基于“鼻-脑”通路细胞模型组探索相对分子质量及粒径因素对药物制剂经鼻入脑的影响

目的基于"鼻-脑"通路体外细胞模型,探索药物制剂经鼻入脑的影响因素。方法将Calu-3细胞与嗅神经鞘细胞(OECs)细胞共培养,构建"鼻-脑"通路细胞模型组。以荧光素异硫氰酸酯右旋葡萄糖苷(FD)和荧光纳米银粒子(AgNPs)为模型药物,探索药物相对分子质量(Mw)因素及制剂粒径因素对药物经鼻入脑的影响。结果 FD随Mw增大其跨细胞单层膜转运表观渗透系数(Papp)减小;OECs对不同Mw FD的摄取在90 min后摄取量趋于饱和,随其Mw增大,相同摄取时间OECs摄取量有明显下降趋势。不同粒径荧光AgNPs在"鼻-脑"多通路细胞模型组Calu-3单层的Papp随纳米粒的粒径增大而减小,粒径<40 nm,其在Calu-3的转运特性表现为中等吸收(1×10-6<Papp<10×10-6),粒径>60 nm,其转运特性为难吸收(Papp<1×10-6);OECs对不同粒径荧光AgNPs的摄取在60min趋于饱和且随其粒径增大,相同摄取时间OECs摄取量有明显下降趋势。结论药物Mw大小及纳米制剂的粒径对于药物经鼻转运入脑具有重要影响,Mw<4 000的药物,粒径<40 nm的纳米粒子具有更好转运和摄取特性。

醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4的影响研究

目的:探讨醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4(AQP-4)的影响。方法:建立胶原酶VII定位注射诱发大鼠尾壳核脑出血模型,随机分成醒脑静治疗组和对照组。建模后给予一次药物治疗。醒脑静治疗组大鼠给予腹腔注射醒脑静注射液2ml/kg,对照组大鼠给予腹腔注射等容量生理盐水。治疗72h后对比两组大鼠生存率、行为学改变,处死取材测定脑组织含水量变化,观察脑实质组织学及星形胶质细胞超微结构的改变;逆转录PCR检测AQP-4mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。含血清培养大鼠星形胶质细胞,随机分成5ml/L、10ml/L、20ml/L醒脑静组和对照组,培养基中分别加入5ml/L、10ml/L、20ml/L的醒脑静和等容量的生理盐水,逆转录PCR检测AQP-4mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。结果:醒脑静治疗组大鼠生存率、行为学评分均较对照组明显改善;电镜下显示醒脑静治疗可减轻模型大鼠病灶周围星形胶质细胞水肿,上调脑组织表达AQP-4蛋白与mRNA的表达,细胞实验显示,随着培养基中加入醒脑静浓度增加,星形胶质细胞的AQP-4蛋白与mRNA的表达增加。结论:经醒脑静治疗后的脑出血大鼠无论在生存率还是在肢体对称平衡方面均得到改善,其机制可能是醒脑静可直接刺激星形细胞上调AQP-4蛋白及mRNA的表达,从而缓解脑出血后血管源性脑水肿的进展,这为未来醒脑静用于治疗脑出血后脑水肿治疗提供新的理论支持。

脑醒喷鼻剂对脑缺血再灌注损伤抗炎保护作用的实验研究

目的:观察脑醒喷鼻剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α和白细胞介素-1β(IL-1β)含量变化的影响。方法:将70只大鼠随机分为脑醒喷鼻剂高剂量组(高剂组)、脑醒喷鼻剂中剂量组(中剂组)、脑醒喷鼻剂低剂量组(低剂组)、尼莫通腹腔注射组(对照组)、生理盐水喷鼻剂组(NS组)、溶酶喷鼻剂组(溶酶组)、假手术组(正常组)共7组,每组10只。用线栓法阻断大鼠左侧大脑中动脉建立左大脑中动脉栓塞模型并进行再灌注。在造模前3天及再灌注期间,脑醒喷鼻剂高、中、低剂组分别以含川芎嗪和石菖蒲生药5.4mg·kg-1·d-1和1.08g·kg-1·d-1、2.7mg·kg-1·d-1和0.54g·kg-1·d-1、1.35mg·kg-1·d-1·和0.27g·k-1·d-1的剂量滴鼻;NS组以生理盐水0.18ml·kg-1·d-1滴鼻;溶酶组以溶酶0.18ml·kg-1·d-1滴鼻;对照组用尼莫通注射液0.8mg·kg-1·d-1腹腔注射;正常组按常规饲养。检测血清TNF-α和IL-1β。结果:高剂组、中剂组可降低血清中IL-1β和TNF—α含量,与NS组比较,差异有非常显著性或显著性意义(P<0.01,P<0.05)。低剂组虽然也能降低TNF—α和IL-1β含量,与NS组比较,差异无显著性意义(P>0.05);但与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:脑醒喷鼻剂能抑制TNF-α和IL-1β的表达,使血清中TNF-α和IL-1β生成减少,从而阻断其介导的炎症反应,对脑缺血再灌注损伤具有抗炎和神经保护作用。

大鼠脑缺血再灌注后TNF-α及ICAM-1的相关性分析

目的 观察大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞间黏附分子- 1(ICAM - 1)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)在脑缺血再灌注损伤不同时间段的表达规律,探讨ICAM - 1、TNF -α在脑缺血再灌注损伤中的关系。方法 采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠大脑中动脉阻塞2h ,分别再灌注2、6、12、2 4、4 8、96h ,免疫组织化学法测定ICAM - 1、TNF -α表达水平。并设正常组、假手术组及永久缺血组对照。结果 ICAM - 1的表达:永久缺血组、缺血再灌注组ICAM - 1明显高于正常对照组和假手术组(P <0 .0 1) ;与永久缺血组比较,缺血再灌注组除再灌注2h时段外,ICAM - 1表达明显增高(P <0 .0 5 ) ;脑缺血再灌注2h组局部脑组织ICAM - 1的表达于再灌注4 8h达到峰值,再灌注96h仍保持较高水平。TNF -α的表达:缺血再灌注组大鼠缺血侧半球TNF -α的表达于再灌注2h开始升高,再灌注12h ,阳性细胞显著增多,2 4h达到高峰,其后逐渐下降,96h达基础水平;缺血再灌注组TNF-α的表达较正常组、假手术组有显著差异(P <0 .0 1) ,比永久缺血组TNF -α阳性细胞低,但无统计学意义(P>0 .0 5 )。缺血再灌注组TNF -α的表达与ICAM - 1的表达在2 4、4 8、96h时间段呈正相关(r分别为0 .76 5、0 886、0 .787,P <0 .0 5 ) ;TNF -α的表达早于ICAM - 1的表达,?