基于TLR4/MyD88/AMPK信号通路探索“从风论治”治法治疗糖尿病肾病的作用机制

目的基于TLR4/MyD88/AMPK信号通路探索“从风论治”治法治疗糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的作用机制。方法db/db小鼠分为对照组、糖尿病肾病组、干预组,干预时间为8周。留取血清、尿液,检测24小时尿蛋白定量、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平。留取肾组织,光镜下观察肾组织病理改变,同时采用Western blot法及免疫组织化学法检测肾组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ-辅激活因子1-α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator 1-alpha,PGC-1α)蛋白的相对表达情况。结果干预组24小时尿蛋白在药物干预后明显减少,且干预组与糖尿病肾病组对比差异有统计学意义。Elisa结果显示:干预组与糖尿病肾病组相比,db/db小鼠血清中IL-6水平与TNF-α水平均有降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组肾组织的肾小球结构完整,糖尿病肾病组系膜细胞及系膜基质均增生,间质少量炎细胞浸润,干预组较糖尿病肾病组有减轻。Western blot及免疫组化结果显示:干预组TLR4、MyD88蛋白表达程度明显低于糖尿病肾病组(P<0.01);干预组p-AMPK、PGC-1α蛋白的表达程度显著高于糖尿病肾病组(P<0.01),而干预组AMPK蛋白的表达水平与糖尿病肾病组差异无统计学意义(P>0.05)。结论“从风论治”治法通过TLR4/MyD88/AMPK信号通路能够减轻DKD炎性因子的表达延缓DKD进展。