辽宁省“2013·7·16”暴雨洪水分析

受东移加强的高空槽及副热带高压共同影响,7月15日8时至17日8时,全省普降大到暴雨,局部大暴雨,发生了"2013·7·16"大暴雨并引发洪水,全省有多条河流发生洪水过程,造成不同程度的洪涝灾害。

下调HPV16 E6/E7表达宫颈癌细胞Siha上清液代谢组学

目的 基于核磁共振氢谱(1H NMR)代谢组学筛选抑制HPV16 E6/E7表达,检测宫颈癌Siha细胞中差异代谢物以及相关通路,以明确感染高危型HPV16宫颈癌发生的关键代谢标志物。方法 通过RNAi片段转染Siha细胞下调E6/E7表达,分为正常对照组(Siha细胞)、空载组(si-NON)、si-E6组与si-E7组,并验证其转染效率。利用1H NMR代谢组学技术揭示干扰Siha细胞中E6/E7表达后所涉及的差异代谢物;结合MetaboAnalyst 5.0在线软件,得到改变的差异性代谢物和相关的代谢途径。结果 荧光倒置显微镜观察细胞荧光存在;Western blotting检测结果显示,与Siha组比较,si-E6组与si-E7组中E6/E7的表达量降低(F=145.8,P<0.001);下调E6/E7表达后,检测13种共有差异代谢物,包括异亮氨酸(Isoleucine),亮氨酸(Leucine),缬氨酸(Valine);MetaboAnalyst 5.0在线软件分析结果提示,以上代谢物主要涉及氨酰-tRNA生物化学合成途径;异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸的生物化学合成途径;酪氨酸、苯丙氨酸以及色氨酸的生物化学合成等10条代谢途径。结论 HPV16感染后通过改变葡萄糖及氨基酸相关代谢促进宫颈癌的进展,为宫颈癌的防治提供理论依据。

p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值研究

目的:探讨p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值。方法:选择2021年4月至2023年2月我院收治的605例高危型HPV阳性患者为研究对象,所有患者入院后均进行阴道镜检查与病理活检,取患者细胞学样本分别进行p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测。比较两种方法单独检查与联合检测对宫颈病变阳性检出率的差异;比较三种检查方法对宫颈病变诊断效能的差异。结果:联合检测检出CIN1~3阳性率均高于p16/Ki-67双标记、HPVE6/E7mRNA检测(P<0.05);三种检测方式的浸润癌阳性检出率比较无明显差异(P>0.05)。Kappa检验分析结果显示,p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查结果与病理诊断结果具有较好的一致性(Kappa值=0.719,P<0.05);联合检测结果与病理诊断结果具有高度的一致性(Kappa值=0.894,P<0.05)。联合检测对宫颈病变的诊断灵敏度、特异性与准确率高于p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查(P<0.05)。结论:p16Ki-67双染与HPVE6/E7mRNA联合检测可准确检出宫颈病变程度,对宫颈病变疾病类型的鉴别可提供充足可靠的数据支持,联合检查的诊断效能较好,对患者后续相关治疗开展有积极指导意义。

HPV16和Krt7表达在子宫颈癌及癌前病变中的临床意义

目的:探讨人乳头瘤病毒16型(HPV16)、角蛋白7(Krt7)在子宫颈癌前病变中的临床意义。方法:选取2021年1月—2022年12月遂宁市中心医院病理科进行病理检查的宫颈癌患者的病理组织样本50例、不典型增生子宫颈上皮内瘤变(CIN)病理组织样本50例以及慢性宫颈炎病理组织样本50例,分为宫颈癌组(n=50)、CIN组(n=50)以及慢性宫颈炎组(n=50)。采用免疫组织化学法对以上三组的样本的HPV16、Krt7表达量进行检测,统计学分析三组患者的HPV16、Krt7的表达量,分析HPV16、Krt7与宫颈癌组、CIN组、慢性宫颈炎组患者病情发展的相关性。结果:宫颈癌组HPV16阳性表达率(100.00%)高于CIN组(58.00%)及慢性宫颈炎组(36.00%),三组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组Krt7阳性表达率(86.00%)高于CIN组(54.00%)及慢性宫颈炎组(22.00%),三组两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组HPV16与Krt7均阳性表达率(90.00%)高于CIN组(44.00%)及慢性宫颈炎组(2.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV16、Krt7的阳性表达可能是宫颈癌的潜在标志物,在宫颈癌病情发展过程中发挥重要作用。

人乳头瘤病毒16型E7基因靶向调控cGAS-STING信号通路抑制宫颈癌细胞免疫功能的研究

目的:探讨HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路对宫颈癌细胞免疫功能的影响。方法:体外构建HPV16 E7过表达和干扰质粒,转染至SiHa细胞,qPCR检测HPV16 E7 mRNA表达水平,流式细胞术检测CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。在此基础上分别转染cGAS-siRNA和STING-siRNA至SiHa细胞,CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。qPCR和Western blot分别检测cGAS、STING、IFN-Ⅰ、HPV16 E7的mRNA及蛋白表达。流式细胞术检测细胞CD95、MICA/B、CD73、CD39、CTLA-4和CD25表达。结果:STING-siRNA+HPV16 E7过表达组CD95和MICA/B水平降低(P<0.05),CD73、CD39、CTLA-4和CD25水平升高(P<0.05)。cGAS、STING和IFN-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05)。STINGsiRNA+HPV16 E7干扰组结果与之相反。结论:HPV16 E7靶向调控cGAS-STING信号通路进而抑制宫颈癌细胞免疫功能。

滇水金凤花蜜相关SWEET7和SWEET16的克隆及表达分析

植物SWEET(Sugars will eventually be exported transporter)基因家族是一类重要的糖转运蛋白,参与开花植物的花蜜合成。本研究以野生型和突变型滇水金凤(Impatiens uliginosa)为材料,基于课题组前期的花距转录组数据,通过筛选和RT-PCR技术克隆得到花蜜相关基因SWEET7和SWEET16,分别命名为IuSWEET7和IuSWEET16,其cDNA分别为741 bp和903 bp,分别编码246和300个氨基酸。生物信息学分析表明:IuSWEET7为疏水性不稳定蛋白,IuSWEET16为疏水性稳定蛋白,二者均含有2个典型的MtN3/saliv保守结构域;IuSWEET7和IuSWEET16基因的氨基酸序列与杜鹃花(KAG5539487.1)、一串红(XP_042052415.1)等植物同源序列的相似性均在54.15%~71.48%;系统进化分析表明,IuSWEET7和IuSWEET16处于两个不同分支。qRT-PCR分析表明两个基因在野生型和突变型滇水金凤花距的3个时期中均有表达,且在不同部位中表达模式不同。其中IuSWEET7基因在野生型滇水金凤中其表达量从花苞期至盛花期逐渐上升;在突变型2距和3距中其表达量从花苞期至盛花期先上升后下降,且在始花期表达量最高;而IuSWEET16基因在野生型和突变型3距中其表达量从花苞期至盛花期均逐渐上升,但在突变型2距中其表达量从花苞期至盛花期先上升后下降,也在始花期时达到最高。

HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗的构建及免疫效果评估

目的构建和评价HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗诱导的特异性CTL细胞应答及其对肿瘤生长的干预作用,从而揭示其作为候选HPV治疗性疫苗的潜能。方法首先通过IEDB网站中的MHC I Processing Predictions和MHC I Binding Predictions方法,分别预测人类HLA-A^(*)02:01、HLA-A^(*)11:01、HLA-A^(*)24:02和C57BL/6小鼠H-2b的限制性CTL表位,然后根据评分以及ELISPOT实验筛选出二者共同呈递的CTL表位,并将其构建成多表位DNA疫苗(pVAX1-10P)。从预防性和治疗性二个方面研究pVAX1-10P对小鼠移植TC-1异位癌的免疫干预作用,流式细胞术检测特异性CTL应答。结果获得10条可被人与鼠MHC分子共呈递的CTL表位,ELISPOT结果表明这10条CTL表位均能诱导小鼠淋巴细胞产生特异性免疫应答;由此构建的多表位DNA疫苗pVAX1-10P无论在预防性实验还是治疗性实验中,均能诱导特异性的细胞免疫并抑制肿瘤的生长。结论构建的HPV16 E6、E7多表位DNA疫苗pVAX1-10P能够诱导特异性CTL应答,显著抑制肿瘤生长,有望作为候选HPV治疗性DNA疫苗。

宫颈癌组织Survivin、HPV16E7水平与患者临床病理特征、预后及化疗敏感性的关系研究

目的:探究宫颈癌(CC)组织生存蛋白(Survivin)、人乳头瘤病毒16型E7基因片段(HPV16E7)水平与患者临床病理特征、预后及化疗敏感性的关系。方法:选取2020年7月—2022年4月联勤保障部队第九八九医院平顶山医疗区收治的118例CC化疗患者作为研究对象,检测组织Survivin、HPV16E7表达情况,并分析其与临床病理特征、总生存期(OS)、化疗敏感性的关系。结果:组织Survivin阳性表达与FIGO分期、组织分化、淋巴结转移具有密切的相关性,组织HPV16E7阳性表达与FIGO分期相关,差异均有统计学意义(χ^(2)=23.741、18.819、15.311、7.715,P<0.05)。不同分期下,OS<6个月患者组织HPV16E7阳性表达率均高于OS≥6个月患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=6.667、6.089,P<0.05)。化疗敏感患者组织Survivin、HPV16E7阳性表达率均低于化疗抵抗患者,差异均有统计学意义(χ^(2)=23.248、7.859,P<0.05)。Survivin与HPV16E7mRNA表达水平呈正相关(r=0.326,P<0.05)。结论:CC组织Survivin、HPV16E7水平与患者临床病理特征、预后及化疗敏感性具有密切的相关性。

HPV E6/E7mRNA检测与P16/Ki-67免疫组化检测对宫颈CIN2级病变的筛查价值探究

目的:研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)E6/E7mRNA与免疫组化抑癌基因P16/细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)2级病变筛查中的应用价值。方法:选取2020年2月至2023年2月期间本院收治的92例宫颈炎症及病变患者作为研究对象。根据病理检查结果,将CIN2级患者纳入研究组(n=45),宫颈CIN1级和宫颈炎患者纳入对照组(n=47)。对比两组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独及联合检测阳性表达率差异,采用Logistic回归分析影响CIN2诊断的危险因素,并采用受试者工作曲线分析HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67单独及联合检测在宫颈CIN2级病变筛查的价值。结果:研究组HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独检测阳性率、联合检测阳性率(82.22%,77.78%,84.44%)高于对照组(63.83%,48.94%,53.19%)(P<0.05)。Logistic回归分析显示HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67是影响CIN2诊断的危险因素(P<0.05);HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67联合检测CIN2级病变的受试者工作特征曲线下面积为0.688(95%CI:0.579~0.798),优于HPV E6/E7mRNA、P16/Ki-67单独预测[0.592(95%CI:0.476~0.708);0.634(95%CI:0.519~0.748)]。联合检测的准确度、灵敏度、特异度(68.8%,84.4%,53.2%)均高于单独检测HPV E6/E7mRNA(59.2%,82.2%,36.2%)、P16/Ki-67(63.4%,77.8%,48.9%)。结论:HPV E6/E7mRNA与P16/Ki-67免疫组化检测在宫颈CIN2级病变筛查中具有一定的应用价值,可以显著提高筛查宫颈CIN2级病变的诊断效能。

2013年8月16—17日本溪地区暴雨天气特征分析

利用常规天气资料以及常规观测数据,从环流形势、影响系统、中尺度天气和物理量场等方面,对2013年8月16—17日本溪地区发生的一次暴雨天气过程的发生机制、过程特征进行了初步诊断分析。结果表明,环流形势中高层在中纬度以西风带急流以及急流上的短波槽和副热带高压相结合为主,副高西伸稳定维持并形成闭合环流,东部日本海上副高形成阻塞形势,有利于槽前暖湿气流东北上和降水时间延长,副高与西风带急流之间形成较强的能量锋区,斜压扰动作用下转化为动能,激发为强烈的上升运动,从而产生暴雨天气。中尺度分析中可以得出,前期500 h Pa一直有一干冷区域维持在降水区上游,伴随着急流轴的方向带来强大的干冷空气;850 h Pa大范围的显著湿区以及准饱和区,配合受热带系统而形成的暖脊,为降水区提供了深厚的暖湿条件。在今后的预报中,应在大尺度分析的基础上加强中尺度系统的分析和订正,对本地区的暴雨预报有很好的指示意义。

HPV16 DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)DNA阳性乳腺良、恶性病变组织中E6和E7蛋白的表达情况。方法:以经PCR筛选证实的HPV16DNA阳性的56例乳癌和41例乳腺良性病变组织为研究对象,采用Westernblotting方法检测HPV16E6和E7蛋白。结果:56例HPV16DNA阳性乳癌组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为67.9%(38/56)、75.0%(42/56)和57.1%(32/56);41例HPV16DNA阳性乳腺良性病变组织中,HPV16E6、E7和E6/E7共表达阳性率分别为36.6%(15/41)、43.9%(18/41)和24.4%(10/41)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率均高于乳腺良性病变组织(χ2分别为9.34,9.70,10.34,P均<0.01)。HPV16DNA阳性乳癌组织中E6、E7和E6/E7共表达阳性率与患者年龄和肿瘤组织学类型无关(P均>0.05),但与淋巴结转移有关(χ2分别为3.88,15.86,9.34,P均<0.05)。结论:HPV16E6和E7蛋白在乳癌发生发展中具有重要作用,并与乳癌淋巴结转移有关。

纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响

目的：探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响。方法：采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度（6.25,12.5,25,50 mg.L^-1）的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间（12,24,48,72 h）,光镜和透射电镜观察实验组（不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组）和对照组（不加药物的细胞）细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达。结果：纳米雄黄混悬液25~50 mg.L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系。电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0.01）,且细胞呈G0-G1期阻滞。RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制。结论：纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关。

LRP16通过调控E-钙黏着蛋白的表达促进MCF-7细胞的侵袭生长

LRP16在原代乳腺癌组织中表达水平与雌激素受体α(ERα)表达状态以及腋窝淋巴结侵袭数目密切相关.为研究LRP16基因对乳腺癌MCF7细胞侵袭生长的影响,并探讨涉及的分子机制,采用基质胶黏附实验与Transwell方法,检测内源性LRP16表达抑制MCF7细胞的体外黏附、侵袭生长与迁移特征.结果表明,抑制LRP16在MCF7细胞中的表达,降低了细胞的体外黏附、侵袭与迁移能力;采用FVB小鼠进行的实验性转移试验结果显示,抑制LRP16显著降低了MCF7细胞的肺转移结节数目;为探索可能的分子机制,采用Western印迹方法,检测了LRP16对乳腺癌转移相关分子MMP2,MMP9,CD44和E钙黏着蛋白表达的影响,结果在LRP16抑制的MCF7细胞中只有E钙黏着蛋白蛋白表达上调.进一步的Northern印迹与免疫组化实验结果表明,抑制LRP16可上调MCF7细胞中E钙黏着蛋白基因的mRNA与蛋白表达水平;共转染与双荧光素酶方法检测LRP16对E钙黏着蛋白基因启动子的表达调控效应,结果显示,LRP16抑制E钙黏着蛋白基因基因5′近端启动子的转录激活,该抑制效应选择性存在于内源性ERα阳性细胞,并且依赖于雌激素的存在;染色质免疫共沉淀方法(ChIP)检测ERα与E钙黏着蛋白基因启动子的相互作用,结果显示,在LRP16基因表达缺陷的MCF7细胞中,ERα抗体沉淀到E钙黏着蛋白基因启动子的DNA序列;上述研究结果表明,抑制LRP16基因表达,削弱了激素依赖型乳腺癌细胞的侵袭生长能力,其分子机制涉及了LRP16通过ERα介导对E钙黏着蛋白基因基因转录激活的调控.

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中Rb和P16蛋白的表达及意义。方法:以经PCR筛选证实的HPV16 DNA阳性的56例乳癌组织(经Western blotting证实42例HPV16E7+,14例E7-)为研究对象,采用Western blotting方法检测癌组织中Rb和P16蛋白的表达。结果:HPV16E7+、HPV16E7-乳癌组织中,Rb蛋白阳性率分别为9.5%(4/42)、50.0%(7/14),P16蛋白阳性率分别为85.7%(36/42)、21.4%(3/14),HPV16E+和E7-乳癌组织中P16和Rb蛋白阳性率差异均有统计学意义(χ2=20.525,10.898,P均<0.001)。HPV16E7+乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达有关(rp=0.792,P=0.003);HPV16E7-乳癌组织中,Rb和P16蛋白表达无关(P=0.182)。结论:HPV16E7可通过降解Rb,促进P16蛋白表达,从而在乳癌发生发展中发挥作用。

人乳头瘤病毒16型E6和E7基因及其突变体转化活性的研究

为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转染和共转染HPV16野生型E6和E7基因的Balb/c3T3细胞系 ,在软琼脂中呈集落样生长 ,并在裸鼠体内成瘤 ;而转染E6基因突变体mE6 (5 0G)、E7基因的两种突变体mE7- 1(2 4G2 6G)和mE7- 3(2 4G2 6G6 7R)以及共转染mE6和mE7- 1的Balb/c3T3细胞 ,在软琼脂培养中极少形成集落 ,也不能在裸鼠体内成瘤。提示经结构改造后的HPV16E6和E7基因已失去了对Balb/c3T3细胞的转化活性 ,而保留了免疫原性 ,可用于HPV16相关肿瘤治疗性疫苗的构建。

HPV-16E7、Rb、p16蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其意义

目的：探讨HPV-16E7、Rb、p16蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其相互关系。方法：利用过氧化酶标记的链霉卵白素（SP）染色法，检测58例宫颈鳞状细胞癌中的HPV-16E7、Rb、p16蛋白表达。结果：在58例宫颈鳞状细胞癌中，HPV－16E7、Rb和p16阳性表达率分别为879％（51／58）、34．5％（20／58）和81．0％（47／58）。在50例Rb蛋白阴性和弱阳性表达的宫颈鳞状细胞癌组织中，HPV－16E7和p16为过度表达，Rb与HPV－16E7、p16呈相关关系（P＜0.01）；HPV－16E7与p16呈正相关关系（P＜0，05）。Rb、p16表达与临床分期有关，Rb阳性表达随着临的升高而减弱，p16阳性表达随临床分期升高而增强。结论：宫颈鳞状细胞癌的发生与Rb阴性和弱表达，p16、HPV－16E7过度表达有关；检测Rb、p16、HPV-16E7表达水平，对于宫颈鳞状细胞癌的临床早期诊断具有一定的参考价值。

人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白基因在沙门氏菌疫苗菌株X4072中的表达

采用ＰＣＲ方法，从ＨＰＶ１６型质粒中分离出ＨＰＶ１６Ｅ７基因片段，用ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ双酶解后，定向插入到表达质粒ｐＹＡ３３３２（ａｓｄ＋）的Ｐｔｒｃ启动子下游，构建成ｐＹＡ３３３２－ＨＰＶ１６－Ｅ７重组表达质粒。在大肠杆菌Ｘ６２１２上筛选出重组质粒后，通过中间菌株Ｘ３７３０的转化过渡，将重组质粒导入鼠伤寒沙门氏减毒疫苗菌株Ｘ４０７２（ａｓｄ－），构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的ＨＰＶ１６型重组疫苗。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ染色和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法分析证实。

HPV16 E7蛋白阳性和阴性乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7蛋白阳性(E7+)和阴性(E7-)乳癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白表达的变化。方法:56例乳癌组织经PCR筛选证实HPV16 DNA阳性,其中42例HPV16 E7+,14例E7-。采用Western blotting方法检测癌组织中细胞周期调控相关基因蛋白CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27的表达。结果:42例HPV16E7+乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为97.6%(41/42)、76.2%(32/42)、92.9%(39/42)、9.5%(4/42)和40.5%(17/42);14例HPV16E7-乳癌组织中,CyclinA、CyclinD、CyclinE、P21和P27蛋白阳性率分别为64.3%(9/14)、78.6%(11/14)、57.1%(8/14)、50.0%(7/14)和42.9%(6/14)。与HPV16E7-乳癌组织相比,HPV16E7+乳癌组织中CyclinA和CyclinE蛋白表达均上调(χ2分别为12.196,9.929,P均<0.01),P21表达下调(χ2=10.898,P<0.01),而CyclinD和P27的表达均无明显变化(χ2分别为0.033,0.025,P均>0.05)。结论:HPV16E7可通过统计量上调CyclinA和CyclinE表达以及下调P21表达而在乳癌发生发展中发挥重要作用。

HPV16型-E6、E7在食管鳞癌组织与非癌组织中的表达

背景与目的:越来越多的证据表明高危型人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV),特别是HPV16型与多种肿瘤发生、发展密切相关。本研究旨在分析人乳头状瘤病毒HPV16型E6、E7在食管正常组织、不典型增生组织和癌组织中的表达,以探讨HPV16型在食管鳞癌发生、发展中的生物学意义。方法:采用PicTureTM免疫组织化学方法对70例食管癌切除标本上、下切缘的正常粘膜上皮组织、43例不典型增生组织以及18例癌组织中的HPV16型E6、E7蛋白表达情况进行研究。结果:E6蛋白阳性率在正常食管粘膜上皮组织中为59.3%,在上皮不典型增生组织中为88.4%,在癌组织中为83.3%;E7蛋白在上述3种组织中的阳性率分别为62.1%、90.7%和88.9%。与正常食管粘膜上皮相比,上皮不典型增生组织和癌组织中E6、E7蛋白表达均有显著性差异(P<0.05)。HPV16型E6、E7蛋白在正常食管粘膜组织中同时表达即同步率为25.7%,而在上皮不典型增生组织和癌组织中二者同步率分别为88.3%和83.3%。结论:HPV16型E6、E7蛋白与食管鳞癌发生、发展密切相关,二者协同作用可能是食管鳞癌发生、发展的重要因素之一。

人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用

背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPV16)的早期基因E6、E7可分别诱导p53的泛素化降解和pRb的高磷酸化失活,与宫颈癌的发生发展关系密切。本研究通过真核表达载体介导HPV16型E6、E7基因反义RNA在SiHa细胞中的表达,探讨反义RNA能否降低E6、E7基因的表达和诱导细胞凋亡。方法:利用pEGFP构建HPV16型E6、E7基因反义RNA的真核表达载体并转染SiHa细胞,利用RT-PCR和Westernblot技术检测转染后E6、E7基因的mRNA和蛋白的变化,利用MTT法检测SiHa细胞转染后细胞增殖活性,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测转染后细胞的凋亡情况。结果:转染携带HPV16型E6、E7反义基因的质粒后,SiHa细胞的E6、E7基因的mRNA和蛋白表达均明显下调;MTT结果显示转染后细胞的增殖活性(0.50±0.05)与转染空载体细胞(1.01±0.06)和未转染细胞(1.28±0.06)比较明显降低(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示转染后细胞凋亡率(59.3±11.3)%与转染空载体细胞(9.4±1.8)%和未转染细胞(2.1±0.4)%比较有显著性差异(P<0.05)。激光共聚焦显微镜结果示转染后细胞凋亡明显增多。结论:HPV16型E6、E7基因反义RNA可降低宫颈癌细胞中E6、E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡。