基于“脾虚-内质网应激”探讨健脾法对炎症性肠病肠纤维化内质网应激的调节作用

肠纤维化是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)常见并发症之一,内质网应激参与纤维化形成是其重要发病机制.内质网是细胞内最大的膜网络结构,主要参与机体蛋白质的合成代谢.脾主运化是脾脏正常的生理功能,脾虚不能运化水谷精微,导致湿热、痰浊、瘀毒等病理产物壅滞于肠道,肠壁增厚,甚至肠腔狭窄、梗阻,诱发本病.生理学上,脾和内质网有一定相关性;病理学上,脾虚是内质网应激的本质,是IBD肠纤维化的核心病理环节.因此,从健脾法治疗有助于改善内质网代谢功能.所以,基于“脾虚-内质网应激”理论探讨健脾法调节内质网应激、恢复内质网稳态是研究和治疗IBD肠纤维化作用机制的重要理论.

基于“脾失运化”探讨运脾法调节多囊卵巢综合征内质网应激作用

多囊卵巢综合征(PCOS)是临床常见的异质性疾病,生殖障碍和代谢异常为本病两大病理特征。内质网应激指的是由于多种因素导致未折叠和(或)蛋白质聚集,通过恢复蛋白质正确的折叠方式的一种真核细胞的适应性反应。通过对脾主运化理论的古籍文献梳理发现,脾脏运化水谷,将精微物质布散周身的功能与现代医学中内质网在细胞中的重要作用有着类似之处,即通过承担蛋白质折叠和钙储存等多项任务,保证细胞能够正常发挥生理功能。若脾失运化,痰湿阻滞是本病的核心病机,现代研究认为内质网应激能够较好地阐释脾失运化的发生学原理,这与中医学的病机认识相同。因本病的发病机制与内质网应激存在相似之处,即其发生发展均与炎症、氧化应激、雄激素过多和胰岛素合成及分泌异常等相关。内质网应激的发生可能在PCOS的疾病进展中扮演着重要角色。运脾法能够延缓内质网应激的发生,同时也可有效缓解PCOS的肥胖、胰岛素代偿性增高等相关特征。因此,缓解内质网应激有望成为治疗本病的新思路。健运脾气,补益脾阳为本病治疗大法,从恢复脾运的角度调控内质网应激,以期为改善PCOS相关临床症状提供不同的治疗角度。

4-苯基丁酸通过核转录因子-κB通路减轻滋养细胞内质网应激

目的探讨4-苯基丁酸(4-PBA)减轻内质网应激的信号通路。方法采用永生化的滋养细胞株HTR-8/Svneo为研究对象,建立内质网应激模型,加入4-苯基丁酸进行培养后,采用蛋白免疫印迹法比较质网应激特异性分子GRP78、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。同样的方法检测核转录因子(NF)-κB,caspase-3,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达。结果随着4-PBA浓度增加,内质网应激特征蛋白的表达量下降,各不同浓度之间表达量相比较,差异具有统计学意义。培养基中加入不同浓度的4-PBA进行培养后检测NF-κB的表达量随着4-PBA浓度的增加,NF-κB的表达量下降,差异具有统计学意义。结论4-苯基丁酸通过NF-κB通路减轻滋养细胞内质网应激。

酸枣仁-合欢花对抑郁模型大鼠海马内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路的影响

目的基于内质网应激(ERS)肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/凋亡信号调节激酶1(ASK1)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路探讨酸枣仁-合欢花对孤养结合慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型大鼠的干预作用。方法将144只大鼠随机分为正常组、模型组及酸枣仁-合欢花高、中、低剂量组和文拉法辛组。除正常组外,其他各组进行21 d的孤养结合CUMS制备大鼠抑郁模型。用旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学变化;用透射电镜观察海马神经细胞超微结构变化;用TUNEL染色法观察海马神经细胞凋亡情况;用Western Blot法检测海马组织IRE1α、磷酸化(P)-IRE1α、ASK1、P-ASK1、JNK、P-JNK、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达水平;用Real-Time PCR法检测海马IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组旷场实验中水平运动和垂直运动得分下降(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期增加、跨越原平台次数减少(P<0.01);海马神经细胞凋亡数增加(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平升高、Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁-合欢花各组及文拉法辛组旷场实验中水平运动和垂直运动得分升高(P<0.01);水迷宫实验中逃避潜伏期缩短、跨越原平台次数增加(P<0.01);海马神经细胞凋亡数减少(P<0.01);海马P-IRE1α/IRE1α、P-ASK1/ASK1、P-JNK/JNK、Bax、Caspase-3蛋白及IRE1α、ASK1、JNK、Bax、Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),且酸枣仁-合欢花中剂量组较高、低剂量组效果更好。结论酸枣仁-合欢花可能通过调节内质网应激IRE1α/ASK1/JNK通路发挥抗抑郁作用。

基于糖原合成酶激酶-3β及内质网应激探讨Renalase抗肾脏纤维化的作用机制

目的 探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在Renalase抗肾脏纤维化过程中的作用及其可能的机制。方法 选用C57BL/6小鼠,予以下分组:(1)Sham+Ad-β-gal组;(2)Sham+Ad-Renalase组;(3)UUO+Ad-β-gal组;(4)UUO+Ad-Renalas组。观察GSK-3β表达的变化,其中UUO组为单侧输尿管结扎致肾脏纤维化模型组,Sham组为假手术对照组,Ad-Renalase为过表达Renalase腺病毒,Ad-β-gal为对照腺病毒。然后应用病毒转染技术上调(UUO+Ad-Renalase+AAV-GSK-3β组)及下调(UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组)GSK-3β后观察Renalase抗纤维化作用的变化。结果 与假手术(Sham)组相比,UUO组GSK-3β表达增加;与UUO+Ad-β-gal组相比,UUO+Ad-Renalase组纤维组织沉积减少、纤维化标志蛋白Col-Ⅰ和FN表达下降的同时GSK-3β表达下调;当上调GSK-3β后,Renalase抗纤维化作用被抵消,而当下调GSK-3β后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组纤维化没有进一步改善。同时观察到与Sham组相比,UUO组内质网应激激活明显,过表达Renalase后,内质网应激被抑制。当加入内质网应激激动剂TM后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+TM组纤维化加重,GSK-3β表达升高;但无论GSK-3β升高或者降低,内质网应激均无明显变化。结论 本研究证实在单侧输尿管结扎致肾脏纤维化过程中,Renalase通过抑制内质网应激下调GSK-3β表达从而延缓肾脏纤维化。

β-伴大豆球蛋白诱导杂交黄颡鱼肠道上皮细胞内质网应激模型的建立

实验旨在利用β-伴大豆球蛋白构建黄颡鱼上皮细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)模型。利用酶消化法分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,通过细胞形态、角蛋白18(Cytokeratin-18,CK-18)免疫荧光染色和碱性磷酸酶染色法鉴定。利用不同浓度β-伴大豆球蛋白刺激24h后,RT-qPCR检测相关基因转录表达水平,筛选最合适刺激浓度。在此浓度下分别刺激黄颡鱼肠道上皮细胞0、12h、24h和36h,使用RTqPCR、CCK8、透射电镜和免疫荧光染色等方法检测相关指标,筛选最适刺激时间。结果表明:(1)成功分离培养黄颡鱼肠道上皮细胞,细胞呈铺路石状,CK-18和碱性磷酸酶染色呈阳性;(2)成功筛选到4 mg/mLβ-伴大豆球蛋白为最佳刺激浓度。在该浓度下,除grp78、jnk、il-10、atf6外,内质网应激、自噬、凋亡、炎症等相关基因表达水平均显著最高(P<0.05);成功筛选24h为最适刺激时间。4 mg/mL β-伴大豆球蛋白刺激细胞24h显著降低细胞活力,同时引起内质网显著肿胀,GRP78、LC3、Caspase3蛋白表达和Tunel信号显著升高(P<0.01),perk、atf6、beclin1、lc3a、bcl2、caspase3、caspase9和il-12 mRNA表达水平显著最高(P<0.05)。综上,实验成功分离得到黄颡鱼肠道上皮细胞,构建了黄颡鱼肠道上皮细胞内质网应激模型。实验为进一步研究未折叠反应信号通路在黄颡鱼豆粕诱导肠炎发生发展中的作用奠定基础。

香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠内质网应激PERK信号通路的影响

目的探讨香砂六君子汤对脾虚高脂血症大鼠内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为4组,即正常对照组、脾虚高脂组、香砂六君子汤组和辛伐他汀组,后3组采用饮食不节加力竭游泳的复合方法造模15 d后,正常组喂饲基础饲料,其余3组喂饲高脂饲料。12周后,分别给予相对剂量药物和生理盐水。4周后,检测各组大鼠血脂含量、D-木糖排泄率,油红O染色观察肝脏脂质沉积情况,实时荧光定量PCR及Western blot法检测大鼠肝脏葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kD,GRP78)、PERK和活化转录因子4(the activating transcription factor 6,ATF4)基因及蛋白表达。结果与正常对照组比较,脾虚高脂组大鼠血清脂质异常,表现为总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇酯(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)明显升高,高密度脂蛋白胆固醇酯(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)明显降低,尿D-木糖排泄率明显降低;肝脏脂质沉积显著,可见明显脂滴;肝脏GRP78、PERK和ATF4 mRNA水平及蛋白表达水平显著升高。与脾虚高脂组比较,香砂六君子汤组和辛伐他汀组大鼠血清TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高,尿D-木糖排泄率明显升高;其肝脏脂质沉积情况有明显改善,脂滴不同程度减轻;肝脏GRP78、PERK和ATF4 mRNA水平及蛋白表达水平明显降低。结论香砂六君子汤可能通过调控内网应激PERK信号通路来纠正脾虚脂质紊乱的状态。

基于内质网应激探讨慢性冠脉综合征从脾治心内涵

中医学认为,心脾在生理、病理上紧密联系,脾病可致心病,心病可从脾治。内质网稳态和应激状态与中医脾的生理、病理相似,可能是中医脾功能在亚细胞层面的体现。内质网应激是慢性冠脉综合征的致病因素,通过参与动脉粥样硬化形成与血管内皮功能障碍促进慢性冠脉综合征进展,这与中医脾参与痰瘀形成,导致胸痹的过程相似。内质网应激与慢性冠脉综合征的联系为中医从脾治心、心脾同治提供参考,为中医药防治慢性冠脉综合征提供思路。

清热利湿健脾方对溃疡性结肠炎大鼠肠道菌群、免疫炎性反应及内质网应激的影响

目的 探讨清热利湿健脾方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道菌群、免疫炎性反应及内质网应激的影响。方法 雄性SD大鼠SPF级40只,随机分为4组,每组10只。制备UC大鼠模型。低剂量组大鼠给予1.42 g/kg清热利湿健脾方汤灌胃,持续14 d;高剂量组大鼠给予5.68 g/kg清热利湿健脾方灌胃,持续14 d;模型组和正常组大鼠灌胃氯化钠溶液等剂量,持续14d。比较各组大鼠DAI评分,肠道菌群,免疫炎性因子,ATF4、CHOP和GRP78蛋白表达情况。结果 与正常组比较,其余各组UC大鼠DAI评分、大肠杆菌和肠球菌相对表达量、IL-6、IL-17、ATF4、CHOP和GRP78蛋白表达灰度值升高,而乳酸杆菌和双歧杆菌相对表达量、IL-10水平降低(P<0.05);与模型组比较,低剂量组和高剂量组UC大鼠DAI评分、大肠杆菌和肠球菌相对表达量、IL-6、IL-17、ATF4、CHOP和GRP78蛋白表达灰度值降低,而乳酸杆菌和双歧杆菌相对表达量、IL-10水平升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组UC大鼠乳酸杆菌和双歧杆菌相对表达量、IL-10水平降低,而乳酸杆菌和双歧杆菌相对表达量、IL-10水平升高(P<0.05)。结论 清热利湿健脾方可改善UC大鼠肠道菌群,减轻免疫炎性反应,下调ATF4、CHOP及GRP78蛋白表达。

中风活心软胶囊通过PPARγ受体上调STAT3磷酸化激活PI3K/AKT通路抑制脑缺血再灌注损伤内质网应激的作用机制研究

目的探讨中风活心软胶囊介导过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)受体上调信号传导转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化诱导磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(BAKT serine/threonine kinase,AKT)信号通路参与脑缺血再灌注损伤内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激和神经保护的作用机制研究,阐明中风活心软胶囊对脑缺血后神经损伤修复的调控机制。方法选取30只SPF级雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组和治疗组,采用Zea Longa法建立右侧大脑中动脉缺血(middle cerebral artery ischemia,MCAI)大鼠模型,采用改良神经功能损伤评分(modified neurological severity score,mNSS)评估大鼠神经功能缺损情况,以mNSS评分2~18分为造模成功。仅治疗组给予中风活心软胶囊。Western blot法分别检测缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白的表达,检测ER应激标记分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)及真核翻译起始因子2α激酶3(PKR-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)-激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)-C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)通路蛋白表达水平。结果模型组大鼠神经功能缺损情况,透射电镜观察缺血半暗区皮质神经元显著减少,提示右侧MCAI大鼠模型构建成功。模型组、治疗组mNSS评分均高于对照组,但治疗组低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠缺血区PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K及AKT蛋白表达均低于对照组与治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组各指标比较差异无统计学意义。治疗组、模型组大鼠缺血区GRP78、PERK、ATF4和CHOP蛋白表达均高于对照组,但治疗组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中风活心软胶囊可显著提高脑缺血大鼠缺血半暗区皮质PPARγ受体蛋白、STAT3磷酸化蛋白、PI3K/AKT信号通路蛋白表达,其作用机制可能是通过介导PPARγ受体上调STAT3磷酸化诱导PI3K/AKT信号通路参与脑缺血再灌注损伤ER应激和神经保护,从而发挥脑保护效应。

温肾健脾方由mTOR信号通路调控自噬-内质网应激平衡减轻DN大鼠肾脏损伤的机制研究

目的:探究温肾健脾方由mTOR信号通路调控自噬-内质网应激平衡减轻DN大鼠肾脏损伤的作用机制。方法:将链脲佐菌素诱导的DN模型大鼠分为5组,每组6只,即DN对照组、温肾健脾方低剂量组(7.5 g·kg^(-1)·d^(-1))、温肾健脾方中剂量组(15 g·kg^(-1)·d^(-1))、温肾健脾方高剂量组(30 g·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦阳性对照组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)),另以6只正常大鼠作为阴性对照组(等渗NaCl溶液10 ml·kg^(-1)·d^(-1))。各组大鼠连续灌胃8周后,分别采用Western blot、RT-PCR等方法检测各组大鼠肾脏组织内Ca^(2+)浓度、mTOR蛋白磷酸化水平、自噬因子LC3、Beclin-1蛋白表达水平及ERS分子伴侣GRP78 mRNA水平。结果:与正常对照组大鼠相比,DN模型组大鼠肾脏细胞内Ca2+浓度和自噬因子LC3、Beclin-1蛋白水平降低,磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR比值及ERS分子伴侣GRP78 mRNA水平升高,温肾健脾方干预组大鼠肾脏细胞内Ca^(2+)浓度和LC3、Beclin-1蛋白表达水平升高,p-mTOR/mTOR比值及GRP78基因转录水平显著下降。结论:温肾健脾方可能通过提高肾脏细胞内Ca2+浓度,抑制DN大鼠肾脏细胞mTOR活性,诱导肾脏细胞自噬增强,改善ERS进而恢复细胞稳态。

基于内质网应激与sdLDL代谢探讨“脾邪干心”理论科学内涵

血脂异常已被循证医学证实为致动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease, ASCVD)的独立危险因素之一。中医认为,心脾系母子二脏,气血互济,病理互制。脾失运化,浊滞血脉,引发血脂异常。心血管疾病和中医“脾”关系密切,“脾邪干心”是动脉粥样硬化(atherosclerotic, AS)相关心血管疾病发病机制的高度概括。内质网功能稳态是保证人体各种酶发挥作用的前提,是脾主运化功能正常的重要体现,许多关键的脂肪生成途径均位于内质网中。而在多种生理和病理条件下,细胞的内质网会启动自我保护反应机制即内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)。研究显示,ERS与脂代谢异常类疾病的发生密切相关,抑制ERS是减轻肝脂质积聚而发挥抗AS的潜在治疗靶点。在血脂谱中,小而密低密度脂蛋白(small dense low-density lipoprotein, sdLDL)作为低密度脂蛋白(low-density lipoprotein, LDL)的一种亚型,因其更可能导致AS被认为是心血管疾病重要而独立的预测因子,其生成和代谢受到多个基因的调控,而血中高甘油三酯的状态是sdLDL形成的直接原因。因此,从ERS角度探讨sdLDL代谢可能为研究AS等疾病的发病机制提供新的方向,丰富“脾邪干心”理论科学内涵。

基于“内质网-线粒体”互通论心肌梗死后抑郁“瘀虚痰热”之机

双心疾病主要指心脏和心理同病,心肌梗死后抑郁是常见的双心疾病。心肌梗死后,患者容易出现抑郁等不良情绪,而抑郁情绪又是诱发不良心血管事件的重要危险因素。瘀、虚、痰、热作为心肌梗死后抑郁的重要病因,可单独或相兼致病,故临床上常用活血养血、化痰清心之法以达到瘀、虚、痰、热共治的目的。同时,现代医学认为内质网应激引起线粒体相关内质网膜(MAM)钙稳态失衡是导致线粒体钙超载损伤的内在机制,本文从该角度阐释心肌梗死后抑郁的内在机制,为临床治疗提供新的参考。

基于cTAGE5/TANGO1胞内转运探究健脾消渴方改善内质网应激保护胰岛β细胞机制

糖尿病(DM)发病率逐年升高,到2040年全球预计有4.2亿人[1]。胰岛素分泌不足及胰岛素抵抗是DM发病的主要原因,胰岛β细胞数量和功能决定胰岛素分泌功能[2],胰岛β细胞数量减少及分泌功能障碍均可引起胰岛素分泌不足,引发DM[3,4]。

基于内质网应激探讨越婢加术汤对糖尿病肾病患者的治疗机制

【目的】基于内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)探讨越婢加术汤对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的治疗机制。【方法】将114例脾肾阳虚型DKD患者随机分为观察组和对照组,每组各57例。对照组给予常规西医治疗,观察组在对照组的基础上联合越婢加术汤治疗,疗程为3个月。观察2组患者治疗前后中医证候积分(包括主症积分和次症积分)、血糖指标[空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)]、肾功能指标[尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白、肌酐(SCr)]、ERS相关指标[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)],并评价2组患者的临床疗效和安全性。【结果】(1)疗效方面,治疗3个月后,观察组的总有效率为91.23%(52/57),对照组为70.18%(40/57),组间比较,观察组的临床疗效明显优于对照组(P<0.01)。(2)中医证候积分方面,治疗后,2组患者的主症积分和次症积分均较治疗前明显降低(P<0.01),且观察组对主症积分和次症积分的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(3)血糖和肾功能方面,治疗后,2组患者的FPG、HbA1c、SCr、24 h尿蛋白、BUN水平均较治疗前明显降低(P<0.05或P<0.01),且观察组对FPG、HbA1c、SCr、24 h尿蛋白、BUN水平的降低作用均明显优于对照组(P<0.01)。(4)ERS方面,治疗后,2组患者的GRP78、PERK、CHOP mRNA表达水平均较治疗前明显降低(P<0.01),且观察组对GRP78、PERK、CHOP mRNA表达水平的降低作用均明显优于对照组(P<0.05)。(5)安全性方面,治疗期间,2组患者均未发生严重不良反应,患者的血压、心电图、血常规、肝功能等均未见明显异常,具有较高的安全性。【结论】越婢加术汤治疗脾肾阳虚型DKD患者疗效确切,有助于缓解患者临床症状,改善患者肾功能和血糖水平,其疗效机制可能与抑制内质网应激有关。

内质网应激调控巨噬细胞免疫应答在肝脏疾病中的作用

内质网应激是指细胞受到刺激时产生的一种细胞应激反应,表现为在多种病理情况下内质网稳态破坏和功能紊乱,导致大量错误折叠与未折叠蛋白在内质网内累积以及钙离子失衡。巨噬细胞是肝内数量最多的免疫细胞,在维持肝脏内环境稳态和多种肝脏疾病中发挥了重要作用。最近研究证实内质网应激引起的未折叠蛋白反应在调控巨噬细胞免疫活化中扮演重要角色。本文将围绕内质网应激调控巨噬细胞免疫应答的机制,及其在肝移植缺血-再灌注损伤、肝纤维化、肝细胞癌等肝脏疾病中的作用展开综述,以加深对巨噬细胞免疫调控机制的理解,为肝脏疾病相关研究和干预治疗提供新的思路。

GABA信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤内质网应激和线粒体自噬的影响

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤(ALI)内质网应激(ERS)和线粒体自噬的影响。方法SD大鼠分为CON组、Model组、GABA信号通路激活剂巴氯芬组(巴氯芬组)、GABA信号通路抑制剂荷包牡丹碱(BIC)组(BIC组),每组6只。巴氯芬组腹腔注射5 mg/kg的巴氯芬,BIC组腹腔注射1 mg/kg BIC,每日1次,连续处理2周。CON组、Model组腹腔注射等量生理盐水。酶联免疫吸附试验检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞色素C(Cyt.C)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平;透射电子显微镜(TEM)观察肺组织细胞超微形态;HE染色观察肺组织病理形态;TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡;Western blot检测肺组织GABAAR、GRP78、CHOP蛋白表达。结果与Model组相比,巴氯芬组肺肿胀、充血、炎性细胞浸润现象改善,肺损伤评分、MDA含量、凋亡指数、Cyt.C和NADPH水平、GRP78和CHOP蛋白水平降低(P<0.05),吞噬线粒体的自噬性空泡数量、SOD含量、GABAAR蛋白水平增加(P<0.05),而BIC组以上指标结果与巴氯芬组趋势相反。结论活化GABA信号通路可改善脓毒症大鼠ALI。

4-羟基苯并噁唑-2-酮通过脂质代谢和内质网应激通路治疗酒精性脂肪肝大鼠的作用机制研究

目的探讨4-羟基苯并噁唑-2-酮[4-hydroxy-2(3H)-benzoxazolone,HBOA]对酒精性脂肪肝(AFLD)大鼠脂质代谢和内质网应激(ERS)的影响。方法实验前应用AutoDock Tools软件将4-羟基苯并噁唑-2-酮分别与脂质代谢及ERS相关蛋白进行分子对接,预测结合能力。动物实验先将雄性SD大鼠随机分为正常组和模型复制组,参考酒精递增灌胃法建立酒精性脂肪肝模型,模型复制成功的大鼠随机分为模型组、水飞蓟宾组(26.25 mg·kg^(-1))及4-羟基苯并噁唑-2-酮高、中、低剂量组(100、50、25 mg·kg^(-1))。观察大鼠状态;记录体质量、肝质量,并计算肝指数;油红O染色观察肝组织脂肪变性情况;采用试剂盒法或全自动生化分析仪检测肝组织中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)和血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;Western Blot法检测肝组织脂质代谢及ERS相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶样ER激酶(PERK)及其磷酸化(p-PERK)、肌醇蛋白酶1(IRE1)及其磷酸化(p-IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的表达水平;RT-qPCR法检测肝组织SREBP-1c、GRP78 mRNA表达。结果4-羟基苯并噁唑-2-酮与脂质代谢及ERS相关蛋白之间结合能均小于0 kcal·mol^(-1)。与正常组比较,模型组大鼠肝指数明显增高(P<0.01),镜下可见肝组织大面积红染且细胞内有大量红棕色脂滴,肝组织中GPT、GOT和血清中TC、TG、LDL-C水平明显增高(P<0.01),HDL-C水平明显降低(P<0.01),肝组织中脂质代谢相关蛋白SREBP-1c、ACC1和ERS相关蛋白GRP78、ATF6蛋白表达及PERK、IRE1磷酸化水平明显增高(P<0.01),肝组织中SREBP-1c、GRP78 mRNA相对表达量明显增高(P<0.01)。与模型组比较,4-羟基苯并噁唑-2-酮各组大鼠肝指数(低剂量组除外)明显降低(P<0.01),镜下未见肝组织大面积红染,细胞内脂滴聚集不同程度减少,肝功能指标及血脂四项得到明显改善(P<0.05,P<0.01),4-羟基苯并噁唑-2-酮各组脂质代谢相关蛋白SREBP-1c、ACC1和ERS相关蛋白GRP78、ATF6蛋白表达及PERK、IRE1磷酸化水平明显降低(P<0.05,P<0.01),4-羟基苯并噁唑-2-酮各组SREBP-1c(低剂量组除外)、GRP78 mRNA相对表达量明显降低(P<0.01)。结论4-羟基苯并噁唑-2-酮可改善酒精诱导的大鼠酒精性脂肪肝,可能与调节脂质代谢及抑制内质网应激有关。

芪归通络方联合针刺改善卒中后偏瘫的临床观察及对内质网应激-自噬的影响

目的 探讨芪归通络方联合针刺治疗脑卒中后偏瘫的临床疗效及对内质网应激-自噬的影响。方法 选取2019年6月-2021年2月医院脑病科收治的卒中后偏瘫患者86例纳入研究,随机数字表法分为对照组与针药组,各43例。对照组在西医常规治疗基础上给予针刺治疗,每次30 min,日1次,每6 d休息1 d;针药组在对照组基础上加用芪归通络方口服,每剂药取汁300 mL,早晚分2次服用,两组均连续治疗4周后进行疗效评定及安全性评价,比较两组的中医临床证候积分、美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS)评分、Fug-Meyer运动功能量表(Fug-meyer Assessment Scale, FMA)评分及卒中影响量表(Stroke Impact Scale, SIS)评分,检测并比较患者血清内质网应激-自噬相关指标水平。结果 两组治疗后的中医证候评分、NIHSS量表评分均较治疗前显著降低(P<0.05),针药组明显低于对照组(P<0.05);FMA和SIS量表评分均较治疗前显著升高(P<0.05),针药组明显高于对照组(P<0.05)。针药组治疗后的总显效率(74.42%,32/43)和总有效率(95.35%,41/43)均明显高于对照组(48.84%,21/43和81.40%,35/43),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后的血清内质网应激相关蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulatory protein 78,GRP78)、半胱天冬酶-12(Caspase-12)、自噬标志物LC3Ⅱ、自噬基因Beclin1水平均较治疗前显著降低(P<0.05),针药组明显低于对照组(P<0.05);B细胞淋巴瘤因子2(B-cell lymphoma factor 2,Bcl-2)水平较治疗前显著升高(P<0.05),针药组明显高于对照组(P<0.05)。针药组研究期间不良反应率为4.65%(2/43),与对照组的不良反应率(6.98%,3/43)比较,差异未见统计学意义(χ^(2)=0.212,P>0.05)。结论 芪归通络方联合针刺治疗脑卒中后偏瘫能够明显改善患者临床症状,增强疗效,改善神经功能损伤、肢体运动功能及生存质量,其机制可能与调控内质网应激途径影响脑卒中神经元凋亡与自噬相关。

杨桃根DMDD对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2内质网应激IRE1α通路及炎症反应的抑制作用

目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol·L^(-1))。各组细胞培养结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的水平;AO/EB染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平、内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达水平以及IRE1α通路相关蛋白(IRE1α、JNK)的磷酸化水平。结果与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞存活率明显升高;TNF-α、IL-6水平,Bax/Bcl-2、GRP78、CHOP蛋白表达水平和IRE1α、JNK蛋白磷酸化水平均明显降低,细胞中橙红色荧光明显减少。结论DMDD可能部分通过抑制内质网应激及IRE1α通路相关蛋白的表达,减少炎症反应,达到HK-2细胞的保护作用。