血液制品中细小病毒去除/灭活技术研讨会会议纪要

2014年5月27日,由中国输血协会血液制品工作委员会举办、赛多利斯斯泰迪生物技术有限公司承办的血液制品中细小病毒去除/灭活技术研讨会在北京召开。到会参加者来自中国药品审评中心、中国药品检定研究院、国内主要血液制品企业及研究机构会议邀请了欧洲病毒安全法规专家和美国病毒安全评价实验室的专家。本次会议的议题为＂如何对新的病毒去除/灭活技术进行全面安全评估＂,

EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立

目的建立以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测猪细小病毒(PPV)的方法,为血液制品中病毒去除效果的工艺验证提供高效准确的技术平台。方法根据PPV的VP2基因保守序列,设计并合成引物。对目的片段进行PCR扩增,将扩增的PPV病毒VP2基因片段克隆入PMD19-T载体,重组质粒PMD19-T-VP2经测序鉴定正确后,作为标准品模板,用于标准曲线的绘制和该实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性检测的材料。结果应用重组质粒PMD19-T-VP2制作的荧光定量PCR扩增曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;该方法检测灵敏度的下限能达到102copies/μl;与其他DNA病毒和同种属的细小病毒无明显的交叉反应;连续重复检测高、中、低浓度样品,批内批间变异系数小,重复性好。结论以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测PPV的方法提高了检测灵敏度,缩短了工艺验证的时间。