囊性纤维化转运调节因子氯离子通道功能障碍影响小鼠睾丸支持细胞细胞骨架

目的:探究囊性纤维化转运调节因子(CFTR)氯离子通道功能障碍是否影响小鼠睾丸支持细胞骨架。方法:培养TM4小鼠睾丸支持细胞系,用1、5、10、20μmol/L的CFTR氯离子通道特异阻断剂CFTRinh-172分别干预细胞48 h。CCK-8试剂盒检测细胞毒性,细胞免疫荧光法检测TM4细胞骨架蛋白F-actin和Ac-tub的表达。实时荧光定量PCR(q PCR)检测细胞间连接相关蛋白N-钙粘蛋白、波形蛋白、粘着斑蛋白的表达。结果:20μmol/L浓度的CFTRinh-172对支持细胞有毒性。用不同浓度的CFTRinh-172处理TM4细胞48、72 h时,与细胞骨架密切相关的F-actin和Ac-tub的表达随着CFTRinh-172浓度增加而减少(P<0.05)。q PCR实验结果显示不同浓度CFTRinh-172对支持细胞N-钙粘蛋白、波形蛋白和粘着斑蛋白mRNA表达没有显著影响。结论:CFTR氯离子通道对维持正常睾丸支持细胞骨架有着重要作用。CFTR氯离子通道功能的下降以及细胞骨架蛋白表达下调有可能影响睾丸支持细胞的功能,进而影响睾丸的生精功能。

神经调节蛋白1/转化生长因子β1对血管平滑肌细胞骨架的作用

目的探讨神经调节蛋白1/转化生长因子β1(NRG-1/TGF-β1)对血管平滑肌细胞骨架的作用。方法取小鼠血管组织,采用免疫荧光法对NRG-1干预后细胞收缩功能变化进行分析,采用鬼笔环肽、免疫荧光共定位分析NRG-1/TGF-β1表达,采用GST融合蛋白沉降技术检测分析NRG-1-ICD与α-肌动蛋白(α-SMA)的共位性。结果 TGF-β1在人主动脉血管平滑肌细胞中可上调NRG-1表达,经免疫荧光染色可发现平滑肌细胞标志蛋白α-SMA与NRG-1存在共位性;经RT-PCR及Western blot检测分析发现,在大鼠平滑肌细胞、人平滑肌细胞以及人内皮细胞中均存在NRG-1的mRNA表达。结论在转录和翻译水平上TGF-β1可上调NRG-1的表达;在细胞收缩中,TGF-β1对于α-SMA与NRG-1-ICD之间的表达可以起到促进作用。

沉默信息调节因子1、信号转导与转录激活因子3在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)和信号转导与转录激活因子3(STAT3)在眼睑基底细胞癌组织中的表达情况及其与临床病理分类的关系。方法选取二四二医院2014年2月至2017年8月经病理证实为眼睑基底细胞癌且经手术切除保留的癌组织蜡块93例作为观察组,皮肤基底细胞乳头状瘤组织60例作为对照组。采用免疫组化法检测各组织中SIRT1、STAT3蛋白阳性表达率;Spearman法分析SIRT1和STAT3蛋白表达相关性;χ^(2)检验分析SIRT1和STAT3蛋白表达与眼睑基底细胞癌临床病理指标的联系。结果眼睑基底细胞癌组织中SIRT1和STAT3阳性表达率分别为79.57%(74/93)和76.34%(71/93),均显著高于皮肤基底细胞乳头状瘤组织(P<0.05);Spearman法分析眼睑基底细胞癌组织中SIRT1和STAT3蛋白表达具有正相关性(r=0.72,P<0.05);SIRT1、STAT3蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达与病人年龄、增殖细胞核抗原(PCNA)增殖指数、肿瘤长径和肿瘤病理分型有关(P<0.05)。结论SIRT1和STAT3在眼睑基底细胞癌病人癌组织中均高表达,且呈正相关,与病人年龄、PCNA增殖指数、肿瘤长径和病理分型分类有关,可能是鉴别眼睑基底细胞癌恶性程度的潜在生物标志物。

血小板源生长因子对瘢痕成纤维细胞胞外信号调节激酶的影响

目的:分析血小板源生长刺激因子(PDGF)刺激后各种成纤维细胞中胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化情况,研究瘢痕特别是瘢痕疙瘩发病过程中ERK的作用。方法:应用免疫印迹(IB)方法检测5例瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)、瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞(rNHDF)及正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的ERK表达及其蛋白磷酸化。结果:①无刺激条件下,ERK在KFB,rNHDF及NHDF中的表达及磷酸化无差异。②PDGF-BB刺激后,3组成纤维细胞ERK磷酸化增强,非磷酸化含量无明显改变。③DGF-BB刺激后,KFB中ERK蛋白磷酸化明显高于其他两组成纤维细胞。结论:瘢痕疙瘩细胞外基质的过度沉积可能与KFB内PDGF结合位点自身磷酸化和ERK的磷酸化增强有关。

胞外信号调节激酶与血管内皮生长因子在非小细胞肺癌组织中表达的相关性研究

目的探讨胞外信号调节激酶(ERK5)以及血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及2者之间的相关性。方法应用免疫组织化学SABC法检测88例NSCLC组织及16例良性肺疾病组织中ERK5和VEGF的表达情况,并与临床病理特征进行统计学分析。结果 ERK5及VEGF在NSCLC中的表达均高于良性肺疾病,与患者的年龄、性别和组织类型均没有相关性,而与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移密切相关。ERK5与VEGF两者之间表达呈正相关。结论 ERK5和VEGF可能协同参与NSCLC的发生、发展。

靶向性抗肿瘤融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶磷酸化的影响

目的探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白(EGF-E4orf4)在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。方法采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-MB-231和BGC823细胞中的转运和代谢特点,Western blot检测融合蛋白引起的细胞内ERK磷酸化水平的改变。结果融合蛋白可在细胞内累积,向细胞核周围聚集,并与细胞早期内体和晚期溶酶体共定位;融合蛋白能快速触发细胞内ERK发生磷酸化,磷酸化水平在10 min时最强,之后逐渐回落至刺激前水平,活化ERK的能力较表皮生长因子弱。结论融合蛋白EGF-E4orf4在细胞内经内体-溶酶体途径发生缓慢降解;在MDA-MB-231和BGC823细胞中,融合蛋白的作用特点存在明显差异,可能是导致融合蛋白对二者抑瘤率不同的原因之一。

短小芽孢杆菌过渡态调节因子AbrB的功能特征

【目的】AbrB是枯草芽孢杆菌中重要的过渡态调节因子,在细菌从对数生长期到稳定期的转换阶段发挥作用,但其功能在短小芽孢杆菌中知之甚少,故进一步探究其调控作用。【方法】为了解AbrB在短小芽孢杆菌中所参与的生物学功能,利用具有反向选择标记的温度敏感型质粒载体在短小芽孢杆菌SCU12中对abrB基因进行无痕敲除,获得菌株SCU12(ΔabrB)。为研究敲除菌表型变化,对细菌生长曲线和胞外蛋白酶活性进行测量,观察菌落形态和生物膜形成并利用swarming平板检测其运动性。【结果】获得一株abrB敲除菌株SCU12(ΔabrB)。生长曲线结果显示,与亲本菌株相比,abrB敲除菌株的最高OD_(600 nm)值降低24%,生长受到抑制;肉眼观察菌落形态发现菌落颜色和形态发生改变;运动性实验表明敲除菌株运动性降低;18 h以内敲除菌株生物膜形成时间提前;胞外蛋白酶活性显著增加,是亲本菌株的1.59倍。【结论】abrB基因在短小芽孢杆菌中具有广泛的调节作用。

CD36和胞外信号调节激酶通路在脂多糖诱导炎症因子中的作用研究

本研究以鼠源巨噬细胞RAW264.7为模型,研究CD36和胞外信号调节激酶(ERK)通路对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞分泌炎症因子的影响。首先用100ng/ml LPS刺激正常及小干扰RNA(siRNA)技术沉默CD36表达的巨噬细胞16h,检测巨噬细胞的ERK活性及分泌炎症因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10的水平;继而以20nmol/L ERK抑制剂处理细胞,再用LPS刺激,检测以上各项指标的变化,进一步明确ERK通路与LPS诱导巨噬细胞分泌炎症因子的相关性。结果显示,经LPS刺激,巨噬细胞的ERK活性显著增强,分泌的促炎因子TNF-α和IL-6显著增高,抑炎因子IL-10水平无明显变化;与CD36正常表达的巨噬细胞相比,CD36表达下降的巨噬细胞ERK活性及促炎因子TNF-α、IL-6水平显著下降,抑炎因子IL-10显著增多。与未处理组相比,ERK抑制剂预处理的巨噬细胞中LPS诱导的ERK活性显著降低,促炎因子TNF-α和IL-6水平降低,抑炎因子IL-10水平升高。结果提示,LPS能通过其受体——CD36,激活巨噬细胞内ERK活性,进而促进巨噬细胞促炎因子的分泌。

活血通络汤对抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎患者内皮祖细胞功能及血管内皮损伤因子的影响

目的 观察活血通络汤对抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎(AAV)患者外周血内皮祖细胞(EPCs)功能及血管内皮损伤因子的影响,探讨其作用机制。方法 采用密度梯度离心法分离AAV患者外周血EPCs进行培养,将EPCs分为正常组、模型组、空白血清组(10%空白血清)和活血通络汤低(5%含药血清)、中(10%含药血清)、高(20%含药血清)剂量组,干预48 h,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞迁移能力,检测细胞黏附能力,Western blot检测EPCs血管性假性血友病因子(vWF)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)表达。结果 与正常组比较,模型组EPCs增殖、迁移、黏附能力显著降低(P<0.01),vWF、sTM蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组及空白血清组比较,活血通络汤各剂量组EPCs增殖、迁移及黏附能力显著升高(P<0.05,P<0.01),vWF、sTM蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),以活血通络汤高剂量组作用最显著(P<0.01)。结论 活血通络汤可能通过提高EPCs增殖、迁移及黏附能力,降低血管内皮损伤因子vWF、sTM蛋白表达,从而治疗AAV。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。

Tmem16a、E-cadherin、SIRT1在眼睑基底细胞癌中的表达及其临床意义

目的分析跨膜蛋白16a(Tmem16a)、钙黏蛋白E(E-cadherin)、沉默信息调节因子1(SIRT1)在眼睑基底细胞癌中表达水平及其临床意义。方法将70例经病理检查证实为眼睑基底细胞癌患者手术切除的癌组织纳入研究组,其癌周正常组织纳入对照组。术后随访36个月观察复发情况。比较癌组织及癌周正常组织中Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平,不同性别、年龄、不同病理特征患者癌组织中Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平,癌组织中Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平与复发的关系。结果癌组织中Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平高于癌周正常组织(P<0.05)。相比年龄≤60岁的眼睑基底细胞癌患者,年龄≥60岁的患者癌组织中Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平更高(P<0.05)。肿瘤体积≥3 cm^(3)、脉管侵犯、分化的眼睑基底细胞癌患者癌组织Tmem16a、E-cadherin、SIRT1表达水平更高(P<0.05)。癌组织中Tmem16a阳性表达眼睑基底细胞癌患者复发率为44.44%(16/36),高于阴性表达患者[20.59%(7/34)],P<0.05;癌组织中E-cadherin阳性表达眼睑基底细胞癌患者复发率为56.67%(17/30),高于阴性表达患者[15.00%(6/40)],P<0.05;癌组织中SIRT1阳性表达眼睑基底细胞癌患者复发率为40.00%(22/55),高于阴性表达患者[6.67%(1/15)],P<0.05。结论眼睑基底细胞癌患者癌组织Tmem16a、E-cadherin、SIRT1阳性表达水平更高,其表达与其病理特征、年龄、复发情况密切相关,可为评估病情进展和预后提供参考。

细胞外调节因子对眼内新生血管形成的控制

新生血管形成对某些眼病的发病机理具有重要作用。临床研究表明,视网膜外层和脉络膜的破坏,以及随之而来的修复,可在许多病例中改变其视网膜前及视网膜下血管新生的病程。传统的观点认为,这是由缺血的视网膜被“阻塞”或视网膜下血管被“凝结”等物理机制造成的。新近的研究则认为,新生血管形成与一组“细胞外调节因子”有关。本文对这种“细胞外调节因子”进行了论述,并说明了它与眼内新生血管形成的关系。

肿瘤坏死因子α通过激活NF-κB信号通路加快肝细胞周期进程

在慢性炎症部位有易发肿瘤的倾向,大约有20%的恶性肿瘤发生与慢性炎症相关,肝细胞癌是世界第三大癌症死亡病因,其患者多数有慢性炎症病史,当炎症慢性迁延,肝细胞癌发生率明显增加.但慢性炎症与肿瘤发生与发展的细胞和分子机制仍然不清楚.利用人肝细胞株L-02细胞,研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对细胞周期的影响及其机制,并探讨核因子κB(NF-κB)和ERK1/2活化对细胞周期的影响,以期能更确切地阐明炎症介质TNF-α在肝细胞癌发生发展中的作用.发现TNF-α能促进肝细胞从G0/G1期向S期转换.蛋白质印迹检测表明,TNF-α能以剂量依赖方式诱导cyclinD1表达,而对cyclinE的表达无明显影响.同时TNF-α能激活NF-κB,ERK1/2,抑制NF-κB活化降低了TNF-α诱导的cyclinD1表达,导致细胞周期阻滞于G0/G1期.抑制ERK1/2活化则对细胞周期和cyclinD1表达无显著影响.结果提示,TNF-α通过活化NF-κB信号通路,诱导cyclinD1表达,加快细胞周期进程,这可能是促进肿瘤的发生发展重要机制.针对TNF-α和NF-κB的治疗可能延长慢性炎症相关性肿瘤的潜伏期和抑制肿瘤的发展.

铜绿假单胞菌铁与群体感应系统的调节

目的分析总结铜绿假单胞菌铁调节机理及其与群体感应系统之间的调节关系。方法汇总实验室有关铁调节和群体感应系统的研究结果,并结合相关文献资料进行分析总结。结果铜绿假单胞菌可以通过多种途径吸收利用不同来源或状态的铁源,在各种铁吸收途径中以铁载体介导途径尤为重要。Fur蛋白作为调节中心,与小RNA和ECF sigma因子共同对铁平衡进行精巧调节,而铁调节和群体感应系统相互影响,共同调节着相关基因的表达。结论铜绿假单胞菌中铁和群体感应系统协同作用,形成一个复杂的全局性网络,调节菌体毒性因子的表达等多种生理过程,影响着细菌感染的进程。

酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a表达的影响

目的:pH 6.0培养条件下观察神经生长因子(NGF)对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)基因和蛋白表达的调控作用及其机制。方法:体外提取培养原代大鼠膝关节软骨细胞,酸性环境下观察细胞NGF高亲和力受体TrkA的表达情况;不同浓度NGF刺激观察ASIC1a的表达变化;10 ng/m L NGF刺激不同时间胞外信号调节激酶(ERK1/2)及c-fos磷酸化的时效关系,阻断ERK1/2(PD98059 30μmol/L)后观察cfos磷酸化水平和ASIC1a的表达;RT-PCR检测ASIC1a基因的表达,Western Blot检测Trk-A、ASIC1a、ERK1/2、p-c-fos蛋白的表达。结果:在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境可高出3倍,ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,10 ng/m L时趋于稳定;NGF刺激后,ERK1/2及c-fos活化增强,4 h达到最大水平;阻断了ERK1/2之后,p-c-fos和ASIC1a蛋白表达下降,差异具有显著性(P<0.01)。结论:在酸性环境下,NGF促进了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的上调,并且ERK1/2信号通路的活化可能参与了这一过程。

福辛普利对胞外调节蛋白激酶在糖尿病肾病中表达的影响及其作用机制

目的:观察福辛普利对糖尿病肾病(DN)大鼠肾皮质中磷酸化胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的表达及肾脏病理变化的影响。探讨福辛普利对DN肾脏的保护作用机制。方法:雄性Wistar大鼠33只,随机取10只为对照组(A组),其余大鼠高糖高脂饲料喂养1个月后,腹腔注射链脲佐菌素建立早期DN模型,将大鼠分为模型组(B组)、福辛普利组(C组)。C组在成模后2周开始给药福辛普利10g/(kg·d)灌胃;A组及B组灌服相应容量(10mL/kg)的生理盐水,1次/d,连续6周。检测血糖、肾小球滤过率、尿微量白蛋白、肾肥大指数,用Westernblot方法检测肾皮质p-ERK1/2;用RT-PCR技术检测TGF-β1基因的表达。结果:治疗后6周B组和C组血糖值均明显高于A组。C组血糖值与B组之间未见明显差异。治疗6周B组和C组尿微量白蛋白、肾小球滤过率、肾肥大指数和肾小球系膜细胞基质相对面积均明显高于A组(均P<0.01)。治疗后上述指标C组低于B组(均P<0.01)。C组肾皮质p-ERK1/2、TGF-β1基因的表达均明显低于B组,肾组织病变明显减轻。结论:(1)p-ERK参与了DN的发生与发展。(2)福辛普利抑制DN大鼠肾皮质中ERK的活性,并下调TGF-β1基因的过度表达,减轻肾组织病理改变。(3)福辛普利对DN肾脏的保护作用,可能与抑制ERK活性有关。(4)ERK活化与DN高血糖、肾小球高滤过、TGF-β1基因的过度表达有关。

哺乳动物卵母细胞成熟及调节机制

哺乳动物卵母细胞的成熟是一个复杂的生理生化过程,包括核成熟和胞质成熟。对卵母细胞研究发现,卵母细胞成熟后表现出一些特征性变化,可作为判断卵母细胞成熟的标志。进一步研究表明,卵母细胞的成熟过程受许多生化因子的调节。

神经肽的细胞生长调节作用

神经肽广泛分布于人体的神经元和内分泌细胞,以循环内分泌、旁分泌、自分泌和胞内分泌的方式,调节体内的各种生理活动,包括对内胞生长过程的调节,因此,它也是一类细胞生长因子。

AHR和HIF1-α代谢调控1型调节性T细胞分化

目前，对于淋巴细胞代谢通路，及代谢本身和代谢产物对免疫反应的调节作用，仍不甚清楚。本文作者发现，缺氧诱导因子1-α（hypoxia inducible factor-1α，HIF1-α）和芳基化合物受体（aryl hydrocarbon receptor，AHR）通过代谢编码调控1型调节性T细胞（type 1 regulatory T cell，Tr1）分化。HIF1-α调节Tr1早期代谢重编码。随后，AHR促进HIF1-α降解，接管对T细胞代谢的调控。胞外ATP和缺氧，可以诱导炎症反应，促发HIF1α介导的AHR失活，抑制Tr1分化。与此相反，CD39通过消耗胞外ATP促进Tr1分化。CD39通过生成腺苷，同反应T细胞和抗原呈递细胞所表达的CD73一同参与Tr1的抑制作用。这些结果提示HIF1-α和AHR将免疫、代谢和环境信号联系起来共同调节免疫反应。