤的常规体检者100名作为对照组。UIAs病人入院后1 d、对照组体检当日的清晨空腹肘静脉血,检测血清miR-338-3p、血清基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平,分析血清miR-338-3p、MMP-2表达与UIAs病人临床病理特征的关系,采用Pearson相关分析UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2的相关性。结果:观察组血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组(P<0.01和P<0.05)。不同动脉瘤直径及动脉瘤数目病人血清miR-338-3p、MMP-2水平差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01)。Pearson相关分析显示,UIAs病人血清miR-338-3p与MMP-2呈显著正相关关系(P<0.01)。结论:UIAs病人血清miR-338-3p、MMP-2水平均高于对照组,二者呈正相关,且均与病人动脉瘤直径和数目有关。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

不同施氮量对棉花鲁棉338生长发育及产量的影响

为明确不同施氮量对棉花生长发育及产量的影响,以鲁棉338为试验材料,采用单因素随机区组试验设计,设置5个施氮水平,研究不同施氮水平对鲁棉338株高、叶片SPAD值和产量的影响。结果表明:随着棉花生育进程的推进,不同施氮水平下的株高均呈现逐渐上升的趋势;施氮处理棉花功能叶片SPAD值显著高于不施氮处理;施氮量300、400 kg/hm^(2)的处理棉花单株铃数、单铃重、籽棉产量、皮棉产量较高。综合来看,在鲁棉338种植生产中,施氮量控制在300 kg/hm^(2)最为适宜。

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。方法 采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P<0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P<0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P<0.05)。结论 抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。

水稻新品种通育338选育技术报告

通化市农业科学研究院利用通育120为母本,以通育211与野生植物月见草远缘杂交后代材料为父本杂交得到的F1为母本,再以云浪香为父本进行复交,选育而成水稻新品种通育338,2021年通过吉林省审定。文章介绍了通育338品种来源、选育经过、特征特性、产量表现以及适应区域,又从播种育秧、插秧、施肥、管水、病虫草害防治等方面总结了其高产栽培技术。

miR-338-5p过表达对胃癌细胞进展及耐药基因表达的影响

目的探讨miR-338-5p过表达对胃癌细胞侵袭和耐药性的影响。方法人胃癌细胞MKN-45分为mimics组、mimics-NC组、inhibitor组和inhibitor-NC组,分别转染miR-338-5p-mimics、miR-338-5p-inhibitor及其NC质粒,未行转染的人胃癌细胞MKN-45为对照组。在转染培育24 h后,用CCK-8检测细胞的增殖活性,体外侵袭实验测定细胞的迁移及侵袭能力;使用qRT-PCR检测各组细胞中的耐药基因P-糖蛋白(PGP)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白B2(ATP-binding cassette transporter B2,ABCB2)和G2(ABCG2)相关mRNA的表达;Western blot测定各组细胞中的第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化蛋白激酶B(phosphoprotein kinases B,p-AKT)蛋白表达。结果与对照组和mimics-NC组相比,mimics组细胞增殖活力下降(P<0.05),细胞的迁移侵袭能力、耐药性相关PGP、ABCB2、ABCG2的mRNA表达下降(P<0.05);细胞中PTEN表达量上升(P<0.05),p-AKT蛋白表达量下降(P<0.05),AKT蛋白无显著变化(P>0.05)。与对照组和inhibitor-NC组相比,inhibitor组细胞抑制率下降(P<0.05),细胞迁移侵袭能力、PGP、ABCB2、ABCG2的mRNA表达上升(P<0.05),PTEN表达量下降(P<0.05),p-AKT蛋白表达量上升(P<0.05),AKT蛋白无显著变化(P>0.05)。结论miR-338-5p影响PTEN/AKT通路的表达,抑制耐药基因表达和胃癌细胞的侵袭迁移,从而抑制胃癌细胞的增殖。

下调lncRNA DSCAM-AS1表达通过负调控miR-338-3p抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DSCAM-AS1对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染DSCAM-AS1)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-DSCAM-AS1组(转染pcDNA-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-NC)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-338-3p组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-338-3p)均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中;采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-338-3p和DSCAM-AS1 mRNA的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测荧光活性;各组细胞侵袭和迁移采用Transwell检测;细胞活性采用噻唑蓝(MTT)法检测;蛋白表达采用Western印迹检测。结果与正常结直黏膜上皮细胞NCM460相比,结直肠癌细胞SW480、HT29、SW1116中DSCAM-AS1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05);下调DSCAM-AS1、过表达miR-338-3p均可显著抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。DSCAM-AS1抑制miR-338-3p表达,靶向调控miR-338-3p的表达,部分逆转下调DSCAM-AS1对SW480细胞侵袭、迁移和增殖的抑制作用。结论lncRNA DSCAM-AS1对结直肠癌细胞的调控机制可能与靶向调控miR-338-3p有关,可对癌细胞的侵袭、迁移、增殖起到抑制作用,可为结直肠癌的治疗、预防和诊断提供新靶点。

健脾合剂调控miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p干预IBS-D大鼠的作用机制研究

目的基于miRNA-219a-5p、miRNA-338-3p探讨健脾合剂干预腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠的作用机制。方法采用急-慢应激法联合番泻叶灌胃法制备IBS-D大鼠模型,分组后给予健脾合剂干预。实验过程中及治疗完成后,记录大鼠一般情况、体质量及粪便性状;采用直肠扩张下腹壁回缩反射(Abdominal withdrawal reflex,AWR)评分检测大鼠的疼痛阈值,评估IBS-D大鼠的内脏敏感性;采用显色基质鲎试剂检测大鼠血液中的细菌内毒素含量,观察其肠道通透性变化;观察大鼠结肠黏膜组织病理,对其肠黏膜状态进行评估;并使用RT-PCR法检测大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p的含量。结果粪便性状评分、内脏敏感性测定、组织病理结果表明IBS-D大鼠模型制备成功。与空白组比较,模型组大鼠大便稀溏甚则水样,体质量下降;健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠大便成形,粪便Bristol评分显著降低,体质量有所增加。内脏敏感性结果显示,IBS-D大鼠内脏疼痛阈值下降;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内脏疼痛阈值有所升高,内脏敏感性降低。显色基质鲎试剂检测结果显示,IBS-D大鼠血清内毒素含量升高;健脾合剂干预后,低剂量组及高剂量组大鼠内毒素含量较前下降,肠道通透性降低。大鼠结肠粘膜病理结果表明,IBS-D大鼠结肠组织黏膜上皮轻度破损,局部可见水肿。健脾合剂治疗后,低剂量组及高剂量组大鼠结肠黏膜上述情况得到有效改善。Realtime PCR法检测大鼠结肠粘膜结果显示,IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平显著降低,健脾合剂治疗后,高剂量组大鼠miR-219a-5p、miR-338-3p含量有所升高。结论健脾合剂对改善IBS-D症状具有一定的作用,健脾合剂能够增加IBS-D大鼠结肠黏膜miR-219a-5p、miR-338-3p水平,提示其可能通过对miR-219a-5p、miR-338-3p的调控降低IBS-D大鼠的肠道通透性及内脏敏感性,从而发挥疗效。

LncRNA TUC338通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNATUC338(lncRNA TUC338)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭及表皮生长因子受体(EGFR)/磷酸肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法收集2019年7月—2021年6月我院胸外科手术切除的37例NSCLC患者肺癌组织与癌旁组织标本,RT-qPCR检测组织标本及NSCLC细胞中lncRNA TUC338表达;对NCI-H157细胞进行干预,将si-TUC338、si-NC、pcDNA-TUC338、pcDNA-NC质粒转染细胞及EGFR与PI3K双重抑制剂MTX-211(MTX-211)、pcDNA-TUC338与MTX-211共同处理细胞,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移与侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白及EGFR、PI3K、AKT相关蛋白表达。结果LncRNA TUC338在肺癌组织与细胞中高表达;抑制lncRNA TUC338表达可显著抑制NCI-H157细胞增殖、迁移与侵袭及EGFR/PI3K/AKT通路激活(P<0.05);过表达lncRNA TUC338可促进NCI-H157细胞增殖、迁移与侵袭及EGFR/PI3K/AKT激活(P<0.05)。结论LncRNA TUC338在肺癌中呈高表达,可能通过激活EGFR/PI3K/AKT信号通路促进肺癌NCI-H157细胞增殖、迁移与侵袭。

Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:qRT-PCR、Western Blot分别检测正常人尿路上皮细胞系SV-HUC-1细胞、T24膀胱癌细胞Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4表达;将si-NC、si-Circ_0058063、si-Circ_0058063+inhibitor NC、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor分别转染至T24细胞并命名为si-NC组、si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC组、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组,未做任何处理的T24细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验检测Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4关系;qRT-PCR检测T24细胞中Circ_0058063、miR-338-3p表达;CCK-8法检测T24细胞增殖情况;流式细胞术检测T24细胞凋亡率;Transwell检测T24细胞侵袭、迁移数量;Western Blot检测T24细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的蛋白水平。结果:与SV-HUC-1细胞相比,T24细胞中Circ_00 58063、SOX4水平显著上调(P<0.05),miR-338-3p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组T24细胞OD_(450)值、迁移、侵袭细胞数量、Circ_0058063表达量、SOX4、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),T24细胞凋亡率、miR-338-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而miR-338-3p表达下调逆转了沉默Circ_0058063抑制T24细胞增殖、迁移和侵袭的效果;Circ_0058063靶向调节miR-338-3p/SOX4轴。结论:沉默Circ_0058063可能通过上调miR-338-3p来抑制SOX4表达,进而对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影响。

外周血miR-338-5p、miR-140-5p在HBV相关肝细胞癌患者中表达水平及临床意义

目的 探讨外周血血清中微小RNA(microRNA, miR)-338-5p、miR-140-5p在HBV相关肝细胞癌患者中表达水平及临床意义。方法 选取2017年11月—2020年11月我院收治的HBV相关肝细胞癌患者95例作为肝细胞癌组,另选取同时期HBV相关良性肝病患者100例作为良性组,及健康体检者100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p表达水平及HBV DNA载量,采用Pearson相关分析分析HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p表达水平与HBV DNA载量的关系,采用多因素Logistic回归模型分析影响HBV相关肝细胞癌发生的危险因素;ROC曲线分析miR-338-5p、miR-140-5p、异常凝血酶原-Ⅱ(abnormal prothrombin-Ⅱ,PIVKA-Ⅱ)表达对HBV相关肝细胞癌的诊断价值。结果 外周血血清中miR-338-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平从高至低依次为肝细胞癌组[(2.73±0.88)、(103.14,319.19)mAU/ml]、良性组[(1.48±0.40)、(32.70,87.15)mAU/ml]、对照组[(1.00±0.27)、(10.36,16.82)mAU/ml],外周血血清中miR-140-5p表达水平从高至低依次为对照组(1.00±0.25)、良性组(0.72±0.20)、肝细胞癌组(0.38±0.12),两两比较差异均具有统计学意义(P均<0.05);肝细胞癌组患者HBVDNA载量(144.97±47.32)明显高于良性组(75.66±21.91)(P <0.05)。不同TNM分期患者间比较,外周血血清中miR-338-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平及HBV DNA载量从高至低依次为TNMⅣ期、Ⅲ期、Ⅱ期、Ⅰ期,外周血血清中miR-140-5p表达水平从高至低依次为TNMⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期,两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p表达水平与HBVDNA载量呈正相关(P <0.05),而miR-140-5p表达水平与HBV DNA载量呈负相关(P <0.05)。HBV相关肝细胞癌发生与患者有无糖尿病史、有无长期饮酒史、HBV DNA载量及外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平有关(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析显示外周血血清中PIVKA-Ⅱ> 40 mAU/ml、miR-338-5p高表达、miR-140-5p低表达是影响HBV相关肝细胞癌发生的独立危险因素(P <0.05)。外周血血清中miR-338-5p、miR-140-5p、PIVKA-Ⅱ表达水平联合诊断HBV相关肝细胞癌的AUC为0.930,明显高于3指标单独诊断的AUC(P均<0.05),联合诊断的敏感度为98.90%,特异度为87.00%。结论 HBV相关肝细胞癌患者外周血血清中miR-338-5p高表达,miR-140-5p低表达,2者可作为评估HBV相关肝细胞癌发生的血清指标,2者联合PIVKA-Ⅱ更有利于诊断HBV相关肝细胞癌。