中药“脊髓康”治疗不全瘫患者临床疗效观察

据统计，世界范围内脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）的发病率为20～40／100万，常并发于脊柱骨折，约占脊柱骨折的14％。且发生率有逐年上升的趋势，严重影响人们的身体健康。“脊髓康”是笔者在近十年的巾西医结合临床骨伤科工作中，筛选总结出来的治疗脊髓损伤的经验方，已被临床证实对脊髓损伤中不全瘫患者的功能恢复有明显疗效，能促进脊髓、神经功能的恢复，减少并发症，提高病人生活质量，现报道如下：

中药复方“脊髓康”对神经干细胞分化作用的影响

目的:探讨中药复方"脊髓康"对神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)分化作用的影响。方法:制备"脊髓康"(JSK)含药血清;分离、培养原代NSCs;对NSCs进行鉴定;在胎牛血清(FBS)诱导NSCs分化后,加入不同剂量的JSK含药血清干预其分化,分为高、中、低剂量组,另设空白对照组,选取抗β3-微管蛋白(βⅢ-Tubulin)抗体、抗兔胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体对NSCs进行免疫荧光双标,检测其分化情况,并与不加含药血清的对照组进行对比;在荧光显微镜下,对不同视野βIII-Tubulin、GFAP的阳性细胞进行计数,并算出阳性细胞数占总细胞数的百分比,并进行荧光定量。结果:培养的神经球均表打巢蛋白(Nestin);JSK含药血清高、中、低剂量组βIII-Tubulin阳性细胞所占百分比明显高于空白组(P<0.05);JSK含药血清高、中、低剂量组GFAP阳性细胞所占百分比均低于空白组(P<0.05),且高剂量组与中、低剂量组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论:中药复方JSK促进NSCs向βIII-Tubulin阳性细胞方向分化,为中医药治疗SCI提供一定的依据。

脊髓康对脊髓损伤模型大鼠血清外泌体中miRNA表达的影响

目的探讨脊髓康治疗脊髓损伤的可能作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、强的松组和脊髓康组,每组20只。除假手术组外其余各组大鼠采用改进Allen′s方法建立脊髓损伤模型,假手术组大鼠脊髓暴露但未受伤。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水20ml/(kg·d)灌胃,强的松组大鼠给予强的松溶液60mg/(kg·d)灌胃,脊髓康组大鼠给予脊髓康溶液25g/(kg·d)灌胃。各组大鼠分别于术后7、14、21和28天进行指标观察,每个时间点5只。大鼠的运动功能采用双后肢运动功能评分(BBB评分)和斜板试验评价,采集血清后提取外泌体并用外泌体标志蛋白(Tsg101、CD63、CD9)进行鉴定,检测损伤区RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达,并检测外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达。结果与假手术组同时间比较,模型组大鼠斜板试验角度和BBB评分均降低,模型组在术后7、28天时RhoA蛋白及mRNA表达升高,术后28天时ROCK蛋白及mRNA表达升高,术后7、28天时外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达降低(P<0.05);与模型组同时间比较,脊髓康组和强的松组大鼠在术后21、28天时斜板试验角度和BBB评分增加,术后28天时RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达均降低,外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达均升高(P<0.05或P<0.01)。结论脊髓康可能通过促进急性脊髓损伤模型大鼠血清外泌体中miR-21、miR-126、miR-133b表达,进而抑制RhoA/ROCK通路,从而修复脊髓损伤,改善大鼠的运动功能,在28天时作用最明显。

脊髓康含药血清联合SOX-2对星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞的影响

目的研究脊髓康联合SRY转录盒因子2(SOX-2)治疗脊髓损伤的作用机制。方法成年SD大鼠随机分为空白组和给药组各5只。给药组大鼠以生药量20 g/(kg·d)脊髓康灌胃,空白组给予16 ml/(kg·d)生理盐水灌胃,均连续灌胃3天后腹主动脉采血制备含药血清和空白血清。体外培养1~4日龄大鼠幼仔皮层脑组织三代星形胶质细胞,分为空白血清组、SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组。SOX-2组加入10 mmol/L SOX-2;SOX-2+脊髓康血清组加入2.5%脊髓康含药血清和10 mmol/L SOX-2,使培养基中血清终浓度为10%;空白血清组加入10%空白血清。诱导培养21天后,光镜下观察3组神经元样细胞形态改变,细胞免疫荧光检测神经元轴突标志物微管相关蛋白2(MAP2)的表达,Western-Blot检测细胞中下游代谢产物S腺苷甲硫氨酸(SAM)、乙酰辅酶A(acetyl-CoA)表达,PCR定量分析星形胶质细胞中糖酵解相关基因己糖激酶1(HK1)、己糖激酶2(HK2)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、磷酸果糖激酶2(PFK2)、M2型丙酮酸激酶同工酶(PKM2)基因表达。细胞能量代谢分析仪比较SOX-2组、SOX-2+脊髓康血清组细胞外酸化率(EACR)和耗氧率(OCR)。结果光镜下见SOX-2+脊髓康血清组大量具有两极且长轴突的神经元样细胞,较SOX-2组明显增多;空白血清组见星形胶质细胞,未见神经元样细胞。与空白血清组和SOX-2组比较,SOX-2+脊髓康血清组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达均升高,HK1、HK2、PFK1、PFK2、PKM2基因表达亦显著升高(P<0.05或P<0.01)。SOX-2+脊髓康血清组ECAR和OCR亦高于SOX-2组。空白血清组和SOX-2组MAP2、SAM、acetyl-CoA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊髓康含药血清联合SOX-2可以将星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞,其机制可能是通过提高糖酵解能力从而提升星形胶质细胞重编程。