白术茯苓等比配伍对脾气虚克罗恩病大鼠肠“神经-免疫”相关递质、Th1/Th2型细胞因子及TLR4/NF-κB的影响

目的考察白术茯苓等比配伍不同剂量组对脾气虚克罗恩病大鼠肠"神经-免疫"相关递质、Th1/Th2型细胞因子及TLR4/NF-κB的影响;初步探讨该方等比配伍治疗脾气虚CD的量效关系。方法采用破气耗气加饥饱失常法结合Morris方法复制脾气虚CD大鼠模型,以白术茯苓汤等比配伍高、中、低剂量灌胃给药,采用免疫组化方法检测VIP、VIPR1、SP与NK-1R;ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10;Realtime PCR法检测TLR4 mRNA和NF-κB p65mRNA。结果①模型组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平明显增高(P﹤0.05);高剂量组可明显降低TNF-α、IL-1β、IL-8水平(P﹤0.05);中剂量组可显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平(P﹤0.05);低剂量组可明显降低TNF-α含量(P﹤0.05)。②模型组IL-4、IL-10水平明显降低(P﹤0.05);高剂量组可明显恢复IL-4水平(P﹤0.05);中剂量组可显著增加IL-4、IL-10含量(P﹤0.05);低剂量组对IL-4、IL-10影响不明显。③模型组VIP、VIPR1、SP与NK-IR明显升高(P﹤0.05);高剂量组可明显降低VIP、VIPR1(P﹤0.05);中剂量组可显著减少VIP、VIPR1、SP与NK-IR(P﹤0.05);低剂量组对VIP、VIPR1、SP与NK-IR影响不明显。④模型组TLR4 mRNA和NF-κB p65mRNA含量明显升高(P﹤0.05);中剂量组可明显降低TLR4 mRNA和NF-κB p65mRNA含量(P﹤0.05);高、低剂量组对TLR4 mRNA和NF-κB p65mRNA影响不显著。结论白术茯苓汤等比配伍中剂量组能显著调节脾气虚克罗恩病大鼠肠"神经-免疫"相关递质、Th1/Th2型细胞因子及TLR4/NF-κB通路,发挥治疗CD的作用。

蒙药黑苏嘎-25促进神经元骨架蛋白表达提高神经递质含量改善阿尔茨海默病小鼠症状

目的探讨蒙药黑苏嘎-25治疗阿尔茨海默(AD)小鼠的效果及机制。方法6月龄快速老化模型SAMP8小鼠分为模型组、[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、[90 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理组、多奈哌齐对照组[0.92 mg/(kg·d)],每组15只,另选择15只6月龄正常衰老SAMR1小鼠作为空白对照组。模型组和空白对照组小鼠常规喂养,生理盐水灌胃,其他给药组按照给药剂量灌胃,所有组灌胃均每天1次,共15 d。给药完成后第1天~第5天,各组取3只小鼠采用Morris水迷宫试验检测各组小鼠逃避潜伏期,穿越平台次数和停留时间。尼氏染色观察尼氏体数量,免疫组织化学染色法检测微管相关蛋白2(MAP-2)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)表达和分布,Western blot法检测MAP-2、NF-L蛋白水平。ELISA检测小鼠脑组织(皮层、海马)中神经递质乙酰胆碱(ACh)、五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)的含量。结果与空白对照组相比,模型组逃避潜伏期延长,穿越平台次数和停留时间减少,尼氏体减少,MAP2和NF-L蛋白表达减少;与模型组比较,黑苏嘎-25给药组逃避潜伏期缩短,穿越平台次数和停留时间增加,尼氏体数量增加,MAP-2和NF-L蛋白表达增加。[360 mg/(kg·d)]黑苏嘎-25处理对上述指标的影响更明显。与空白对照组比较,模型组海马及皮层中ACh、NE、DA及5-HT的含量明显减少,与模型组比较,低剂量组、高剂量组、多奈哌齐对照组ACh、NE、DA及5-HT含量显著增加。结论蒙药黑苏嘎-25治疗可改善AD模型小鼠学习记忆能力,保护小鼠神经功能,可能与促进神经元骨架蛋白表达并提高递质含量有关。

脾虚证与神经-内分泌-免疫调节相关机制研究

神经-内分泌-免疫调节网络通过共有的化学信号分子神经递质、神经肽、激素、细胞因子及这些信号分子的受体在机体调控中发挥着重要的作用。研究资料表明脾虚证神经递质、神经肽、激素、细胞因子的水平如果发生不同程度的改变,则这可能提示与之相关的神经-内分泌-免疫调节也发生了相应不同程度的改变。近年来对神经-内分泌系统和免疫系统之间相互作用、相互依赖的复杂关系的研究已经成为一门独立的边缘学科,即神经免疫调节(neuroim-munoregulation)或神经免疫内分泌学(neuro-immuno-endocrinology)。经过临床实践证明中医药的治疗,可以改善神经-内分泌-免疫调节。

神经纤毛蛋白-1与膜相关转化生长因子-β共表达对调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨神经纤毛蛋白-1（Nrp-1）与膜相关转化生长因子-β（TGF-β）共表达对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）免疫抑制功能的影响。方法体外培养Balb/c小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞，在抗CD3/CD28和脂多糖（LPS）诱导下，给予不同浓度的抗Nrp-1抗体（Ab-Nrp-1）封闭24 h后收集细胞，采用流式细胞分析仪检测细胞表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达。分别将不同浓度Ab-Nrp-1封闭1 h后的Treg与小鼠正常CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养，观察抗CD3/CD28和LPS诱导下12、24和48 h后对CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖能力的影响。结果在抗CD3/CD28和LPS诱导下，Treg表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达率明显增加（均P＜0.05），Treg膜相关TGF-β表达随着Ab-Nrp-1浓度的增加逐渐降低，呈明显的浓度依赖性（P＜0.05）；正常Treg与CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养后，能显著抑制CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖功能（P＜0.05），而不同浓度Ab-Nrp-1处理能逆转抑制作用，其中5μg/ml已达最大效应（P＜0.05），且24 h后作用最强，具有明显的浓度-时间依赖性（P＜0.05）。结论 Treg通过膜相关TGF-β发挥免疫抑制功能，共表达Nrp-1能够明显增强其免疫抑制作用。

高效液相色谱-荧光法测定小鼠脑组织中单胺递质及其相关物质

建立高效液相色谱-荧光分析方法,研究小鼠脑皮层、海马、纹状体、丘脑等不同部位的单胺类神经递质及其相关物质。脑组织样本经高氯酸沉淀蛋白后进行色谱分析,采用LichrospherC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为pH3.06缓冲液(含1mmol/L庚烷磺酸钠;30mmol/L磷酸二氢钠-磷酸溶液)-甲醇(85∶15);流速:1.0mL/min;柱温:35℃。荧光检测:激发波长为280nm,发射波长为315nm。采用建立的方法,鉴别出小鼠脑中存在去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、酪氨酸、色氨酸、3,4-二羟苯乙酸和5-羟吲哚乙酸等物质;对NE、DA和5-HT进行定量研究,确定它们的线性范围分别为2.4～471.0ng/mL(r=0.9996),2.6～519.5ng/mL(r=0.9994),2.4～469.3ng/mL(r=0.9991),日内、日间RSD均小于9.0%,准确度达到限度要求,提取回收率大于90%。本法专属性好,准确度高,可以反映不同鼠脑区域单胺类神经递质及相关物质含量上的差异。

消疲怡神口服液对应激大鼠神经-内分泌-免疫系统的影响

目的：观察消疲怡神口服液对强制冷水游泳大鼠模型血清单胺类递质、肾上腺抗坏血酸和下丘脑垂体单胺类递质含量、脾淋巴细胞增殖能力和ＮＫ 细胞杀伤活性等指标的影响。方法：用高效液相加电化学检测法检测血清及下丘脑学胺类递质；用２，４－二硝基苯肼比色法测定肾上脉抗坏血酸含量，用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定淋巴细胞增殖和ＮＫ 细胞杀伤活性。结果：消疲怡神口服液可以拮抗应激所致血清多巴胺、５－羟色胺含量升高和肾上腺抗坏血酸含量降低，使降低的下丘脑垂体去甲肾上腺素、５－羟色胺含量回升，同时还可纠正应激所致的免疫功能抑制。结论：消疲怡神口服液的作用机制与调节机体神经－内分泌－免疫网络系统的平衡，减轻应激的不良影响有关。

睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2及神经丝蛋白的表达变化

目的探讨睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2(MAP-2)及神经丝蛋白(NF-200)表达的变化。方法采用改良小平台水环境法制作大鼠睡眠剥夺模型,大鼠随机分为睡眠剥夺组(SD组)、环境对照组(TC组)和空白对照组(CC组)。SD组包括睡眠剥夺6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d共7个时点,每个时间点5只大鼠,CC组5只。免疫组织化学法观察MAP-2和NF-200阳性表达。结果睡眠剥夺5d和7d时,皮质、CA1、CA2、CA3、齿状回和杏仁核MAP-2和NF-200阳性表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论睡眠剥夺可导致脑组织MAP-2和NF-200表达减少。

阻断交感神经对小鼠小肠黏膜免疫相关细胞的影响

目的研究交感神经对肠道黏膜屏障的调节作用。方法采用常规组织学和免疫组织化学技术,观察经腹腔注射交感神经损毁剂6-羟多巴胺后小鼠小肠上皮内淋巴细胞、杯状细胞、IgA+浆细胞、肥大细胞的数量分布变化。结果注射6-羟多巴胺组小鼠与对照组小鼠相比,小肠各肠段的上皮内淋巴细胞减少了5.6%～33.8%,杯状细胞减少了10.6%～18.5%,两组指标在十二指肠之间和回肠之间差异极显著(P<0.01);肥大细胞增加了15.0%～57.1%,在空肠之间差异极显著(P<0.01);IgA+浆细胞增加了13.9%～61.4%,在十二指肠之间差异显著(P<0.05)。结论交感神经对调节小鼠肠道的免疫学屏障有着重要作用。

中药对运动性失眠单胺类神经递质和免疫功能的影响

对 30例大强度运动伴运动性失眠的优秀运动员经中医辨证后服用中药治疗 ,观察治疗前后神经递质 (NE、 5 -HT)、免疫参数 (NK、IL - 2 )

功能性消化不良脑-肠轴神经递质与临床症状关联研究

目的探讨功能性消化不良(FD)脑-肠轴神经递质与临床症状的关联。方法将我院消化内科接收的FD患者68例作为FD组;同期选择30例健康人群行对照研究。两组人群均采集空腹静脉血检测脑-肠轴神经递质胃动素(MTL)、5-羟色胺(5-HT)及血管活性肠肽(VIP)水平,比较两组人群5-HT、VIP及MTL水平差异;比较FD患者不同临床症状下脑-肠轴神经递质水平差异;Spearman相关性分析FD患者临床症状评分与脑-肠轴神经递质水平相关系数。结果FD患者的5-HT、VIP及MTL水平显著高于对照组(P<0.01)。有早饱感的FD患者5-HT、MTL水平显著高于无早饱感;有上腹痛感的FD患者5-HT、MTL水平显著高于无上腹痛感的FD患者(P<0.05)。5-HT与早饱感评分、上腹痛感评分有弱相关性;MTL与上腹痛感评分有弱相关性(P<0.05)。结论FD患者脑-肠轴神经递质5-HT、VIP及MTL水平显著高于健康人群;FD患者5-HT水平与早饱感评分、上腹痛感评分弱相关;MTL水平与上腹痛感评分弱相关。

大鼠肺内降钙素基因相关肽和5-羟色胺免疫反应细胞的加龄变化

目的 :探讨大鼠肺内降钙素基因相关肽 (calcitoningene relatedpeptiole ,CGRP)和 5 羟色胺 (5 hydroxytryptamine ,5 HT)免疫反应细胞的个体发生及分布 ,揭示肺神经内分泌细胞的功能及其内分泌机制的形态学基础 .方法 :应用免疫组织化学方法、激光扫描共聚焦技术及计算机图像分析 .结果 :CGRP和 5 HT阳性细胞最早见于胚 16d肺组织中 ,随胎龄增大其数量增多且分布广泛 ,胚 2 0d达高峰 ,生后阳性细胞数量减少 [神经内分泌 (NE) / 1× 10 3上皮细胞 (BE) :3 82± 13vs 94± 17;3 87± 4 7vs88± 18;P <0 .0 1,以出生后 1mo为例 ].共聚焦显微镜结果也证实随胎龄增加 ,CGRP和 5 HT阳性细胞数量增加且细胞荧光强度增强 ,而生后强度减弱 (P <0 .0 1) .相邻切片法观察可见多数表达CGRP的阳性细胞也含有 5 HT免疫反应物 .结论 :肺内CGRP和 5 HT阳性细胞的随龄变化显示其在肺的发育、分化、成熟的变化过程中具有重要作用 ,出生前后其数量变化明显的现象 ,可能与此阶段肺功能的急剧改变有关 .CGRP和 5 HT的共存表明两者在功能上具有相关性 .

神经生长相关蛋白-43在耐药性颞叶癫痫患者脑组织中的表达及其意义

目的研究神经生长相关蛋白-43(growth-associated protein-43,GAP-43)在耐药性颞叶癫痫患者脑组织中的表达,探索其在耐药性癫痫中的作用。方法按随机化原则从我科建立的耐药性癫痫患者术后脑组织库中随机抽取42例耐药性颞叶癫痫患者术后脑组织标本,用免疫组化法检测生长相关蛋白-43在耐药性颞叶癫痫患者脑组织中的表达,并与对照组进行比较。结果发现GAP-43在耐药性颞叶癫痫患者脑组织中的表达比对照组明显增加(P<0.05),这种蛋白表达产物主要分布在神经元的胞体和轴突。结论GAP-43在耐药性颞叶癫痫患者脑组织表达增强,提示它们可能参与了耐药性癫痫的形成。

子宫内膜异位症与神经、内分泌、免疫的相关性(综述)

子宫内膜异位症(endometriosisEMT)是Rokitansky在1860年进行了首次报道;直到1925年Sampson首次发表了关于起源于EMT病灶的癌肿系列报道后,才引起众多学者的关注.有关EMT的发病机制有许多学说:其中以Sampson的"经血逆流内膜种植"学说最受支持,但己知50%～90%妇女在月经来潮时均有经血经输卵管逆流至腹腔,却只有少数发生盆腔EMT.于是有学者推测:机体神经-内分泌-免疫网络的功能失衡,可能是EMT发生发展的根本原因.现就异位内膜的存活、粘附、生长增殖与其机体神经、内分泌、免疫的关系作综述性探讨.

γ-氨基丁酸对肥育猪免疫机能的影响及其作用机理

γ-氨基丁酸（Gamma-aminobutyric acid,GABA）在医药与食品工业中已有广泛应用．是一种分布于哺乳动物神经中枢重要的抑制性神经递质。具有镇静、降血压和抗惊厥等生理作用．运用于肥育猪日粮上．在促进采食、改善胴体品质、提高饲料效率等方面也有良好的效果并受到人们的关注．但目前尚未见到关于GABA改善肥育猪免疫机能的报道。本文简述了GABA对肥育猪免疫机能的影响，分析了其作用机理及其在肥育猪日粮中应用的可行性。

亨廷顿蛋白相关蛋白-1在成年大鼠脑内的定位

目的:探讨亨廷顿蛋白相关蛋白1(HAP1)在成年大鼠脑内的分布。方法:健康成年大鼠取脑做连续冠状切片,免疫组织化学方法观察HAP1在脑内的表达。结果:大量的HAP-1表达出现在海马、齿状回、隔核、黑质、红核、连合下核、连合下器、脊髓前庭核、臂旁核、大脑脚基底部、束间核、后屈束、穹窿、被盖腹侧区、嘴侧线形中缝核以及丘脑、下丘脑各区;蜗背侧核、背侧纵束、前庭内侧核、中缝背核背侧部、中缝背核腹侧部、中缝背核腹外侧部、中央灰质等处的表达稍弱;其余像嗅球、大脑皮层各区、小脑皮层等处均有表达但强度极低,Stigmoid小体数目的变化趋势与HAP1基本一致。结论:HAP1广泛分布于脑的各部,推测HAP1可能参与了脑的多种生理功能。

氧化损伤在HIV相关神经认知损害中的作用

目的研究由活性氧诱导的DNA氧化损伤在感染了艾滋病毒的患者中枢神经系统组织中的积累。方法利用感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV-1)的患者的尸检脑组织的额叶皮质来分析HIV-1亚型,采用免疫荧光染色、定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和PCR克隆测序分析脑细胞中核和线粒体DNA损伤。结果中枢神经系统感染HIV会导致大脑细胞中核和线粒体DNA基因组的损伤。对HIV相关的神经认知功能障碍患者的尸检皮质组织进行检测可以发现有高水平的核和线粒体DNA 8-氧鸟嘌呤(8-hydroxyguanine,8-oxoG)损伤。在HIV相关的神经认知障碍的一个亚型脑组织中有逐渐增加的线粒体DNA突变和缺失,这与病情已经得到控制的情况大为不同。结论在HIV相关的神经认知障碍患者的中枢神经系统中高水平的氧化损伤对HIV引发神经细胞和胶质细胞的神经免疫和凋亡发挥了重要作用。

弓形虫淋巴结炎神经内分泌免疫网络的初步研究

目的通过检测降钙素基因相关肽(CGRP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和5-羟色胺(5-HT),探讨弓形虫对神经内分泌免疫网络的影响及其意义。方法应用免疫组化PicTureTM二步法检测淋巴结炎组织中的弓形虫与CGRP、ACTH、5-HT,将弓形虫检测结果分为阳性及阴性组,两组的CGRP、ACTH、5-HT的检测结果用统计学方法进行对照分析。结果50例淋巴结炎组织中16例弓形虫阳性.CGRP阳性标志物在两组中的表达强度大致相似,两者无显著性差异(P>0.05).ACTH与5-HT在弓形虫阳性组中表达强度增强,与弓形虫阴性组中表达强度差异显著(P<0.005)。三种阳性标志物在两组淋巴结炎中的分布大致相似,主要分布在副皮质区的T淋巴细胞、淋巴滤泡生发中心细胞及巨噬细胞等部位。结论弓形虫淋巴结炎CGRP、ACTH与5-HT的变化是弓形虫感染的结果,还是由于先有免疫抑制,后有弓形虫感染尚难定论,但提示弓形虫可能影响神经-内分泌-免疫,两者可互为因果,对弓形虫病的病程演变有一定影响。

GAP-43在新生大鼠视网膜及其诱导的骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞分化过程中的表达

目的探讨生长相关蛋白-43(growth associated protein,GAP-43)在新生大鼠视网膜发育过程中及在以新生大鼠视网膜细胞诱导体外培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向视网膜神经节样细胞定向分化中的作用。方法体外培养新生3d大乳鼠视网膜细胞,应用免疫细胞化学方法检测GAP-43的表达;提取新生大鼠视网膜细胞总RNA,应用RT-PCR方法检测GAP-43 mRNA的表达。体外培养大鼠BMSC至第3代,经流式细胞仪检测干细胞表面标志物进行鉴定,应用乳鼠视网膜细胞诱导BMSC分化,观察诱导后细胞的形态学变化,并应用免疫细胞化学方法对诱导后第5天的细胞进行神经元及视网膜神经节细胞标志物NSE、nestin、GAP-43、thy1.1鉴定,并应用RT-PCR的方法检测、分析GAP-43 mRNA的表达情况。结果体外培养的新生大乳鼠视网膜细胞应用免疫细胞化学方法可检测到GAP-43阳性表达;RT-PCR方法检测到新生大鼠的GAP-43 mRNA的表达;第3代BMSC经流式细胞仪检测CD71(+)、CD29(+)、CD34(-)、CD45(-),经与大乳鼠视网膜细胞共培养的方法可诱导BMSC分化为视网膜神经节样细胞,免疫细胞化学染色表明其表达特异性标志物NSE、nestin、GAP-43、thy1.1,分化后的神经节样细胞内可检测到GAP-43 mRNA阳性表达。结论本研究结果显示GAP-43不仅参与了大鼠视网膜发育过程,且GAP-43在以乳鼠视网膜细胞诱导BMSC定向分化为视网膜神经节样细胞这一过程中具有重要意义。