基于多指标成分优化天麻产地“发汗”加工工艺

目的利用响应面法优化天麻Gastrodiae Rhizoma产地"发汗"加工工艺。方法以天麻中天麻多糖、天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、B、C、E 7种成分为指标成分,AHP层次分析法确定各指标成分权重,结合单因素实验,采用Box-Behnken设计法对蒸制时间、"发汗"时间和"发汗"次数3个因素进行考察,综合评分作为最终察指标进行天麻"发汗"加工工艺优化研究。结果最佳"发汗"加工工艺为蒸制20 min,60℃烘至麻体发软时,"发汗"9 h,取出摊开晾干麻体表面水分,再次"发汗"9 h,以60℃烘干。结论响应面法优选的天麻"发汗"加工工艺,稳定性好,可操作性强,可为天麻产地"发汗"初加工提供科学依据和技术参考。

利用iTRAQ技术分析续断“发汗”前后三萜皂苷类成分含量变化的机制

为了阐释续断"发汗"加工导致三萜皂苷类成分含量变化的机制,该研究对续断"发汗"加工前后总三萜皂苷以及指标性成分川续断皂苷Ⅵ的含量进行了检测,同时运用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)技术结合LC-MS/MS对续断"发汗"加工前后的差异表达蛋白进行了分析。结果显示,"发汗"加工后,续断总三萜皂苷的含量显著下降,川续断皂苷Ⅵ的含量显著升高;经iTRAQ-LC-MS/MS方法分析得到140个显著差异表达蛋白,"发汗"加工后显著上调蛋白为50个,显著下调蛋白为90个。GO分析发现差异蛋白中存在多种水解酶、氧化还原酶及转移酶,进一步检测2类差异表达的氧化还原酶的活性,结果与iTRAQ-LC-MS/MS分析一致。通过分析差异蛋白中与三萜皂苷生物合成途径相关的酶,发现参与三萜皂苷结构修饰的CYP450及UGT家族各有1个成员在"发汗"加工后表达显著下调,表明"发汗"加工可能通过影响续断三萜皂苷生物合成途径下游修饰酶CYP450及UGT的表达进而导致三萜皂苷类化学成分含量的变化。