生长激素基因SNPs与康乐黄鸡产蛋性状的关联分析

为探索生长激素(Growth hormone,GH)基因部分序列单核苷酸多态性(Single nu⁃cleotide polymorphism,SNP)位点与康乐黄鸡母鸡产蛋性状的相关性,寻找地方鸡种产蛋性状选育的分子标记,试验选取294只康乐黄鸡母鸡为研究材料,测量并记录3个产蛋性状指标,包括开产日龄、初产体重和182日龄产蛋数。采用PCR直接测序法筛选GH基因内含子1区域SNPs,利用SAS分析产蛋性状关联的SNPs。结果显示:共发现30个SNP位点,其中共有5个SNP位点与康乐黄鸡母鸡产蛋性状显著关联,其中位于内含子1区域的位点T1270451C与康乐黄鸡母鸡182日龄产蛋数,位点C1271148T与开产日龄、初产体重,位点A1271168G与开产日龄,位点G1271198A与初产体重均显著相关,位于内含子2区域的位点T1270070A与初产体重显著相关。研究表明,GH基因内含子1区域的4个位点T1270451C、C1271148T、A1271168G、G1271198A,内含子2区域T1270070A位点可作为康乐黄鸡产蛋性状选育的候选分子标记。

不同剂量基因重组人生长激素治疗特发性矮小症的临床疗效观察

目的探讨不同剂量基因重组人生长激素(r-hGH)治疗特发性矮小症(ISS)的临床疗效及对患儿糖脂代谢水平等的影响。方法选取2020年1月至2021年6月抚州市第一人民医院收治的72例ISS患儿作为研究对象,根据r-hGH应用剂量的不同分为L组与S组,每组36例。L组给予大剂量r-hGH(每天0.20 IU/kg)治疗,S组给予小剂量r-hGH(每天0.15 IU/kg)治疗。比较两组临床疗效、糖脂代谢情况、甲状腺功能及不良反应发生情况。结果治疗后,两组生长速度快于治疗前,身高高于治疗前,骨龄大于治疗前,且L组生长速度快于S组,身高高于S组,骨龄大于S组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组空腹胰岛素、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)水平均低于治疗前(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义;两组空腹血糖、胰岛素敏感指数及总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与治疗前及组间比较差异无统计学意义。治疗前后,两组促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平组内、组间比较差异无统计学意义。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义。结论大剂量r-hGH治疗ISS临床疗效更佳,且不同剂量r-hGH不会对患儿糖脂代谢水平产生明显影响。

革胡子鲇生长激素基因表达定量PCR分析的引物设计与评估

以革胡子鲇(Clarias gariepinus)为试验对象,对其生长激素(GH)基因进行荧光定量PCR(qPCR)的引物设计与评估。将合成的5对引物通过常规PCR电泳结果选择出符合条件的GHF-GHR引物,并进行qPCR引物的评估。结果显示:扩增GH基因片段的引物GHF-GHR扩增时熔解曲线为单一峰,说明引物具有良好的特异性;通过标准曲线得出GHF-GHR引物的扩增效率为93.3%,标准曲线的R2值为0.982,说明引物的扩增效率良好。上述结果说明GHF-GHR引物能用于待检样本的GH基因表达的qPCR分析。

转“全鱼”生长激素基因鲤鱼及其F_1遗传分析

采用显微注射方法, 研制出转"全鱼"生长激素基因鲤鱼. 比较分析了转基因鲤鱼(P0)获得性状多样性, 筛选获得具有显著快速生长效应的转基因鱼个体; 繁殖力参数比较发现, 快速生长转基因鱼的繁殖能力无实质改变. 对F1转基因鱼转植基因分离和性状分布进行了遗传分析, 结果证实转植基因在2, 3条染色体上整合, 转植基因不同整合位点的生物学效应存在差异, 这为快速生长转基因鱼育种奠定了基础.

基因重组人生长激素+促性腺激素释放激素激动剂治疗大骨龄矮小儿童的临床效果

目的探讨大骨龄矮小儿童采用基因重组人生长激素+促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)联合治疗的临床效果。方法于三明市中西医结合医院2018年6月至2021年6月接诊的大骨龄矮小患儿中选取64例作为研究对象,采取奇偶数法将患儿分为对照组与观察组,每组各32例。对照组采取基因重组人生长激素单独治疗,观察组采取基因重组人生长激素+GnRHa联合治疗,对比两组治疗前、治疗1年后的生长速率(GV)、骨龄(BA)、预测成年身高(PAH)以及BA的身高标准差积分(Ht SDSBA)情况。结果治疗后观察组GV高于对照组,BA低于对照组(P<0.05);治疗后观察组PAH、Ht SDSBA均优于对照组(P<0.05)。结论基因重组人生长激素+GnRHa联合治疗方案更有助于大骨龄矮小儿童的身高改善,值得推广。

“全鱼”转生长激素基因黄颡鱼首建者的建立

黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是一种重要的淡水名优经济鱼类,然而较小的体型和较慢的生长速率极大地降低了它的经济价值.为获得大规格且快速生长的黄颡鱼,开展了转生长激素基因黄颡鱼的研究.运用RT-PCR和RACE-PCR技术,克隆了黄颡鱼生长激素基因的603bp(碱基对)的编码序列和485bp的3′-UTR(非翻译区)序列.通过重叠PCR和限制性内切酶酶切连接,组建了一个长为2105bp的"全鱼"转生长激素基因构件,该构件含1017bp的黄颡鱼β-肌动蛋白近端启动子、603bp的生长激素基因编码序列和485bp的3′-UTR序列.采用显微注射将转生长激素基因构件导入黄颡鱼受精卵,从301尾由注射胚胎发育而来的黄颡鱼中共筛选获得40尾转生长激素基因黄颡鱼首建者.成功地建立了黄颡鱼基因组改造的技术平台,为黄颡鱼的基因工程育种奠定了基础.

快速生长导致转“全鱼”生长激素基因鲤鱼临界游泳速度的降低

进化生物学研究表明,快速生长赋予生物的优势与劣势之间存在权衡.硬骨鱼类的生长率与游泳能力之间也存在这种权衡.本研究提出假说认为,快速生长将导致转基因鱼游泳能力减弱.比较F3代转“全鱼”生长激素基因黄河鲤与其对照鱼的生长和临界游泳速度,表明转基因鱼的平均体重是对照鱼的1.4～1.9倍,平均特定生长率比对照鱼高出6%～10%,而其绝对临界游泳速度和相对临界游泳速度的平均值分别比对照鱼低22%和24%.本研究暗示,具有快速生长效应的转基因黄河鲤表现出低劣的游泳能力,这也证实了生长率和游泳能力之间存在权衡,即同一物种的个体生长率越高,临界游泳速度则越低.

非离子态氨对转“全鱼”生长激素基因鲤鱼的急性毒性和慢性毒性

在自然水体和人工水体中氨氮对鱼类是有毒的.利用静水更新式生物测试研究了非离子态氨对转基因鲤鱼和对照鱼的96h急性毒性实验和21d慢性毒性实验.通过96h非离子态氨急性毒性实验发现,转基因鲤鱼的非离子态氨氮24,48,72和96h半数致死浓度(LC50)(2.64,2.44,2.28和2.16mg/L)分别比对照鲤鱼相应的24,48,72和96h半数致死浓度(LC50)(2.70,2.64,2.52和2.33mg/L)略低,没有显著性差异;但在不同非离子态氨氮(3.86,3.29和2.09mg/L)胁迫下,转基因鲤鱼的半数致死时间(LT50)(1.41,7.91和117.42h)分别显著性短于对照鱼的半数致死时间(2.53,14.06和150.44h).21d非离子态氨慢性毒性实验发现,在不同非离子态氨氮浓度(0.91±0.12,0.48±0.06和0.12±0.01mg/L)胁迫下,转基因鲤鱼的死亡率均显著性高于对照鲤鱼.上述研究表明,转基因鲤鱼对氨氮胁迫的耐受能力比对照鲤鱼差,为客观评价转生长激素基因鲤鱼潜在生态风险,并为今后确定转GH基因鱼集约化养殖的密度和制定养殖水体氨氮安全指标提供了重要的科学参数.

转生长激素基因鲤鱼几项血液指标的检测

以F2代转"全鱼"生长激素基因鲤鱼为材料,对其体重、体长和几项血液指标进行了检测.实验显示:转基因鱼体重和体长均极显著地高于对照鱼(P＜0.01);转基因鱼每毫升血液中淋巴细胞总数为(25.2±6.7)×106个,对照鱼为(18.2±6.6)×106个,两者差异显著(P=0.015);转基因鱼红细胞压积值和白细胞吞噬百分率都高于对照鱼(P＜0.05),但是吞噬指数没有统计学差异;转基因鱼的皮质醇水平为(63.8±16.8)ng/ml,对照鱼为(33.2±9.6)ng/ml,前者明显高于后者(P＜0.01).以上结果表明,转生长激素基因不但加速了鲤鱼的生长,还促进了其血液细胞的增殖和吞噬功能,并直接或间接地引起了血清皮质醇水平的升高.

毛发鼻指(趾)骨综合征合并生长激素缺乏症一例并文献复习

毛发鼻指(趾)骨综合征(TRPS)是一种罕见的常染色体显性遗传病,其临床特征主要为毛发稀疏、梨状鼻、部分指(趾)骨锥形骨骺及短指畸形等。本文报道了1例因矮小、特殊面容于2021-01-07在石河子大学医学院第一附属医院儿科确诊为TRPS合并生长激素缺乏症的患儿,回顾性分析了患儿的临床资料及诊断过程,基因检测显示其TRPS1_ex6 c.2725dupT(p.Cys909Leufs*42)杂合移码突变为新发变异,根据美国医学遗传学与基因组学会(ACMG)指南判读为致病变异,确诊为TRPS合并生长激素缺乏症,并给予重组人生长激素治疗,随访1年2个月发现,重组人生长激素治疗可以改善TRPS合并生长激素缺乏症患儿的身高,且未引起患儿颅内压增高、甲状腺功能减退等不良反应。

生长激素基因多态性与山羊体重性状的关系

以鲁北白山羊、波尔山羊以及波尔山羊与鲁北白山羊的杂交一代、回交一代共计224只山羊为材料,根据山羊生长激素基因5′调控区的序列(GenBank登录号:D00476)设计两对引物,用PCRSSCP法进行多态性分析。多态性片段的纯合基因型经克隆测序,发现共有5处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重、体尺性状进行分析表明:第一对引物扩增片段波尔山羊AA型个体的初生重、周岁重显著高于BB型和AB型(P<0.05);杂交一代中断奶重、周岁重也以AA型偏高,但不同基因型间的差异均不显著(P>0.05);而鲁北白山羊BB基因型的体重相对于另外两种基因型的偏低,且断奶重的差异达到显著水平(P<0.05)。第二对引物扩增片段不同基因型对体重、体尺没有显著影响。由此初步推断生长激素基因可能是影响山羊体重性状的主基因或与主基因相连锁,可以用该位点对山羊体重性状进行标记辅助选择。

生长激素基因(GH2)多态性与猪部分生产性能的关系

采用PCR -RFLP对南昌白猪 (117头 )和大约克夏猪 (36 1头 )的GH 2基因 - 119～ +486bp的片段进行了扩增 ,并用ApaⅠ酶切 ,产生了 2个等位基因A(44 9+10 1+5 5bp)和B(316 +133+10 1+5 5bp)。分析了不同基因型对个体初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄重、校正背膘厚、平均背膘厚、瘦肉率和料重比等生产性能的影响。结果表明 ,在南昌白猪中 ,不同GH 2基因型间在所测的生产性能上差异不显著 (P >0 0 5 ) ;在大约克夏猪中 ,AA型猪的瘦肉率最低、与BB型猪相比 ,差异显著 (P <0 0 5 )。

人生长激素基因在团头鲂和鲤中的整合和表达

采用显微注射方法，将带有小鼠ＭＴ－１基因启动顺序与人生长激素ｈＧＨ基因顺序重组的线状ＤＮＡ片段，注入团头鲂和鲤的受精卵，获得成活的实验鱼。经斑点、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、放射免疫和酶联等方法检测，表明外源基因在受体鱼中得到整合、转录、翻译和表达，并具促生长效应。转基因雌鱼和雄鱼有性繁殖所获得的子鱼带有外源基因，表明外源基因能通过性细胞传递给子代，并仍具促生长效应。

转牛（羊）生长激素基因工程鲤鱼研究

生产出转牛和羊生长激素基因实验鲤鱼一万余尾，筛选出生长速度快，含有外源基因的转基因鲤鱼１４３尾。遗传实验证实外源基因可遗传给后代，经池塘生长实验证明子代仍具有生长速度快的特征，建立了把外源基因直接注入鲤鱼受精卵及确定了外源基因导入鲤鱼受精卵的最佳时期等构建转基因鱼的一整套技术。

鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达

采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ第１个密码子ＴＣＡ．序列分析表明，与Ｋｏｒｅｎ报道的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ相比有两个碱基差异，但推断的氨基酸序列完全一致．将鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ定向克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组鲤鱼ＧＨ基因表达载体ｐＢＶｃＧＨ８．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：经４２℃诱导，ｐＢＶｃＧＨ８在大肠杆菌中可表达一分子量约２２０００的特异蛋白，表达量占细胞总蛋白的２９．２％．该基因重组的鲤鱼ＧＨ添加到饲料中投喂罗非鱼。

人生长激素基因在转基因鲤鱼体内的遗传

通过有性繁殖转移人生长激素基因鲤鱼(P_1),获得了转基因鲤鱼的子一代(F_1)和子二代(F_2);外源基因在转基因P_1与普通鲤鱼杂交产生的F_1代和转基因F_1代自交产生的F_2代鱼中的存在率分别为45.4%和66.7%;外源基因拷贝数在子代个体之间存在很大差异,从每细胞2拷贝到每细胞200拷贝不等;外源基因在转基因鱼子代中仍可表达具有生物功能的产物,人生长激素(hGH),并能促进鱼的生长。

生长激素受体及其基因研究进展

生长激素(growthhormone,GH)参与动物的生长、发育等代谢过程.GH发挥生理作用,首先是与靶细胞膜表面的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)结合,启动细胞内信号传导,促进胰岛素样生长因子(Insulin_like growth factor,IGF_I)的表达,再通过血液循环到达生物体局部组织,促进细胞的代谢过程.GHR是一种特异、高效的膜蛋白.GHR对GH的功能发挥有重要的影响,其在细胞内的表达量对生长激素发挥作用有重要影响,从而影响了生物器官组织的生理功能.就生长激素受体及生长激素受体基因的研究进展进行综述.

转移人生长激素基因和注射人生长激素对促进银鲫生长的研究

本研究将人生长激素基因重组 DNA 导入银鲫受精卵,或用人生长激素对60日龄银鲫连续6周腹腔注射,均观察到了受体鱼的快速生长效应,转移人生长激素基因鱼在60日龄时的平均体重比对照鱼平均体重增加82%,相应体长平均值比对照鱼增加19.7%;在125日龄时,转基因组平均体重比对照组增加17.7%,相应体长平均值比对照增加3.5%。定期注射人生长激素,在6周的注射实验过程中,实验鱼的体重,体长都与对照组相近或略有减小。但是,在水泥池中饲养一个月后,注射10/μg/g 体重的实验组鱼平均体重比相应对照组鱼的平均体重增加32%;相应体长平均值增加11%。

三种鳜鱼(Siniperca)生长激素基因的克隆及序列比较

采用长片段PCR及T-A克隆技术,从基因组DNA成功克隆翘嘴鳜、大眼鳜和斑鳜含完整阅读框的生长激素(GrowthHormone,GH)基因DNA全序列,翘嘴鳜序列全长5548bp,大眼鳜序列全长5483bp,斑鳜序列全长5789bp,提交GenBank数据库后获得注册号分别为EF205280、EF205281、EF441623。三种鳜鱼GH基因均由六个外显子、五个内含子组成;均在第二内含子中相同位置发现"AG"微卫星重复序列;均在第三内含子末端发现一处剪接位点序列的相邻重复。三种GH基因在第一、二、三内含子处存在碱基长度差异。序列间差异主要表现为邻近序列的重复、DNA片段的缺失或插入及单核苷酸多态性(SNP)。翘嘴鳜与大眼鳜GH基因编码氨基酸序列完全相同,两者与斑鳜序列在第150位有一个氨基酸残基差异。采用MEGA软件对三种鳜鱼GH基因DNA序列及编码氨基酸序列分别构建UPGMA系统发育树,结果表明,在系统发育中,斑鳜可能最先从共有祖先物种中分化出来。