基于NFAT5介导的EMT研究益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制

目的探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响以及益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制。方法SD雄性大鼠20只,随机分成生理盐水组和益糖康组,每组10只。生理盐水组给予1 mL/100 g生理盐水灌胃,益糖康组给予2.10 g/100 g益糖康煎剂灌胃,连续5 d,腹主动脉取血,离心分离上清。通过高糖诱导HK-2细胞构建早期糖尿病肾病体外模型,并加入相应的药物进行干预。分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染NC-siRNA(NC-siRNA组)/NFAT5-siRNA(NFAT5-siRNA组)或生理盐水含药血清处理(NS组)/益糖康含药血清处理(YTK组)以及益糖康含药血清处理同时转染GV492-Empty(YTK+GV492-Empty组)/GV492-NFAT5(YTK+GV492-NFAT5组)细胞中NFAT5、E-cadherin以及Vimentin mRNA和蛋白表达水平的改变。再分别采用划痕和Transwell实验检测各组细胞迁移力和侵袭力的改变。结果转染NFAT5-siRNA能够明显抑制NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达;与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.01)均明显减弱。与NS组相比较,YTK组细胞中NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达水平明显降低。转染GV492-NFAT5能够明显促进NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达;与YTK+GV492-Empty组相比较,YTK+GV492-NFAT5组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)均明显增强。结论在高糖环境下,NFAT5会促进人肾小管上皮细胞发生EMT;益糖康能够通过下调NFAT5表达抑制肾小管上皮细胞发生EMT从而改善高血糖对肾脏的早期损伤。

新冠康复1号方治疗小鼠肺纤维化的抗氧化保护机制

目的探讨新冠康复1号方对小鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的干预作用及其作用机制。方法72只SPF级雄性C57BL/6J小鼠,随机分为6组:对照组(Con组)、博来霉素模型组(BLM组)、新冠康复1号方低剂量组(XL组)、新冠康复1号方中剂量组(XM组)、新冠康复1号方高剂量组(XH组)、醋酸泼尼松组(P组),每组12只。采用气管注射5 mg/kg博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化模型。收集各组小鼠血清和肺组织,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学改变;检测活性氧族(reactive oxygen species,ROS),采用试剂盒测定血清氧化应激指标[丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)];用细胞凋亡染色(Tunel染色)观察肺组织细胞凋亡情况,用免疫荧光染色(SP-C染色)染色观察氧化应激对肺泡上皮细胞损伤情况,使用电镜进一步观察小鼠肺泡上皮细胞及线粒体的变化,采用Western blotting检测B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bax基因、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白活性。结果HE染色、Masson染色结果提示BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功,给予新冠康复1号方后肺纤维化表型明显改善;氧化应激结果显示:新冠康复1号方可抑制ROS和MDA生成,增强GSH-Px、SOD的活性;Tunel染色、SP-C染色和电镜学观察显示新冠康复1号方可减轻BLM对小鼠肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)的损伤程度,保护线粒体的结构和功能;Western blotting检测结果显示:新冠康复1号方可下调凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3的表达,上调Bcl-2蛋白表达。结论新冠康复1号方可通过纠正氧化/抗氧化失衡,改善肺泡上皮细胞损伤,保护线粒体结构从而改善肺纤维化,为开发肺纤维化的治疗药物提供一定的理论基础。

心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞焦亡的影响

目的探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞焦亡的调控作用。方法46只SD大鼠,其中随机取6只大鼠为空白组,余40只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心力衰竭模型,模型成功后将32只大鼠随机分为模型组12只、心康冲剂组10只、缬沙坦组10只。缬沙坦组以等效剂量0.03 g/(kg·d)灌胃、心康冲剂组给予0.5 g/(kg·d)等效剂量灌胃。空白组与模型组每日等量生理盐水灌胃,连续4周。实验结束后,心脏超声检测各组大鼠心功能,HE、Masson染色观察心脏组织形态,透射电镜下观察心肌组织超微结构,免疫组化法检测焦亡底物消皮素D-N端片段(GasderminD-N,GSDMD-N)表达,酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素18(Interleukin-18,IL-18)表达,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)通路各mRNA,Western blot法检测NLRP3通路各蛋白表达量。结果与空白组相比,模型组大鼠左室射血分数(Left ventricular ejection fractions,LVEF)、左心室短轴缩短率(Left ventricular fractional shortening,LVFS)均明显降低(P<0.01),染色结果显示心肌细胞死亡增多、纤维化严重,且GSDMD-N焦亡蛋白表达在胞膜和胞浆,透射电镜结果显示模型组中心肌细胞膜有破裂,有孔隙形成,线粒体肿胀严重,血液中炎症因子IL-18、IL-1β明显升高(P<0.01),心肌组织中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)、GSDMD mRNA及GSDMD-N蛋白表达均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,心康冲剂、缬沙坦干预后心肌细胞焦亡减轻,LVEF、LVFS都不同程度地增加(P<0.01);染色及电镜结果显示心肌病理学损伤减轻;炎症因子IL-18、IL-1β及细胞焦亡通路NLRP3、Caspase-1、GSDMD/GSDMD-N的mRNA及蛋白都有所降低(P<0.01)。结论心康冲剂可改善慢性心力衰竭大鼠心功能,抑制NLRP3细胞焦亡通路及下游产物,从而减轻心肌炎症,防止慢性心衰中的心肌细胞死亡过多。

中药复方益糖康增强足细胞自噬改善糖尿病肾脏疾病的机制研究

目的观察中药复方益糖康(YTK)对糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK改善DKD的作用机制。方法96只8周龄健康Wistar大鼠使用随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、YTK高剂量(40 g·kg^(-1))组、YTK中剂量(20 g·kg^(-1))组、YTK低剂量(10 g·kg^(-1))组,西药对照(20 mg·kg^(-1))组(氯沙坦片),使用高脂饲料喂养联合腹腔单次注射链脲佐菌素建立DKD模型,成功建立模型的86只DKD大鼠分别给药干预8周后取材。采用快速血糖仪测定各组大鼠空腹血糖(FPG),手工法测定各组大鼠血清中尿素氮(BUN)、血白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、血尿酸(UA)、血清总蛋白(TP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。苏木精伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态。Western blotting法检测足细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、ATG5、Beclin1)表达。结果与空白对照组相比,模型对照组大鼠肾脏组织可见细胞排列不规则,结构紊乱,炎症细胞聚集;FBG、BUN、TG、CHO、LDL-C、Scr、UA、TP水平均明显升高,ALB、HDL-C水平明显下降(P<0.01),肾组织LC3-Ⅰ、p62、Beclin1蛋白表达增多,LC3-Ⅱ、ATG5蛋白表达减少(P<0.01);与模型对照组相比,YTK各剂量组和西药对照组大鼠肾脏病理损伤明显缓解,炎症浸润明显减轻。FBG、BUN、TG、CHO、LDL-C、Scr、UA、TP水平均明显下降,ALB、HDL-C水平明显升高(P<0.01),肾组织LC3-Ⅰ、p62、Beclin1蛋白表达减少,LC3-Ⅱ、ATG5蛋白表达增多(P<0.01)。结论YTK能够有效改善DKD大鼠肾脏损伤,其可能是通过下调LC3-Ⅰ、p62、Beclin1蛋白表达,增多LC3-Ⅱ、ATG5蛋白表达来调节DKD自噬水平发挥对肾脏的保护作用。

基于lncGAS5/DNMT3A通路探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨心康冲剂调控长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncGAS5)/DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)通路抗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的机制。方法 62只SD大鼠,其中随机取6只大鼠为正常组,余56只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心力衰竭模型,将造模成功的52只大鼠随机分为模型组12只(注射PBS+生理盐水灌胃),GAS5沉默组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+生理盐水灌胃)、阴性对照组(注射AAV NC病毒+生理盐水灌胃)、心康冲剂组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+心康冲剂溶液灌胃)、缬沙坦组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+缬沙坦溶液灌胃)各10只。分组处理后,心脏超声检测各组大鼠心功能;Masson染色观察心脏组织形态;免疫荧光染色检测各组大鼠左心室纤维化蛋白α-SMA表达;酶联免疫吸附法检测大鼠血清Col I表达;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心尖组织lncGAS5、DNMT3A mRNA;Western blot法检测DNMT3A、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、磷酸化蛋白质激酶蛋白B(phosphorylated protein kinase B,AKT)各蛋白表达量。结果 与正常组相比,模型组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fractions, LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening, LVFS)均明显降低(P<0.05);染色结果显示心肌纤维化严重;血液中I型胶原(type I collagen, Col I)明显升高(P<0.05);lncGAS5 mRNA表达降低,DNMT3A mRNA及蛋白表达升高,PTEN蛋白表达降低,AKT蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,GAS5沉默组染色或指标结果进一步降低或升高;与GAS5沉默组相比,染色结果显示心康冲剂、缬沙坦组干预后心肌纤维化减轻,LVEF、LVFS都不同程度地增加(P<0.05);血清中Col I水平降低;lncGAS5mRNA表达升高,DNMT3AmRNA表达降低;DNMT3A、AKT蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。结论 心康冲剂可通过调控lncGAS5/DNMT3A/PTEN/AKT通路及下游纤维化因子,从而改善慢性心力衰竭之心肌纤维化。

基于中性粒细胞胞外诱捕网探讨暖心康改善缺血性心力衰竭小鼠心功能的机制

目的探讨暖心康通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,从而改善缺血性心衰小鼠心室重塑,提高心功能的作用机制。方法将30只成年健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组,模型组与暖心康组结扎冠状动脉左前降支建立缺血性心衰小鼠模型,假手术组仅开胸但不结扎冠状动脉。暖心康组给予暖心康灌胃,假手术组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,持续4周。对每组小鼠行心脏彩超检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS);苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色、天狼星红染色检测心肌结构及纤维化程度,RT-PCR检测各组心肌组织脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide,BNP)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达;免疫组化染色(immunohistochemistry,IHC)观察MPO在心脏中的表达情况,酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠外周血瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated histone 3,CitH3)水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠室壁运动幅度减弱,LVEF、LVFS显著降低(P<0.01),心脏组织炎性细胞浸润增多,心肌细胞肥大、排列紊乱,胶原纤维增多,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平升高(P<0.01),心脏组织中MPO的蛋白表达明显增多,mRNA表达水平显著升高(P<0.001),外周血CitH3含量显著升高(P<0.001);与模型组比较,暖心康组小鼠室壁运动幅度增大,左室射血分数、左室缩短分数升高(P<0.05),心脏组织炎性细胞浸润减少,心肌细胞结构与排列改善,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平降低(P<0.05),MPO的蛋白表达明显减少,mRNA表达水平显著下降(P<0.001),CitH3含量显著减少(P<0.001)。结论暖心康可改善缺血性心衰小鼠心功能,其作用机制可能是通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,进而改善缺血性心衰小鼠心室重塑。

基于网络药理学与分子对接探讨膝痛康治疗骨关节炎的作用机制

目的 利用网络药理学和分子信息对接技术,探讨膝痛康治疗骨关节炎(OA)的主要功能成分及其潜在功能机制,虚拟检测改善OA病变的活性物质。方法 借助TCMSP、Swiss Target Prediction数据库筛选膝痛康的活性成分和靶点。使用Drugbank、GeneCards、OMIM等数据库筛选OA的疾病靶点。利用R4.2.1得到膝痛康治疗OA病变的潜在功能靶点,在Cytoscape 3.9.0中构建中药-活性成分-作用靶点-疾病网络图。通过STRING数据库查找膝痛康治疗OA的间接靶点。借助R4.2.1进行GO分析富集和KEGG通路分析并绘制气泡图谱。利用Autodocktools 1.5.6、SYBYL-X 2.0和MOE 2019.1.2等软件进行分子对接研究。结果 膝痛康治疗OA的潜在功能靶点有150个,主要包括肿瘤通道、脂质和动脉粥样硬化通道等重要信号通路。分子对接结果表明,膝痛康活性成分与OA蛋白受体的结合能较高。结论 膝痛康治疗OA通过多成分、多靶点产生药物效果,为膝痛康治疗OA提供有效理论依据。

中药复方益糖康对db/db小鼠小肠肠道屏障损伤的修复作用及机制探讨

目的观察中药复方益糖康对db/db小鼠小肠炎症的抑制作用及小肠黏膜损伤的修复作用并探讨其作用机制。方法将24只db/db小鼠随机分为模型组(db/db组)、益糖康组(YTK组)以及阳性药(选用利拉鲁肽Liraglutide)对照组(Liraglutide组),另选择8只C57BL/6J小鼠为对照组(Con组)。YTK组小鼠予以益糖康煎剂灌胃30 g·kg^(-1)·d^(-1),Liraglutide组每日腹腔注射利拉鲁肽200μg·kg^(-1)·d^(-1),Con组和db/db组给予等量蒸馏水灌胃,给药时间共计5周。药物处理5周后,对小鼠禁食12 h,取小鼠尾尖血进行血糖检测,之后进行动物取材和组织分离。用ELISA检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达;免疫荧光法检测Occludin、F4/80、CD86、CD206表达;Western blot检测法检测小肠Occludin、ZO-1、TNF-α蛋白表达。结果与Con组相比,db/db组小鼠血糖明显升高(P<0.05),与db/db组相比,Liraglutide组与YTK组血糖明显下降(P<0.05)。与db/db组相比,Liraglutide组与YTK组Occludin和ZO-1表达较明显增强(P<0.05);Western blot结果显示Occludin蛋白表达与免疫荧光趋势一致(P<0.05);与Con组相比,db/db组小鼠血清炎症因子IL-6与IL-1β均明显升高(P<0.05),Liraglutide组与YTK组较db/db组明显下降(P<0.05);与Con组比较,db/db小鼠小肠黏膜及黏膜下层IL-1β、IL-6表达量明显增强(P<0.05),而Liraglutide组与YTK组呈中度表达,较db/db组明显减弱(P<0.05)。western blot结果显示,TNF-α表达与免疫荧光趋势一致;Liraglutide组与YTK组F4/80的表达较db/db组明显减弱(P<0.05);CD86和CD206在Con组小鼠小肠表达较弱;在db/db组表达明显增强(P<0.05),其中CD86表达更为显著,而Liraglutide组与YTK组明显改善(P<0.05)。结论中药复方益糖康可以下调F4/80、CD86和CD206等巨噬细胞相关蛋白的表达,缓解小肠巨噬细胞聚集和活化,下调小肠IL-Iβ、IL-6和TNF-α等炎症因子,上调肠通道蛋白Occludin和ZO-1表达,修复db/db小鼠小肠黏膜损伤。

基于AMPK/mTOR信号通路探讨中药复方益糖康对db/db小鼠血脑屏障通透性及紧密连接蛋白的影响

目的基于AMPK/mTOR信号通路,探讨中药复方益糖康对db/db小鼠血脑屏障通透性的影响及对紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的调控作用。方法24只db/db小鼠随机分为模型组(db/db组)、利拉鲁肽组(LIRA组)以及益糖康组(YTK组),每组8只。另取8只db/m小鼠作为正常对照组(db/m组)。YTK组予以益糖康煎剂30 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,LIRA组每日腹腔注射利拉鲁肽200μg·kg^(-1)·d^(-1),db/m组和db/db组给予等量蒸馏水灌胃。实验期间,对小鼠空腹血糖和体质量进行观察。给药6周后,通过Morris水迷宫任务和旷场实验对小鼠进行行为学检测;随后对小鼠进行处死取材,采用Elisa检测小鼠血脂相关指标,EB法观察小鼠血脑屏障通透性,Western blot法检测小鼠脑组织中AMPK/mTOR信号通路、紧密连接蛋白Occludin、ZO-1蛋白的表达情况。结果与db/m组比较,db/db组空腹血糖、血脂、体质量明显升高(P<0.05),逃避潜伏期和摸索距离显著增加,穿越次数和目标象限活动时间则明显减少,血脑屏障通透性明显增加(P<0.05),脑组织中AMPK、mTOR、Occludin、ZO-1蛋白的表达显著降低(P<0.05);与db/db组比较,YTK组小鼠血糖、血脂、体质量明显升高显著降低(P<0.05),逃避潜伏期和摸索距离显著下降,穿越次数和目标象限活动时间则明显增加,血脑屏障通透性明显降低,脑组织中AMPK、mTOR、Occludin、ZO-1蛋白的表达显著降低显著上调(P<0.05)。结论益糖康可能通过AMPK/mTOR信号通路,改善糖脂代谢情况,同时上调Occludin、ZO-1蛋白表达,从而保护BBB功能完整性,最终改善db/db小鼠认知功能障碍。

基于TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路探讨心衰康胶囊对糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用

目的探究心衰康胶囊是否通过调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化。方法清洁SPF级雄性大鼠32只,随机分为对照组、模型组、心衰康胶囊组(1.0 g·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))。除对照组外,按30 mg/kg体质量腹腔注射浓度为1 mg/mL的链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型大鼠,对照组和模型组均0.9%氯化钠溶液灌胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察糖尿病大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测大鼠TGF-β1、大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平;Western Blot法检测心肌组织中TGF-β1、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌排列紊乱,组织肿胀,有大量炎性细胞浸润,Bcl-2、p-CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.01),TGF-β1、Caspase-3、p-p38 MAPK蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,心衰康胶囊组大鼠心肌纤维排列较整齐,炎性浸润减少,组织间隙无明显水肿,TGF-β1、p-p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05),p-CREB、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论心衰康胶囊可抑制糖尿病大鼠的心肌纤维化以及细胞凋亡,其改善作用可能与调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路有关。

自拟促愈方与康复新液治疗肛肠术后难愈性创面临床疗效及对ECM的影响

目的探究自拟促愈方与康复新液治疗肛肠术后难愈性创面临床疗效及对细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法选取商丘市中医院肛肠科2021年4月—2022年6月收治的90例肛肠术后创面难愈患者,按照随机数字表法分为对照组与治疗组,各45例,对照组采用康复新液治疗,治疗组采用自拟促愈方治疗,比较3个疗程后两组治疗总有效率、创面愈合及住院时间、创面疼痛程度[视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)]ECM含量。结果治疗组总有效率82.22%(37/45),显著高于对照组62.22%(28/45)(P<0.05)。治疗组的创面愈合及住院时间明显短于对照组(P<0.05)。治疗后,两组VAS评分均明显下降(P<0.05),且治疗组VAS评分明显低于对照组(P<0.05),治疗组患者疼痛减轻明显优于对照组;治疗14 d后,两组ECM含量明显增多(P<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05)。结论自拟促愈方较康复新液治疗肛肠术后难愈性创面的临床疗效较好。可明显缓解患者临床病症、减轻患者痛苦。

人参白茅根汤联合康复新液对肛瘘术后切口愈合效果及对血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平的影响

目的探讨人参白茅根汤联合康复新液对肛瘘术后切口愈合的效果及对血清肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平影响。方法选取南充市中心医院收治的肛瘘患者124例,患者均行肛瘘切开挂线术,随机分为对照组(64例,康复新液)和观察组(60例,人参白茅根汤联合康复新液),两组持续治疗10 d,对比两组临床疗效、创面愈合时间和创面面积、临床症状评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平及血清成纤维细胞生长因子-1(fibroblast growth factor-1,FGF-1)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及创面表皮生长因子(wound epidermal growth factor,EGF)浓度水平的改变情况。结果观察组总有效率更高(P<0.05);观察组创面愈合时间和术后7 d和10 d创面面积治疗后较对照组更低(P<0.05),而两组术后2 d的创面面积比较差异无统计学意义(P>0.05);两组临床症状的评分治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05);术后疼痛、创面分泌物的评分以及创缘水肿的评分方面,两组治疗后均下降明显(P<0.05);且观察组的下降程度更为明显(P<0.05);治疗前两组血清内的IL-6、TNF-α和IL-1β浓度水平比较差异无统计学意义(P>0.05);而两组治疗后血清内的IL-6、TNF-α浓度水平下降明显,而血清内的IL-1β浓度水平升高(P<0.05);且观察组下降更为明显(P<0.05);两组治疗前血清内的FGF-1、VEGF和EGF浓度水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组血清FGF-1、VEGF和EGF水平显著升高(P<0.05);且观察组上升更为明显(P<0.05)。结论术后肛瘘病人实施康复新液结合人参白茅根汤治疗具有较好的疗效,可改善血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平。

《康熙字典》文字考释七则

《康熙字典》中的讹误不少。经考释,“■”为“邴”之讹,“■”为“鄮”之讹,“■”为“匀”之讹,“伒”为“仰”之讹,“■”为“斥”之讹,“■”“■”“■”为“厥”之讹,“■”为“橜”之讹,“■”“■”为“噃”之讹,“哝”为“噮”之讹。

中药复方益肾康加减治疗气阴两虚兼血瘀证早期糖尿病肾病疗效观察及对炎症因子影响

目的 观察益肾康治疗早期糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)气阴两虚兼血瘀证患者的临床疗效及对血清炎症因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)的调节作用。方法 选取2019年1月—2021年1月就诊于辽宁中医药大学附属医院内分泌科确诊为气阴两虚兼血瘀证的早期DKD患者96例,采用随机对照研究方法,对照组(n=48)进行西医综合治疗(包括生活方式干预、控制血糖、控制血压、调脂),中药组(n=48)在对照组的基础上,加用益肾康煎剂100 mL,日3次口服;两组患者均持续治疗12周。观察两组患者临床疗效、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、中医证候评分、临床蛋白尿发生率,以及血清炎症因子IL-1β、IL-18的水平。结果 中药组治疗临床总有效率(83.33%)高于对照组(60.47%)(P<0.05);与治疗前相比,两组患者治疗后UACR均有所降低,但中药组差异具有统计学意义(P<0.01),而对照组差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组患者中医证候评分整体均呈下降趋势,且中药组中医证候评分下降更明显(P<0.01);两组患者临床蛋白尿发生率方面比较差异无统计学意义(P>0.05);与治疗前比较,治疗后两组患者血清IL-1β、IL-18水平均有所降低(P<0.01),与对照组相比,中药组患者血清IL-1β、IL-18水平降低更明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 益肾康联合西医综合疗法治疗早期2型糖尿病肾病能提高临床疗效,改善患者中医症状,降低蛋白尿,减轻机体炎症反应,且安全性良好。

益糖康调控2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路实验研究

目的观察益糖康对2型糖尿病大鼠脂肪组织TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨益糖康对2型糖尿病的抗炎作用机制。方法将SPF级SD大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组(不做处理),模型组(蒸馏水,5 mL/kg),益糖康组(益糖康汤剂,5 g/kg)和二甲双胍组(150 mg/kg),每组10只。所有大鼠给药途径均为经口灌胃,每日1次,连续4周。干预4周后,称量各组大鼠的体质量,快速血糖仪测定各组大鼠空腹血糖(FPG),手工法测定各组大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,称量白色脂肪(WAT)和棕色脂肪(BAT)总质量,并计算脂肪指数。酶联免疫吸附法检测肠黏膜组织中脂多糖(LPS)含量,脂肪组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,Western-blot法检测脂肪组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,其余3组大鼠的体质量,FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量,TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著升高(P<0.01);HDL-C、BAT的水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,益糖康组大鼠体质量显著升高(P<0.01),二甲双胍组没有显著差异(P>0.05),益糖康组和二甲双胍组大鼠FPG、TG、TC、LDL-C、WAT、TNF-α含量以及脂肪组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均显著降低(P<0.01),HDL-C、BAT的水平显著升高(P<0.01)。益糖康组大鼠体质量显著高于二甲双胍组(P<0.01)外,其余指标益糖康组和二甲双胍组之间比较均没有显著差异(P>0.05)。结论益糖康可能通过降低肠黏膜中LPS的含量进而抑制脂肪组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的过度活化,发挥抗炎作用,最终实现调控糖脂代谢的作用。

溃结安康汤通过抑制PI3K/Akt信号通路缓解三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎大鼠炎症机制研究

目的 观察溃结安康汤对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)免疫炎性反应的影响,探究其是否参与磷脂酰肌醇3-羟基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase, Akt)信号通路的调控。方法 肠道注射三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS)构建大鼠UC模型,随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶(salicylazosulfapyridine, SASP)组、溃结安康汤组。造模后给药21 d,统计各组大鼠疾病活动指数(disease activity index, DAI)评分,采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测各组大鼠结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量,以及血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的表达水平,HE染色切片观察各组大鼠结肠组织的病理改变,采用蛋白免疫印迹法检测结肠组织中PI3K/Akt通路的相关蛋白表达水平。结果 与模型组相较,溃结安康汤组DAI评分显著降低(P<0.05),结肠HE染色切片中结肠黏膜上皮较为完整,炎症细胞浸润较少。与模型组相比,溃结安康汤干预后降低MPO活性同时减少IL-6、TNF-α的含量(P<0.05)。此外,溃结安康汤组里活化后的PI3K(p-PI3K)及活化后的Akt(p-Akt)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B kinase, NF-κBp65)蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论 溃结安康汤可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,从而改善溃疡性结肠炎大鼠炎症反应发挥保护作用。

枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎临床疗效Meta分析

目的系统评价枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的疗效,为该药临床实践和决策提供循证依据。方法计算机检索知网、万方、CBM、PubMed及Cochrane Library,检索时限均为建库至2021年7月,收集单用或联用枫蓼肠胃康(试验组)对比基础治疗或其他药物(对照组)治疗慢性胃炎的随机对照试验(RCT),提取资料,质量评价采用Cochrane风险偏倚评估工具,采用RevMan5.2软件进行Meta分析。结果共纳入8篇RCT,合计894例患者。Meta分析结果显示,应用枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的试验组总有效率[相对危险度(RR)=1.20,95%置信区间(95%CI)(1.13,1.27)]明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);亚组分析中,应用枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的试验组总有效率[RR=1.23,95%CI(1.15,1.32)]明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);应用枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的试验组腹痛改善[RR=1.14,95%CI(0.92,1.35)]明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);应用枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的试验组胃泌素水平改善[MD=-2.14,95%CI(-2.36,-1.93)]、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平改善[MD=14.20,95%CI(12.46,15.94)]及白介素-12(IL-12)水平改善[MD=9.82,95%CI(8.45,11.19)]明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论枫蓼肠胃康治疗慢性胃炎的临床疗效较好,可改善腹痛症状及胃泌素、TNF-α、IL-12水平。

复方益糖康联合运动训练对糖尿病脑梗死大鼠神经功能修复作用

目的观察复方益糖康联合运动训练对糖尿病脑梗死大鼠神经功能改善,成熟少突胶质细胞标志物(APC)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,探究复方益糖康联合运动训练对糖尿病脑梗死大鼠神经功能修复作用。方法160只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=45)、中药组(n=35)、运动组(n=35)、联合组(n=30)。先后行糖尿病造模、大鼠大脑中动脉永久性闭塞术。中药组、联合组进行中药灌服,每日1次;运动组、联合组进行电动跑台训练,每日1次,每次30 min;假手术组和模型组不予中药、运动训练;上述各组共治疗3周。分别于术后24 h、7 d、21 d进行大鼠神经功能mNSS评分,免疫荧光法检测APC、MBP、Caspase-3的变化,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光双标检测APC/Caspase-3共表达情况。用Western blot检测脑梗死缺血半暗带区脑组织中APC、MBP、Caspase-3蛋白的表达。结果缺血后24 h、7 d、21 d,神经功能行为学评分、TUNEL染色、Caspase-3免疫荧光和蛋白表达:与模型组比较,中药组、运动组、联合组大鼠明显降低(P<0.05),与单一治疗组比较,联合组显著升高(P<0.01)。少突胶质细胞、髓鞘阳性细胞及蛋白表达:与模型组比较,中药组、运动组、联合组大鼠明显升高(P<0.05),与单一治疗组比较,联合组显著升高(P<0.01)。结论益糖康联合运动训练对糖尿病脑梗死大鼠的神经功能修复,上调APC、MBP蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,可能与促进成熟少突胶质细胞增多、髓鞘稳定,抑制成熟少突胶质细胞凋亡有关。

中药复方益肾康调控Klotho/NF-κB信号通路防治糖尿病大鼠肾脏损伤的机制研究

目的基于Klotho/NF-κB信号通路探讨中药复方益肾康保护肾脏的疗效机制。方法采用单次腹腔注射链脲佐菌素(53 mg/kg)构建糖尿病大鼠模型,将雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)、模型组(16只)、厄贝沙坦组(15只)、益肾康组(15只)。干预4周后,收集尿液检测尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)。干预8周后,测量大鼠体质量、血糖,留取尿液、血液及肾脏。全自动特定蛋白分析仪检测UACR、尿液N-乙酰-β-D氨基葡萄糖(NAG)、尿液视黄醇结合蛋白(RBP),ELISA法检测大鼠血清炎症因子IL-1β、IL-18的水平,HE和Masson染色观察肾脏病理改变,Western blot检测肾脏组织Klotho蛋白、NF-κB蛋白的表达,免疫组化(IHC)染色观察肾脏Klotho蛋白的表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠体质量增加减慢(P<0.01),血糖明显升高(P<0.01),UACR、尿NAG、尿RBP明显升高(P<0.01),血清IL-1β、IL-18明显升高(P<0.01);HE染色显示,模型组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞出现肿胀、空泡变性;Masson染色显示模型组大鼠肾小球基底膜增厚,系膜增宽,肾小管间质轻度纤维化;IHC染色显示正常组大鼠Klotho蛋白在肾小管表达明显,模型组大鼠Klotho蛋白表达下降(P<0.01);Western blot检测显示模型组大鼠肾脏组织Klotho蛋白表达明显减少(P<0.01),NF-κB蛋白表达明显增多(P<0.01)。与模型组比较,益肾康可明显升高模型大鼠体质量,降低大鼠血糖、UACR、尿NAG、尿RBP以及血清炎性因子IL-1β、IL-18水平(P<0.01),上调肾脏组织Klotho蛋白表达,下调NF-κB蛋白表达,减轻DM大鼠肾脏损伤。结论中药复方益肾康可减轻糖尿病大鼠肾脏损伤,其机制与上调Klotho蛋白表达,抑制NF-κB信号通路表达有关。

基于肠道产丁酸菌代谢探讨益糖康防治2型糖尿病的作用机制

目的基于肠道产丁酸菌代谢探讨益糖康改善慢性炎症防治2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的作用机制。方法采用高脂饲料喂养结合一次性腹腔注射链脲佐菌素45 mg/kg制备2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的24只SD大鼠随机分为模型组、益糖康组、二甲双胍组,每组8只,另设普通饲料喂养的SD大鼠8只为空白组。益糖康组给予益糖康生药56 g/(kg·d)灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍片150 mg/(kg·d)灌胃,空白组、模型组给予0.1 mL/10 g生理盐水灌胃,各组均每日1次。灌胃4周后,测定大鼠血糖,按照试剂盒测定大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平。GC-MS测定粪便中丁酸含量;16S rRNA测序分析粪便中产丁酸菌丰度变化。结果益糖康能显著降低大鼠血糖(P<0.05)及血清中TNF-α、MCP-1水平(P<0.01),增加粪便中丁酸含量(P<0.01)。研究中厚壁菌门(Firmicutes)与丁酸含量正相关,益糖康组可明显增加厚壁菌门丰度(P<0.05);在属水平上,norank_f_norank_o_Clostridia_UCG-014、Ruminococcus、Prevotella、Colidextribacter、Faecalibacterium、norank_f_Lachnospiraceae与丁酸正相关,益糖康组norank_f_Lachnospiraceae含量显著升高(P<0.05)。结论益糖康能够增加产丁酸菌Firmicutes门及norank_f_Lachnospiraceae菌属丰度,可以显著增加粪便中丁酸含量,缓解T2DM大鼠全身慢性炎症水平,降低血糖,防治2型糖尿病。