2014年“524”、“530”盈江地震中地形及土层条件对房屋震害影响分析

在历次地震中,地形、地貌及场地条件复杂的山区容易出现房屋建筑震害异常情况。分析震害异常的原因,对于进行建筑抗震设防以减少地震灾害损失具有重要意义。本文主要对2014年盈江524、530两次地震后Ⅷ度区的卡场镇麻竹岭岗房屋破坏及场地条件情况进行调查,根据麻竹岭岗的地形条件由高到低分为3个区,对3个区内的建筑破坏情况进行分析比较,表明震害程度呈现出明显的从山底至山顶逐渐加大的趋势,揭示出显著的山体影响作用。重点对山顶的穿斗木结构破坏情况进行了分析,找出了造成建筑结构破坏的几个不利因素,包括山丘地形顶部放大效应、覆盖土层放大效应以及多次地震震害累积效应。

miR-524-5p调控HEG1表达对食管癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨miR-524-5p调控HEG1表达对食管癌细胞增殖、上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法qRT-PCR检测食管癌细胞和正常食管上皮细胞中miR-524-5p和HEG1mRNA表达水平。将KYSE30细胞分为miR-524-5pmimic组、miR-524-5pNC组、miR-524-5p mimic+pcDNA3.1组和miR-524-5p mimic+pc DNA3.1-HEG1组,另设置不转染的细胞为正常对照组(Control组)。CCK-8法检测KYSE30细胞增殖能力;Westernblot检测EMT相关蛋白、侵袭迁移相关蛋白和HEG1蛋白表达,划痕实验和Transwell实验检测KYSE30细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测miR-524-5p和HEG1靶向关系。结果miR-524-5p在四种食管癌细胞系TE-1、KYSE30、KYSE150、NEC中均低表达(P<0.05),选择表达水平最低的KYSE30细胞作为后续实验细胞。HEG1 mRNA在四种食管癌细胞中均高表达(P<0.05),并且GEPIA数据库显示HEG1在食管癌组织中高表达(P<0.05)。与miR-524-5pNC组相比,miR-524-5pmimic组KYSE30细胞增殖能力、克隆形成数、间质标志蛋白水平、迁移和侵袭能力显著降低,上皮标志蛋白E-cadherin水平显著上调(P<0.05);miR-524-5p mimic+pc DNA3.1-HEG1组可以明显逆转过表达mi R-524-5p对于KYSE30细胞增殖和上皮间质转化、侵袭转移的抑制作用(P<0.05)。miR-524-5pmimic组与WT-HEG1共转染组细胞荧光素酶活性显著低于miR-524-5p NC组与WT-HEG1共转染组(P<0.05)。结论miR-524-5p在食管癌细胞和组织中低表达,过表达miR-524-5p可以负向调节HEG1在食管癌细胞系KYSE30细胞中的表达,抑制KYSE30细胞的增殖、EMT进程和侵袭迁移能力。

lncRNA FGD5-AS1靶向miR-524-5p调控前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨lncRNA FGD5-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法培养正常人前列腺上皮细胞P69及前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3;qRT-PCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的表达水平;将LNCaP细胞分为si-lncRNA FGD5-AS1组、si-NC组、miR-524-5p组、miR-NC组、anti-miR-524-5p+si-lncRNA FGD5-AS1组、anti-miR-NC+si-lncRNA FGD5-AS1组;CCK-8检测细胞活性;克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-524-5p的靶向关系。结果与正常人前列腺上皮细胞P69相比,前列腺癌细胞系LNCaP、DU145、PC-3中lncRNA FGD5-AS1表达水平升高,miR-524-5p表达水平降低(P<0.05)。干扰lncRNA FGD5-AS1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活性降低,细胞克隆数、迁移和侵袭数量减少(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-524-5p;抑制miR-524-5p表达逆转了干扰lncRNA FGD5-AS1对前列腺癌细胞LNCaP增殖、迁移和侵袭的影响。结论干扰lncRNA FGD5-AS1表达通过靶向上调miR-524-5p抑制前列腺癌细胞LNCaP的增殖、迁移和侵袭。

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。

miR-524-5p靶向FABP5调控非小细胞肺癌增殖、凋亡的机制研究

目的探讨非编码小RNA-524-5p(miR-524-5p)是否通过靶向调控脂肪酸结合蛋白5(FABP5)从而影响非小细胞肺癌的增殖和凋亡。方法实时定量PCR(qPCR)检测非小细胞肺癌细胞(A549、H1299、H1650)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中miR-524-5p和FABP5表达,选择miR-524-5p表达量最低的细胞系用于后续实验;运用生物学信息预测miR-524-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进行验证;蛋白质印迹法(Western Blot)检测上调或下调miR-524-5p对FABP5的影响,以及A549细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bax蛋白水平;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡。结果与正常肺上皮细胞相比,miR-524-5p在非小细胞肺癌细胞系中表达下调(P<0.05),FABP5 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。miR-524-5p在A549细胞中的表达量最低。FABP5是miR-524-5p的靶基因。miR-524-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平,提升p21、Bax蛋白水平,差异均达到显著水平(P<0.05),与抑制FABP5表达(si-FABP5)作用结果相同。FABP5过表达可以逆转miR-524-5p过表达对细胞增殖的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论miR-524-5p能够抑制非小细胞肺癌增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向调控FABP5表达有关。

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p(miR-524-5p)表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05),p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高(P<0.05),且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义(P<0.05);miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。

lncRNA TUG1通过miR-524-5p/BRAF轴调节甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的增殖、凋亡和EMT进程

目的:lncRNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞(TPC-1)增殖、凋亡和EMT进程的影响及作用机制。方法:qPCR检测人PTC组织(2019年5月至2021年4月期间在河北省唐山市工人医院手术切除的35例PTC组织及对应癌旁组织标本)与人PTC细胞TPC-1、BHP10-3、K1、SW-1736及人正常甲状腺上皮Nthyori 3-1细胞中lncRNA TUG1的表达。体外培养TPC-1细胞,将其分为对照组、si-NC组、si-TUG1组、miR-NC组、miR-524-5p mimic组、si-TUG1+NC inhibitor组、si-TUG1+miR-524-5p inhibitor组、miR-524-5p mimic+pcDNA组、miR-524-5p mimic+pcDNABRAF组,对细胞进行si-TUG1、miR-524-5 pmimic、miR-524-5p inhibitor、pcDNA BRAF和各自相应的对照质粒转染,采用CCK-8法、FCM法分别检测TPC-1细胞增殖、凋亡情况;WB法检测TPC-1细胞中BRAF、PCNA、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-524-5p与lncRNA TUG1、BRAF的靶向关系。结果:lncRNA TUG1在PTC组织及细胞中呈高表达(均P<0.05);敲减lncRNA TUG1表达或上调miR-524-5p表达可显著抑制TPC-1细胞增殖及EMT,促进细胞凋亡(均P<0.05);双荧光素酶报告基因实验显示,lncRNA TUG1与BRAF、miR-524-5p之间存在靶向关系;抑制miR-524-5p表达可逆转敲减lncRNA TUG1表达对TPC-1细胞的增殖、EMT进程的抑制及对其凋亡的促进作用(均P<0.05),上调BRAF表达可逆转过表达miR-524-5p对TPC-1细胞增殖、EMT的抑制及对其凋亡的促进作用(均P<0.05)。结论:lncRNA TUG1在PTC组织与TPC-1细胞中呈高表达,敲减lncRNA TUG1表达可通过miR-524-5p/BRAF轴抑制PTC细胞的增殖与EMT进程,并促进TPC-1细胞凋亡。

杂交稻特优524的丰产性稳定性适应性分析

利用 1994和 1995两年广东省杂交稻区域性试验资料以及 1995和 1996两年全国籼型杂交晚稻区域性试验资料 ,通过t检验、变异系数和回归系数分别对特优 5 2 4和对照种 (汕优 6 3、汕优桂 33)的丰产性、稳定性和适应性进行分析和比较 ,结果表明 :特优 5 2 4的丰产性、适应性均明显地优于对照种 ,而稳定性则次于汕优 6 3,但好于汕优桂 33,是一个较为理想的迟熟高产杂交稻新组合。

利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其作用机制。方法:使用1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L浓度利多卡因处理MG-63细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达,qRT-PCR检测长链非编码RNA TTN-AS1(TTN-AS1)和微小RNA-524-5p(miR-524-5p)表达,starBase软件结合双荧光素酶报告实验分析TTN-AS1与miR-524-5p的靶向关系。MG-63细胞中转染si-TTN-AS1、miR-524-5p或pcDNA-TTN-AS1(并进行10 mmol/L利多卡因处理),观察细胞的增殖、迁移、侵袭。结果:不同浓度利多卡因明显提高细胞增殖抑制率和p21蛋白表达量(P<0.05),显著减少迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量(P<0.05),均呈剂量依赖性。TTN-AS1可靶向调控miR-524-5p表达。抑制TTN-AS1表达与miR-524-5p过表达显著增加MG-63细胞的增殖抑制率和p21蛋白表达量(P<0.05),明显降低迁移细胞数、侵袭细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量(P<0.05)。TTN-AS1过表达逆转了利多卡因对MG-63细胞增殖、迁移、侵袭和CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的抑制作用,以及对miR-524-5p、p21蛋白表达的促进作用。结论:利多卡因通过调控lncRNA TTN-AS1/miR-524-5p表达抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA MCM3AP-AS1靶向miR-524-5p在CIK细胞诱导肺癌细胞A549凋亡中作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA微小染色体维系蛋白3结合蛋白反义1(lncRNA MCM3APAS1)参与细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞杀伤肺癌细胞过程中的调控作用,并确定MCM3AP-AS1的发挥功能的靶基因和分子机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定CIK细胞对A549细胞的杀伤效应。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测与CIK细胞共培养前后A549细胞中MCM3AP-AS1和miR-524-5p的表达水平。流式细胞术检测CIK细胞共培养前后A549细胞凋亡情况。将MCM3AP-AS1过表达载体、miR-524-5p抑制物、pcDNA-MCM3AP-AS1+miR-524-5p分别转染A549细胞,与CIK细胞共培养后,流式细胞术检测A549细胞凋亡变化。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证MCM3AP-AS1对miR-524-5p的靶向作用。结果 CIK细胞大体以时间、浓度依赖性方式杀伤肺癌细胞,选择效靶比20∶1作用12 h进行后续研究。与CIK细胞共培养后,A549细胞MCM3AP-AS1的表达显著降低,miR-524-5p的表达显著升高,A549细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。过表达MCM3AP-AS1或干扰miR-524-5p表达后,CIK细胞对A549细胞的凋亡促进作用显著降低(P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负性调控miR-524-5p表达。过表达miR-524-5p可以逆转过表达MCM3AP-AS1对CIK细胞诱导的A549细胞凋亡的影响(P<0.05)。结论 CIK细胞通过调控MCM3AP-AS1/miR-524-5p通路促进肺癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗肺癌提供新的依据。

miR-524-5p调控FOXD3对甲状腺癌细胞增殖凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨微小RNA-524-5p(miR-524-5p)调控叉头框D3蛋白(FOXD3)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法人甲状腺癌细胞SW579,分为空白对照组(不转染)、mimic NC组(转染negative control-miR-524-5p)、miR-524-5p mimic组(转染hsa-miR-524-5p mimic)、siRNA NC组(同时转染hsa-miR-524-5p mimic和NC-siRNA)、共转染组(同时转染hsa-miR-524-5p mimic和FOXD3 siRNA),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-524-5p、FOXD3 mRNA表达;CCK-8法、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡;Transwell法、划痕试验检测细胞侵袭、迁移能力;蛋白印迹(WB)法检测各组SW579细胞中FOXD3及EMT相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤连蛋白(Fibronectin)蛋白表达情况。结果与mimic NC组相比,miR-524-5p mimic组SW579细胞中miR-524-5p表达水平、细胞凋亡率、FOXD3 mRNA和蛋白表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞OD值、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与siRNA NC组相比,共转染组SW579细胞中miR-524-5p表达水平差异无统计学意义(P>0.05),细胞OD值、侵袭细胞数、细胞迁移率、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、FOXD3 mRNA和蛋白表达水平、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P>0.05)。结论miR-524-5p可能通过调控FOXD3表达水平升高,进而抑制SW579细胞增殖、侵袭、迁移及EMT过程,并诱导癌细胞凋亡。

混合共同担保人相互求偿的证成与理论构造

担保人之间能否相互求偿的争议可追溯至罗马法,最终分担请求权的确立为肯定论奠定了根基。在释义学层面,当债务人无清偿能力且担保人之间没有明确约定是否能够相互求偿时,混合共同担保人可以通过类推适用《民法典》第524条实现相互求偿。虽然《民法典》第524条的本意在于规制第三人代为清偿,但实际上却为求偿权补足了代位权,使担保人能够获得附属于债权上的担保权利。物上担保人与保证人作为具有合法利益的第三人,因清偿取得清偿代位权,承受债权人对债务人的权利,包括附随于债权上的担保权利,并以新的债权人的名义向其他担保人在应分担的责任额度内主张求偿。该路径可扩展适用于包括共同保证、共同抵押在内的所有共同担保的类型。

破裂脑动脉瘤早期手术中预防血管痉挛的综合措施

早期手术治疗破裂脑动脉瘤６１例中，颈内动脉瘤２３例，前交通动脉瘤２３例，大脑前动脉瘤２例，大脑中动脉瘤１３例。出血后３天内手术者３８例，４～６天内手术２３例。术后发生症状性血管痉挛者必例，死亡６例。术中采取清除脑池内血块，罂粟碱冲洗脑池同时行腰部蛛网膜下腔引流，静脉投用胰岛素－葡萄糖－氯化钾溶液以及去骨瓣减压等，对于防止脑动脉瘤破裂后血管痉挛有效。

非杓型高血压对左心室肥厚的影响及其临床意义

目的：以杓型高血压患者为对照，探讨非杓型高血压在左心室肥厚发生和发展中的作用。方法：应用２４小时动态血压和超声心动图检测２３０例高血压患者，选择年龄、病程、昼间血压基本相同的杓型、非杓型高血压患者１５０例，其中男性各４５例，女性各３０例。结果：非杓型高血压患者舒张末期左心房内径显著大于杓型高血压患者，男性分别为３５．８±２．９ｍｍ与３１．２±２．７ｍｍ（Ｐ＜０．０１）；女性分别为３２．４±２．５ｍｍ与２９．４±１．８ｍｍ（Ｐ＜０．０５）。女性杓型、非杓型高血压患者间舒张末期左心室内径的差异（４９．５±３．２ｍｍ与５４．８±３．７ｍｍ，Ｐ＜０．０１）比男性（５３．８±４．６ｍｍ与５７．４±４．５ｍｍ，Ｐ＜０．０５）更为显著。非杓型高血压患者左心室重量指数显著大于杓型高血压患者，男性分别为１５８．０±７．９ｇ／ｍ２与１３０．０±６．７ｇ／ｍ２（Ｐ＜０．０１）；女性分别为１３８．０±５．６ｇ／ｍ２与１１５．０±４．７ｇ／ｍ２（Ｐ＜０．０１）。结论：非杓型高血压患者左心室肥厚的检出率比杓型高血压患者为高。

长链非编码RNA LINC-PINT通过靶向miR-524-5p调控骨肉瘤细胞增殖凋亡的分子机制

目的:探讨长链非编码RNA LINC-PINT对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响机制。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常成骨细胞hFOB和人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC-PINT和miR-524-5p的表达。应用脂质体法转染至pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC-PINT组(转染pcDNA-LINC-PINT)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC-PINT组(转染si-LINC-PINT)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-524-5p组(转染miR-524-5p mimics)、pcDNA-LINC-PINT+miR-NC组(共转染pcDNA-LINC-PINT和miR-NC)和pcDNA-LINC-PINT+miR-524-5p组(共转染pcDNA-LINC-PINT和miR-524-5p)HOS细胞,Western blot检测细胞中PCNA和cleaved-caspase-3蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:人骨肉瘤细胞HOS、MG63和SAOS2中LINC-PINT的表达水平分别为0.18±0.01、0.33±0.01和0.42±0.01,miR-524-5p的表达水平分别为2.65±0.23、1.68±0.14和1.51±0.13,与正常成骨细胞hFOB(分别为1.00±0.08和1.00±0.06)比较,差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养48、72 h时,pcDNA-LINC-PINT组HOS细胞的吸光度( A)值分别为0.41±0.05和0.57±0.05,pcDNA组细胞的 A值分别为0.62±0.05和1.06±0.09,差异均有统计学意义(均 P<0.01)。pcDNA-LINC-PINT组和pcDNA组细胞的凋亡率分别为(25.28±2.15)%和(9.01±0.17)%,差异有统计学意义( P<0.01)。与miR-NC组(1.00±0.03)比较,miR-524-5p组WT-LINC-PINT细胞的荧光活性(0.31±0.03)降低,差异有统计学意义(均 P<0.01)。过表达miR-524-5p可逆转LINC-PINT对HOS细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。 结论:长链非编码RNA LINC-PINT可抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进凋亡,其作用机制与靶向miR-524-5p有关,可为骨肉瘤的治疗提供新的作用靶点。

微RNA-524-5p通过靶向抑制SOX9基因表达增加胃癌细胞的顺铂敏感性

目的:探讨微RNA-524-5p(microRNA-524-5p,miR-524-5p)介导顺铂治疗胃癌的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织、癌旁组织以及顺铂耐药和亲本胃癌细胞系中miR-524-5p的表达水平。顺铂耐药性胃癌SGC-7901和MKN-45细胞经miR-524-5p模拟物或对照RNA转染后,采用CCK-8法检测细胞活力。采用荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法鉴定miR-524-5p靶向蛋白SOX9(SRY-related high mobility group-box 9)的表达情况。采用'拯救'实验检测SOX9过表达后miR-524-5p诱导胃癌细胞对顺铂的耐药性变化。结果:与正常胃上皮黏膜细胞GES1相比,胃癌细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p水平明显下调(P值均<0.05);与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-524-5p水平明显下调(P <0.05)。与敏感性亲代细胞相比,顺铂处理后的胃癌耐药细胞SGC-7901和MKN-45中miR-524-5p表达水平均降低(P值均<0.05)。miR-524-5p模拟物转染后,顺铂耐药性胃癌细胞SGC-7901和MKN-45的化疗敏感性均明显增强(P值均<0.05)。SOX9是miR-524-5p的功能靶蛋白;SOX9过表达可以抵消miR-524-5p的化疗增敏作用,即与单独miR-524-5p模拟物转染组相比,SOX9过表达质粒+miR-524-5p模拟物转染后的胃癌细胞SGC-7901和MKN-45对顺铂的敏感性均明显降低(P值均<0.05)。结论:miR-524-5p影响人胃癌细胞对顺铂作用的敏感性,提示其可能成为治疗化疗耐药性胃癌患者的新靶点。

产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达

【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。

河南卫辉市大司马村隋唐乞扶令和夫妇墓

2006年,在卫辉市大司马墓地发掘了隋唐时期的乞扶令和夫妇合葬墓。此墓为带长斜坡墓道的单室土洞墓,由墓道、小龛、过洞、天井、封门墙、石门、甬道及墓室等部分构成。出土的陶俑及其他各类遗物具有隋代早期特征。由墓志铭文可知,墓主乞扶令和死于隋大业六年,唐贞观元年与夫人郁久闾氏合葬。