Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of embryogenic callus and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in‘Feizixiao'litchi

Litchi(Litchi chinensis Sonn.)is a type of commercially prevalent subtropical and tropical fruit.Since litchi has a highly heterozygous genetic background and a long reproductive cycle,conventional breeding methods(such as hybridization)have limited ability to nurture new litchi cultivars.Here,an efficient and stable Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of embryogenic callus was established in‘Feizixiao’litchi.Transgenic materials were verified using polymerase chain reaction(PCR)analysis,β-glucuronidase(GUS)assay,and green fluorescent protein(GFP)assay.To implement the technology of the Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats(CRISPR)/associated protein 9(CRISPR/Cas9)technology in‘Feizixiao’litchi and verify the validity of these transformation systems,the litchi polyphenol oxidase gene(LcPPO,JF926153)was knocked out.Various categories of mutations,covering base insertions,deletions,and substitutions,were found in transgenic materials via sequence analysis.The transformation system achieved high feasibility and efficiency,and the system of CRISPR/Cas9 was successfully employed to edit genes in‘Feizixiao’litchi.This work provides an essential foundation for investigating the functions of genes and accelerating litchi genetic improvement.

“妃子笑”荔枝高产若干生长发育性状

“妃子笑”荔枝是我国栽培区域最广的荔枝品种,比较研究不同区域“妃子笑”生长发育特性可为树冠、养分管理和成花着果调控及区域适应性发展等参考,为荔枝品种制订高产和克服“大小年”技术方案提供借鉴。2008—2022年,调查统计华南六省(区)北纬18°32′~28°47′的24县(区)39个示范园“妃子笑”物候期;于始花期调查海南、广东、广西和云南省(区)18个果园“妃子笑”结果树枝条、叶片和花穗生长量,并取样分析枝条、叶片、花穗主要养分含量,计算植株不同部位营养需求量。结果表明,主产区“妃子笑”末次秋梢成熟期8月下旬至11月中旬,现“白点”(花穗原基)期11月下旬至翌年2月中旬,盛花期2月上旬至4月上旬,果实成熟期4月下旬至7月底。3次秋梢生长分别约为35.9、39.5和40.2 d,秋梢老熟至现花穗原基(花诱导)约87 d,花穗与花芽分化期约56 d,果实发育期约需63 d。海南等地区“妃子笑”采果后树冠重回缩修剪至1.5 m高,形成矮化树形,而粤西等地修剪至2~3 m高,塑造高大树形。“妃子笑”结果植株采果后秋梢生长1~3次,树冠表面积的平均枝梢数16条/m2,秋梢平均长度37.7 cm,秋梢复叶数17片、叶片数104片。“妃子笑”单株不同部位年生长量,以鲜质量计分别为秋梢枝条16.8 kg,叶片40.2 kg,花穗17.2 kg;以干质量计为秋梢枝条9.50 kg,叶片23.24kg,花穗7.19kg。主要养分含量为秋梢枝条中氮0.76%、磷0.26%、钾0.72%、钙0.54%、镁0.15%;叶片中氮1.79%、磷0.17%、钾0.94%、钙0.77%、镁0.25%;花穗中氮2.20%、磷0.30%、钾1.74%、钙0.32%、镁0.29%。单株50 kg的产量,年度枝叶、花穗和果实生长所需主要元素为氮0.70 kg、磷0.10 kg、钾0.46 kg,秋梢期氮、磷、钾用量分别占比全年用量的71.4%、70.0%、63.0%。从多年产量稳定性看,海南省陵水县、琼海市、海口市,广西北海铁山港区、合浦县,广东省廉江市等地是“妃子笑”适应性表现较好的栽培区。综合而言,随着纬度北移和海拔升高,“妃子笑”物候期延后,果实成熟期持续3个月以上;各地区“妃子笑”物候期相差较大的是末次秋梢成熟期和果实成熟期,差异较小的是花芽诱导期;枝叶养分需求较大,确保秋梢生长量是支撑产量和品质的重要基础。

荔枝落果中A型低聚原花青素抑制类甜蛋白促炎机制

以荔枝落果中的A型低聚原花青素为研究对象,探讨其对荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)促炎的抑制机理。采用乙醇提取、大孔吸附树脂纯化以及制备液相色谱仪等从荔枝落果中分离得到A型低聚原花青素(A-type oligomeric proanthocyanidins,A-OPC)纯化物,并对A-OPC结构鉴定,主要成分为原花青素A2、2个A型原花青素三聚体和1个A型四聚体,纯度达88.69%。利用LcTLP诱导构建RAW264.7细胞炎症模型,A-OPC的添加可抑制LcTLP诱导RAW264.7细胞的一氧化氮、细胞炎症因子白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α的分泌,在120μg/mL质量浓度下,抑制率分别可达58.38%、39.80%和86.31%(P<0.01)。蛋白免疫印迹分析发现,在120μg/mL质量浓度下A-OPC可降低诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶2的表达量,并显著降低p65、核因子κB抑制蛋白、c-Jun氨基末端激酶、细胞外信号调节蛋白激酶和p38的磷酸化水平,说明A-OPC通过下调核转录因子-κB和丝裂原活化蛋白激酶通路中下游蛋白的磷酸化水平抑制LcTLP诱导的炎症反应。

抑霉唑、咪鲜胺及其代谢物在荔枝贮藏保鲜中的残留动态及安全评价

为评估抑霉唑和咪鲜胺在荔枝全果、果皮和果肉的残留情况及膳食风险,本研究建立了同时测定抑霉唑、咪鲜胺及其代谢物含量的气相色谱-串联质谱法。该方法检测抑霉唑、咪鲜胺、咪唑乙醇和2,4,6-三氯苯酚的方法检出限(LOD)分别为2.0、3.0、6.0、0.3μg/kg;定量限(LOQ)分别为6.0、10.0、20.0、1.0μg/kg;在荔枝全果、果皮和果肉中的添加回收率为78.9%~107%、RSD为2.6%~5.8%。保鲜实验结果表明,抑霉唑、咪鲜胺浸果浓度越高残留量越高,残留物随贮藏时间延长由果皮逐渐迁移到果肉中。全果和果皮中抑霉唑、咪鲜胺的残留量随贮藏时间延长不断降低,果肉则于浸泡后第7 d达到最大值再逐渐消解。代谢咪唑乙醇和2,4,6-三氯苯酚随着贮藏时间增加不断升高。用质量浓度为500 mg/L的抑霉唑、咪鲜胺溶液分别浸泡保鲜,安全间隔期14 d内荔枝咪鲜胺的慢性、急性膳食摄入风险在可接受的范围内。

荔枝VQ基因家族鉴定及其对非生物胁迫的响应

【目的】VQ蛋白是一类含有保守VQ基序(FxxhVQxhTG)的植物特异性蛋白,在植物生长发育和非生物胁迫应答中发挥重要作用。研究鉴定了荔枝VQ基因家族,并分析其在不同组织的表达模式及在低温、高温、干旱和盐胁迫下的应答,为后续研究其抗逆机制奠定了基础。【方法】用生物信息学方法在荔枝全基因组中鉴定LcVQ基因,并对其理化性质、亚细胞定位、基因结构和保守基序等进行分析;用MEGA 6.0软件构建系统发育树,分析荔枝、拟南芥和水稻VQ蛋白的系统发育关系;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证LcVQs对多种非生物胁迫的响应情况。【结果】荔枝中共鉴定获得可聚类为9个亚族的18个VQ基因(LcVQ1-18),依次分布在荔枝的11条染色体上,其编码蛋白的氨基酸数介于111~427之间,分子质量为12.48~45.49 kD;除LcVQ15和LcVQ17定位于细胞质之外,其余LcVQ蛋白均定位于细胞核。LcVQs启动子区域包含大量植物生长发育响应元件、激素响应元件及逆境响应元件。LcVQs的表达量在不同组织中具有明显差异,总体上分为普遍性表达和特异性表达。LcVQs可快速响应非生物胁迫,在低温、高温、干旱和盐胁迫处理3 h内分别有4,3,3,4个LcVQs明显上调表达。【结论】荔枝全基因组中有18个VQ家族成员,具有典型VQ保守结构域,能差异化响应多种非生物胁迫。

荔枝GRF基因家族的全基因组鉴定及表达分析

为揭示荔枝(Litchi chinensis)GFR基因的功能,对荔枝生长调控因子(LcGRF)基因家族进行了全基因组鉴定和分析,并研究其在荔枝中的表达模式。基于荔枝基因组数据库,使用生物信息学软件对LcGRFs家族成员进行全基因组鉴定,分析基本理化性质、染色体定位、基因结构、进化关系、蛋白保守基序、顺式作用元件和时空表达情况进行系统分析。共获得12个GRF基因,不均匀地分布在10条染色体上,内含子2~5个。蛋白保守基序分析发现,荔枝GRF蛋白均含有保守的motif1(WRC)和motif2(QLQ),进化分析LcGRF划分为5个亚家族,LcGRFs启动子上存在大量的光、植物激素、非生物胁迫响应以及生长发育相关的顺式作用元件。不同转录组表达模式结果显示,各个组织中呈现出多样化的表达特征,表明不同成员可能在荔枝不同生长发育过程中发挥调控作用,参与调节荔枝的生长发育。研究显示,荔枝GRF家族成员有12个,划分为5个亚家族。

不同生长调节剂对‘妃子笑’荔枝开花的调控效应

为探究高效的荔枝花穗处理技术,以‘妃子笑’品种荔枝为试验材料,采用烯效唑、调环酸钙、复硝酚钠、乙氧氟草醚、脱落酸和胺鲜脂6种试剂处理花穗,并比较不同处理对荔枝开花的调控效应。结果表明,6种处理均可延长花穗的雌花开放时长,以烯效唑处理的效果最好,平均雌花期23d;在花量与雌花率上,除了调环酸钙处理显著提高雄花量与总花量,烯效唑处理显著降低雄花量而提高雌花量与雌花率,其余处理总花量和雌花量与对照(CK)无显著差异,但雌花率均高于CK,排序为:脱落酸处理>胺鲜脂处理>复硝酚钠处理>乙氧氟草醚处理。结果将为进一步科学调控荔枝花穗、促进坐果提供技术参考。

无核荔枝僵果病的病原菌鉴定、入侵途径及快速检测技术

2022年在海南无核荔枝上发现一种僵果病,与海南常见的荔枝病害炭疽病、酸腐病等病症差别明显,主要为害幼果,发病时幼果果实外观无明显变化,但无核荔枝完成疏果后,果实长至蚕豆大小时,发病果实的外果皮颜色变暗,剖开后内果皮发生不规则褐变,果实不再膨大,形成僵果,易造成严重的经济损失。本研究对该病害的病原菌进行分离和鉴定,对入侵途径和快速检测技术进行研究。结果表明:通过形态学鉴定、ITS、RBP2和TEF1基因序列分析,鉴定引起无核荔枝新型僵果病的病原菌为伯氏镰刀菌(Fusarium pernambucanum)。无核荔枝幼果期果实果皮受农事操作、风、刺吸性昆虫为害等损伤后,易受到病原菌的入侵发病,而果实表面无伤口时不发病。病原菌入侵主要集中在果实纵经3.2~4.8 mm的幼果期,随着果实的生长、果皮保护组织的增加和伤口的减少,病原菌难以入侵,果实发病率快速降低。基于TUB基因序列,以伯氏镰刀菌及其他分离获得的镰刀菌属菌株基因组DNA为模板进行扩增测序,根据序列信息设计筛选出一对伯氏镰刀菌的特异性引物,构建了基于普通PCR的快速高效分子检测方法,该检测方法灵敏、高效,可用于指导无核荔枝僵果病的早期诊断与预防。

钙镁叶面肥混合喷施减轻“妃子笑”荔枝果实“退糖”现象原因分析

“妃子笑”荔枝成熟期存在果肉“退糖”现象,前期研究表明叶面喷施钙镁混合肥可有效减缓果肉“退糖”,抑制果肉呼吸作用是原因之一。本文拟探讨叶面喷施钙镁肥对“妃子笑”荔枝果肉磷酸戊糖途径(PPP)呼吸速率的影响,分别进行树冠喷布0.3%CaCl_(2)、0.3%MgCl_(2)、0.3%CaCl_(2)+0.3%MgCl_(2)水溶液及清水(对照)等4个处理,测定和比较不同发育期果肉可溶性糖含量、钙镁含量、PPP途径呼吸速率及其关键酶活性等的动态变化。结果表明,除0.3%CaCl_(2)+0.3%MgCl_(2)水溶液处理减缓果肉“退糖”现象外,其余处理果肉均出现“退糖”现象。推测0.3%CaCl_(2)+0.3%MgCl_(2)处理通过抑制PPP关键酶活性进而抑制PPP呼吸速率,从而抑制总呼吸速率,减少果肉糖分呼吸损耗。

荔枝和龙眼尺蛾科害虫的研究进展

鳞翅目(Lepidoptera)尺蛾科(Geometridae)成虫多为中型蛾类,其幼虫称为“尺蠖”,是荔枝和龙眼梢期的重点防控对象之一。目前,我国已报道的危害荔枝和龙眼的尺蛾科害虫共有10种,广东省内常见的有8种,分别为:粗胫翠尺蛾Thalassodes immissaria、大造桥虫Ascotis selenaria、大钩翅尺蛾Hyposidra talaca、油桐尺蛾Biston(Buzura)suppressaria、波纹黄尺蛾Perixera illepidaria、樟翠尺蛾Thalassodes quadraria、荔枝青尺蛾Berta chrysolineata hainanensis和间三叶尺蛾Sauris interruptaria。至今,国内外围绕荔枝和龙眼尺蛾科害虫开展的研究报道仅为15篇,其中粗胫翠尺蛾最多(7篇),而为害较普遍的荔枝青尺蛾和间三叶尺蛾尚未见研究报道。本文基于文献检索结果,着重综述了粗胫翠尺蛾、大造桥虫、大钩翅尺蛾、绿额翠尺蛾Pelagodes proquadraria和油桐尺蛾5个尺蛾科优势种的研究现状,并且从农业防治、物理防治、生物防治和化学防治4个方面概述了国内外荔枝和龙眼尺蛾科害虫综合治理技术研究进展。目前,尺蛾科害虫的生物防治技术研究集中于天敌的保护利用、生物源农药和昆虫性信息素的开发与应用。至今,已有粗胫翠尺蛾、大造桥虫、槐尺蛾Chiasmia cinerearia和油桐尺蛾4种尺蛾的性信息素有效组分被成功鉴定。但当前针对尺蛾科害虫仍以化学防治为主,而且我国用于荔枝和龙眼尺蛾科害虫防治的杀虫剂尚无登记,对农技推广人员指导用药提出了巨大挑战。本综述旨在帮助广大科研工作者全面了解此类害虫的研究现状,以期为尺蛾科害虫的深入研究及综合防控新技术的研发提供参考。

低共熔溶剂提取荔枝壳中的原花青素及其抗氧化活性

该研究通过建立低共熔溶剂(DES)最佳提取工艺为荔枝壳原花青素的绿色高效制备提供技术支撑。通过比较了4种低共熔溶剂与70%(V/V)乙醇提取对荔枝壳原花青素提取效率、化学构成及ORAC抗氧化活性的影响,确定氯化胆碱-1,3-丁二醇为最佳提取溶剂。HPLC分析表明4种低共熔溶剂与70%(V/V)乙醇提取的荔枝壳原花青素主要成分均为原花青素A2、芦丁、表儿茶素、原花青素B1及山奈酚-3-O-芸香糖苷。进一步通过单因素试验结合正交优化确定了氯化胆碱-1,3-丁二醇提取最佳工艺条件:料液比1:20(g/mL),溶剂摩尔比1:4,溶剂含水量50%(V/V),提取温度60℃,提取时间90 min,在该条件下提取液中的荔枝壳原花青素含量高达5.07 mg PE/mL,是70%(V/V)乙醇提取的1.4倍,其ORAC值及DPPH和ABTS^(+)自由基的IC_(50)值分别为5496.25μmol TE/mL、27.35μg PE/mL和23.82μg PE/mL,均优于70%(V/V)乙醇提取的原花青素(3370.17μmol TE/mL、36.41μg PE/mL和31.56μg PE/mL)(P<0.05),研究结果表明低共熔溶剂在荔枝壳原花青素提取方面具有显著优势。

GABA处理延缓荔枝果皮褐变及与酚类物质变化的关系

荔枝采后极易发生果皮褐变,为研究外源γ-氨基丁酸(GABA)处理对荔枝果皮褐变及酚类物质变化的影响,采用5 mmol/L的GABA溶液浸泡处理荔枝15 min,于(20±1)℃下贮藏6 d,定期取样进行果皮褐变及酚类物质相关生理指标测定。结果表明:GABA处理可以有效延缓荔枝果皮褐变,5 mmol/L GABA处理的荔枝在20℃下贮藏6 d后褐变指数为2.80,显著低于对照组(3.60),同时好果率达36.67%,失重率仅为3.82%。在贮藏期间,GABA处理显著减少荔枝果皮中丙二醛(MDA)积累,抑制多酚氧化酶(PPO),过氧化物酶(POD)和漆酶(LAC)活力,激活苯丙氨酸解氨酶(PAL),贮藏6 d时GABA处理的荔枝果皮具有较高的总酚(525.93 mg GA/g)、黄酮(14.06 mg rutin/g)和花色苷(0.54∆A/g)物质积累,果皮DPPH自由基清除能力提高。实验结果说明,5 mmol/L GABA处理能抑制酶促褐变的发生,改变酚类物质代谢进程,从而延缓荔枝果皮褐变,改善荔枝采后贮藏品质。

我国荔枝龙眼中农药最大残留限量标准现状分析与建议

为了了解我国荔枝和龙眼中农药最大残留限量(Maximum Residue Limits,MRLs)标准的制定情况,保障我国荔枝龙眼产业的发展,本文以现行《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》(GB 2763-2021)为依据,结合我国农药在荔枝龙眼上的登记情况,分析了我国荔枝龙眼上农药MRLs标准现状,并按农药类别列出了MRLs、每日允许摄入量(Acceptable Daily Intake,ADI)和配套的检测方法标准。统计显示,GB 2763-2021中涉及荔枝龙眼的农药MRLs有133项,涉及农药品种125个,其中推荐有配套的检测方法标准的限量有109项,在我国登记有效的限量有33项。对比GB 2763-2019,新增限量标准53项,增长率达到66.25%。此外,新增了方法标准3个。但是,基于荔枝龙眼的农药监测数据,荔枝龙眼上MRLs以及检测方法标准仍需继续补充,加快荔枝龙眼上的MRLs和检测方法标准的制定。荔枝龙眼上的MRLs和检测方法标准的制定仍需加快。

重组荔枝类甜蛋白的高效表达、纯化及活性鉴定

荔枝类甜蛋白(litchi thaumatin-like protein,LcTLP)是导致部分人群过量食用荔枝引起机体炎症反应的主要原因之一,为深入探究其引起的机体炎症机制,揭示其晶体结构与促炎活性位点等生物学特性,需获得大量高纯度LcTLP。然而现有报道中鲜见大量获取高纯度可溶性LcTLP的提取方法,因此该研究对LcTLP基因进行密码子优化后构建了表达载体pCold-NusA-LcTLP,并成功表达了可溶重组蛋白NusA-LcTLP。通过亲和层析与凝胶过滤层析两步纯化法,最终得到的重组蛋白产量可达36.26 mg/L,纯度达90%以上,表明该纯化方案可高效制得高纯度重组LcTLP。经RAW264.7细胞炎症活性验证,重组LcTLP在1、2μg/mL时刺激细胞NO分泌量分别为12.75、14.68μmol/L,为空白组的2.91、3.36倍,验证了重组LcTLP具有一定的促炎活性。该表达载体与纯化方案高效表达得到了可溶性重组LcTLP,为后续深入研究LcTLP在细胞生命活动中的功能机制奠定了基础。

分子标记在荔枝和龙眼应用中的研究进展

近年来,因分子标记技术具有快速、高效等诸多优点而成为新型遗传学研究的工具,进而成为广大学者研究的热点,在荔枝和龙眼的亲缘关系、DNA遗传图谱构建、真假杂种鉴别、QTL定位等方面得到广泛应用。对近年来分子标记在荔枝和龙眼上的研究进行概述,并对存在问题和应用前景进行讨论,以期为分子标记在荔枝、龙眼相关领域的进一步研究提供理论及实践参考。

超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用法同时测定荔枝中4种细胞分裂素

【目的】应用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪(UPLC-MS/MS),建立一种同时测定荔枝反式玉米素核苷(tZR)、异戊烯基腺嘌呤核苷(IPR)、二氢玉米素(DHZ)、异戊烯基腺嘌呤(IP)4种细胞分裂素含量的方法。【方法】0.25 g荔枝样品用乙腈-水(80∶20,体积比)溶液浸提8 h,经Bond Elut Plexa PCX固相萃取柱纯化,2.5%氨水甲醇洗脱后过0.22μm有机滤膜检测。选取XSelect HSS T3色谱柱,以甲醇和5 mmol·L^(-1)甲酸铵水溶液为流动相进行7 min梯度洗脱,采用电喷雾正离子(ESI+)模式电离,选择反应监测(MRM)模式对细胞分裂素进行定量。【结果】4种细胞分裂素的检出限和定量限分别低于18.12和60.39 pg·g^(-1),在0.05~50 ng·mL^(-1)质量浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数(r2)大于0.999。在高、中、低浓度三种加标水平下,4种细胞分裂素的平均回收率为80.0%~108.2%,标准偏差为0.8%~15.5%。采用建立的方法可以同时检测出荔枝果皮、果肉、种子、幼果、叶片和果柄离区中4种细胞分裂素含量。【结论】该方法简便、快速、灵敏、准确,适用于荔枝不同组织中细胞分裂素含量的测定。

复合植物生长调节剂对荔枝开花及坐果的影响

以妃子笑荔枝品种为试材,采用4个复合植物生长调节剂处理喷施花穗,分别为乙烯利+多效唑(T1)、乙烯利+烯效唑(T2)、乙烯利+多效唑+乙氧氟草醚(T3)、乙烯利+稀效唑+乙氧氟草醚(T4),以清水为对照,比较不同处理对荔枝开花节奏、花量、坐果量以及果实品质的影响。结果表明,4个复合植物生长调节剂处理均可显著降低妃子笑荔枝雄花量,提高雌花率与单穗坐果量,而对果实品质的影响较小,其中T4处理的效果最佳,处理后可显著提早6 d开放雌花,并延长雌花累计开放天数至11 d左右,雄花量约为对照的1/15,雌花率提高至81.76%,单穗坐果量提高至12.00粒,可食率提高3~4个百分点。研究结果可为生产上使用植物生长调节剂促进荔枝提质增产提供依据。

二氧化氯缓释剂对低温贮藏荔枝品质及关键花青素的影响

荔枝采后易由花青素降解、呼吸代谢等导致其品质劣变,而二氧化氯(ClO2)有护色和抑制呼吸的多重作用。为探明ClO2对采后荔枝的综合影响,本研究分别采用0.1 g(T1)、0.4 g(T2)和1.2 g(T3)ClO2缓释剂处理荔枝,以0 g(CK)为对照,通过品质指标、色泽指标、花青素等评价其保鲜效果,并通过相关性分析探讨它们间的联系。结果表明,T1组荔枝贮藏品质最佳。贮藏7 d时,T1组荔枝可溶性固形物、a值分别比同期CK组显著(P<0.05)提高了2.93%和10.13%,而呼吸速率显著(P<0.05)降低了34.54%。与此相反,T3组荔枝第7 d相对电导率达最高值35.84%,a达降到最低值18.38,说明细胞结构破坏、漂白明显,贮藏品质最差。为进一步探明色泽变化与花青素的关系,筛选出荔枝中10种关键花青素,含7种原花青素,它们占总花青素达66.96%。相关性分析表明,在贮藏期内,T1、T2、T3组中色泽a值与矢车菊素半乳糖苷的相关系数分别为0.980、0.548、0.360,与矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的相关系数为0.985、0.488、0.402。T1组维持了最好的色泽,可能与其维持以上2种关键红色花青素较慢分解有关,而T3组加速了花青素的分解。本研究可为提高荔枝采后品质提供参考。

荔枝核总黄酮通过抑制TLR4-TAK1抗大鼠肝纤维化的机制分析

目的探讨荔枝核总黄酮对四氯化碳(CCl 4)诱导的肝纤维化模型的抗肝纤维化作用机制。方法利用40%CCl 4-花生油溶液背部皮下注射构建肝纤维化大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、扶正化瘀组、荔枝核总黄酮低、中、高剂量组,另设空白组。连续灌胃给药8周后,取肝左大叶进行HE染色,观察肝脏组织病理变化;RT-qPCR法检测各组大鼠肝脏ColⅠ、ColⅢ、α-SMA mRNA的表达水平;并通过Western blotting检测大鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)、转化生长因子β激活激酶1(TAK1)、磷酸化转化生长因子β激活激酶1(P-TAK1)、氨基末端蛋白激酶(JNK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(P-JNK)的表达情况。结果肝组织HE染色显示,与肝纤维化模型大鼠比较,荔枝核总黄酮各剂量均能不同程度的改善大鼠肝脏炎症浸润情况。肝纤维化相关因子检测显示,荔枝核总黄酮各剂量肝脏ColⅠ、ColⅢ与α-SMA mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。Western blotting检测结果显示,与模型组比较,荔枝核总黄酮低、中剂量组肝脏TLR4、P-TAK1蛋白表达下降(P<0.05),低剂量组的肝脏P-JNK蛋白也降低(P<0.05)。结论荔枝核总黄酮能减轻CCl 4诱发的大鼠肝纤维化,此作用可能与抑制肝脏TLR4-TAK1通路有关。

荔枝(Litchichinensis Sonn.)花芽分化过程的细胞超微结构观察

应用透射电镜对荔枝茎尖生长锥由营养生长转变为生殖生长过程的细胞超微结构进行观察 ,结果表明 ,荔枝圆锥花序发育前期细胞排列紧密 ,细胞质浓 ,液泡小 ,细胞核大并占据着细胞大部分位置 ;细胞质内有丰富的线粒体和膜状系统 ,整个膜状系统内连细胞核 ,外接胞间连丝 ;细胞内囊泡大量形成、融合与迁移 .这些均显示出细胞内结构物质在此期经历着活跃的周转和合成代谢 ,细胞内部在基因的控制下有序地表达 ,为发育过程质的转变积累足够的信息和物质 .生长锥由尖长变为宽平的花序原基时 ,其组织细胞结构也发生了相应的变化 ,最显著的特征是在此过程中 ,有一些细胞发生了程序性死亡 .正在凋亡的细胞核染色质固缩、趋边、核膜破裂或皱缩、细胞质囊泡化并将降解的物质运到周围细胞 。