人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型的建立及评价

目的建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性。方法将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-229E滴鼻感染的方法建立小鼠模型,以仅进行感染、仅置于寒湿环境、正常饲养的小鼠分别作为对照。评价模型小鼠的中医证候相关外观行为表征,以及肺指数、肺组织中的病毒载量及活病毒存在情况、肺部组织病理学及影像学改变、血清胃肠激素水平、淋巴细胞的百分比和肺组织中的炎性细胞因子水平变化,并使用能够治疗寒湿疫毒袭肺证的复方中药"寒湿疫方",评价该模型在药效评价中的可靠性。结果与正常小鼠相比,模型小鼠表现出与寒湿证以及与病毒性肺炎疾病相一致的外观和行为,包括摄食和饮水量减少、活跃程度下降、便溏、毛发油腻(P<0.05或P<0.01),以及肺部病毒核酸阳性、肺指数增加(P<0.01)、肺及支气管组织病理学评分显著增加(P<0.05或P<0.01)、胃动素水平上升(P<0.01)、胃泌素水平降低(P<0.01)、外周血淋巴细胞百分比降低(P<0.01)、炎性细胞因子水平升高(P<0.01)。给予复方中药后,各指标有不同程度的缓解(P<0.05或P<0.01)。结论本研究建立的hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型与临床疾病表现具有一致性,为治疗该证候肺炎的药物筛选提供了一种潜在的方法。

基于冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证病证结合模型的金柴抗病毒胶囊疗效评价

目的:在人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证病证结合模型上,研究金柴抗病毒胶囊的治疗作用,为评价其防治冠状病毒感染提供试验依据。方法:取Balb/c小鼠48只,按体质量随机分为正常组、病毒感染组、寒湿组、寒湿疫毒袭肺证模型组、金柴抗病毒胶囊高、低剂量组(1.76,0.88 g·kg^-1·d^-1),采用寒湿刺激加人冠状病毒229E感染模拟人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证的病证结合模型,通过观察Balb/c小鼠行为表征、肺指数、病毒载量、肺组织病理改变来评价金柴抗病毒胶囊的治疗作用;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中白细胞介素-6(IL-6),IL-10,肿瘤坏死因子-α(TNF-α),γ干扰素(IFN-γ)含量和血清中胃动素(MTL),胃泌素(GAS)含量,流式细胞术检测外周血中CD4+T细胞,CD8+T细胞,B细胞含量。结果:与寒湿疫毒袭肺证模型组比较,金柴抗病毒胶囊可增加寒湿疫毒袭肺证小鼠的活动度和反应能力,改善小鼠皮毛和大便状态,金柴抗病毒胶囊高、低剂量组可以显著降低肺指数(P<0.01),明显升高CD4+T细胞,CD8+T细胞,B细胞含量(P<0.05,P<0.01);金柴抗病毒胶囊低剂量组显著降低血清中MTL含量,显著降低肺组织中病毒载量和IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量(P<0.01),改善肺组织病理损伤。结论:金柴抗病毒胶囊在人冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺证模型上具有较好的治疗作用,其可以改善寒湿证的行为表征和胃肠道指标水平,同时减低肺指数和肺组织中病毒载量,改善肺组织病理损伤,初步探讨其机制可能与降低炎症因子含量、提升淋巴细胞数量有关。

体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证小鼠病证结合模型的效用特点

目的:研究药物—体外培育牛黄对人冠状病毒肺炎疫毒袭肺证动物模型的药理作用特点。方法:按体质量等级将48只Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白组,人冠状病毒229E感染组,寒湿组,人冠状病毒肺炎疫毒袭肺复合模型组,体外培育牛黄高、低剂量组,每组8只。采用寒湿环境诱导+人冠状病毒229E感染形成复合动物病证结合模型,在感染当天给予体外培育牛黄(0.128,0.064 g·kg^(-1)),灌胃给药,连续3 d,观察小鼠一般状态,小鼠肺指数和肺指数抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肺组织病毒载量;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清胃动素(MTL),胃泌素(GAS)含量,以及小鼠肺组织细胞因子白细胞介素(IL)-10,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α及γ-干扰素(IFN-γ)含量;采用流式细胞术检测小鼠血中CD4^(+)T淋巴细胞,CD8^(+)T淋巴细胞及B淋巴细胞。结果:体外培育牛黄高、低剂量组可明显改善模型小鼠的一般状态,与空白组比较,模型组小鼠肺指数显著升高(P<0.01),小鼠肺组织核酸表达显著升高(P<0.01),小鼠血清中MTL含量显著增高,GAS含量明显降低(P<0.05,P<0.01),肺部组织细胞免疫因子TNF-α,IL-10和IL-6均显著增高(P<0.01),小鼠外周血淋巴细胞CD4^(+)T细胞,CD8^(+)T细胞及B细胞均显著降低(P<0.01);与模型组比较,体外培育牛黄高、低剂量组小鼠肺指数均显著降低(P<0.01),小鼠肺组织核酸表达显著降低(P<0.01),MTL含量显著降低(P<0.01),小鼠肺组织中IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ含量均显著降低(P<0.01),体外培育牛黄高剂量组可显著升高CD4^(+)T细胞(P<0.05),体外培育牛黄可一定程度减轻模型小鼠肺组织炎性渗出,肺间质水肿及瘀血等病理表现。结论:体外培育牛黄对人冠状病毒感染致疫毒袭肺证小鼠复合模型的药理作用有明显的改善效用,可显著改善小鼠行为及排泄物状态、降低模型小鼠肺指数、提高肺指数抑制率、降低小鼠肺组织核酸表达、减轻肺组织病理损伤、调节免疫机能和抑制炎性因子释放等作用环节发挥作用,为临床用药提供依据。

葛根汤颗粒对人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠肺炎模型的治疗作用

目的:研究葛根汤颗粒对人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合肺炎小鼠的治疗作用。方法:BALB/c小鼠分为正常组、感染组、寒湿组、模型组、磷酸氯喹组(0.18 g·kg^(-1))、干扰素α2b(IFN-α2b)组(1.83×10^(6)U·kg^(-1))及葛根汤颗粒高、低剂量组(6.6、3.3 g·kg^(-1)),每组10只,采用寒湿环境加hCoV-229E感染进行造模并给药。观察小鼠一般状态及肺指数,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织病毒载量,用苏木素-伊红(HE)染色法评价肺组织病变,运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清胃肠激素、肺组织炎性因子的水平,利用流式细胞术检测外周血淋巴细胞百分比。结果:葛根汤颗粒能够明显缓解模型小鼠精神萎靡、四肢无力、大便黏腻等状态;葛根汤颗粒高剂量组能够明显降低模型小鼠的肺指数、组织病理学评分、血清胃动素水平(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,葛根汤颗粒高、低剂量组均可明显升高血清胃泌素水平(P<0.05,P<0.01),明显升高外周血CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞百分比(P<0.05,P<0.01),显著降低肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平(P<0.01),并使白细胞介素-6(IL-6)水平呈现降低趋势。结论:葛根汤颗粒能够改善hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠的一般体征,调节胃肠激素水平,降低肺指数和肺组织病理学评分,并可能通过抑制肺组织中炎性细胞因子、恢复外周血淋巴细胞百分比发挥免疫调节作用,从而对模型小鼠起到治疗作用。