“Amano”β-糖苷酶水解大豆异黄酮技术的研究

研究了"Amano"β-糖苷酶水解大豆异黄酮技术工艺。通过单因素试验对水解过程中的不同影响因素进行了考察。运用正交试验优化了"Amano"β-糖苷酶水解大豆异黄酮的反应条件。该酶水解黄豆苷的最佳条件为:水解时间140min,加酶液浓度33μg/ml,pH4.5,温度50℃;水解染料木苷的最佳条件为:水解时间140min,加酶液浓度33μg/ml,pH4.5,温度60℃。验证实验证实用最佳反应条件水解大豆异黄酮可使黄豆苷的水解率达到98.2%,染料木苷的水解率达到94.2%。

N-聚糖合成通路中内质网α-1,2甘露糖苷酶和α-甘露糖苷酶Ⅱ基因对家蚕胚胎滞育的调控作用

家蚕滞育是基因与环境协同作用的结果,其调控网络十分复杂,至今仍未完全阐明。为了解家蚕N-聚糖生物合成通路是否参与胚胎滞育调控,调查家蚕不同化性品系蛹期、胚胎发育早期以及滞育激素(DH)、蜕皮激素(20E)处理后BmN细胞中内质网α-1,2甘露糖苷酶基因(BmMAN1B)和α-甘露糖苷酶Ⅱ基因(BmMAN2)的转录水平。qRT-PCR结果显示:这2个基因在不同化性品系中的转录水平存在较大差异,蛹晚期的转录水平高于早期;分别用100 nmol/L DH和10 ng/mL 20E处理BmN细胞,BmMAN1B和BmMAN2的转录水平都极显著上调,提示2个基因与家蚕滞育密切相关。对BmN细胞和家蚕二化性品系秋丰165℃催青产非滞育卵组(QFLT)蛹期2 d雌蛹进行BmMAN1B和BmMAN2基因的RNA干扰,结果发现滞育相关基因BmDH、BmDHR-1、BmTRE2和BmSDH-2a等的转录水平发生了变化;当在个体水平进行BmMAN1B和BmMAN2基因的共同干扰时,382%的子代卵由非滞育转变为滞育。结果表明,BmMAN1B和BmMAN2在家蚕胚胎滞育中具有重要的调控作用。

不同提取方法对沙棘叶茶活性成分含量、抗氧化能力及α-糖苷酶抑制活性的影响

该文分别以水和60%乙醇为提取溶剂,在55、75℃和95℃下对沙棘叶茶整叶和沙棘叶茶粉进行提取,比较提取物中总黄酮、可溶性总多酚、异鼠李素含量及抗氧化能力和α-糖苷酶抑制能力。结果表明,提取溶剂为60%乙醇、提取温度为95℃时,沙棘叶茶粉提取物中的活性成分含量最高,总黄酮、可溶性总多酚、异鼠李素含量分别为(82.59±1.80)、(117.02±1.93)、(1.592±0.074)mg/g,清除DPPH自由基、羟基自由基和亚硝酸根的能力最强,其EC_(50)值分别为(0.1419±0.0006)、(0.3571±0.0048)、(0.8156±0.0013)mg/g,还原力最高为(118.65±2.40)mg/g,α-糖苷酶抑制能力最强,IC50值为(0.3930±0.0101)mg/g。通过主成分分析,该提取物的样品评分最高。

臭常山内生真菌次级代谢产物及其α-糖苷酶抑制活性研究

目的 鉴定臭常山内生真菌G-(JK)-2,并对次级代谢产物及其α-糖苷酶抑制活性进行研究。方法 通过ITS序列建立系统进化树,鉴定内生真菌G-(JK)-2;对其45 d大米固体培养基发酵物进行甲醇提取、乙酸乙酯萃取,硅胶、Sephadex LH-20凝胶和半制备HPLC分离纯化后进行结构鉴定,采用PNPG法评价α-糖苷酶抑制活性。结果 鉴定臭常山内生真菌G-(JK)-2为镰刀属内生真菌Fusarium nematophilum;分离得到13个化合物,分别鉴定为p-hydroxybenzaldehyde(G1)、4-hydroxyacetophenone(G2)、anhydromevalonolactone(G3)、flazine(G4)、salicylic acid(G5)、p-hydroxybenzoic acid(G6)、di-(2-ethylhexyl)-phthalate(G7)、terephthalic acid bis(2-ethyl-hexyl)ester(G8)、thymine(G9)、uridine(G10)、adenosine(G11)、2′-deoxyuridine(G12)、nicotinic acid(G13)。各化合物对α-葡萄糖苷酶抑制作用依次为G4>G11>G10>G13>G12。结论 所有化合物均首次从臭常山的内生真菌中分离得到,G10、G11、G13首次从镰刀属内生真菌中分离得到,G4和G11有较弱的α-葡萄糖苷酶抑制作用。

不育症患者精液中性α-葡糖苷酶、缺氧诱导因子-1α水平检测及临床意义

目的探究不育症患者精液中性α-葡糖苷酶(NAG)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的水平及其临床意义。方法选取2022年4月至2023年4月金华市人民医院收治的200例不育症患者作为研究对象,设为研究组,并依据精液参数分为四个亚组。选择同期体检且有生育史的100例健康男性设为对照组。检测各组性激素、精液NAG、HIF-1α水平,采用Pearson相关性分析精液NAG、HIF-1α与精液参数、性激素的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析精液NAG、HIF-1α对不育症的诊断效能。结果研究组精液NAG水平显著低于对照组,HIF-1α水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。少精子组、少弱精子组精液NAG、血清睾酮(T)水平均显著低于正常组、弱精子组,且弱精子组低于正常组(P<0.05);少精子组、少弱精子组精液HIF-1α、血清卵泡刺激素(FSH)水平均显著高于正常组、弱精子组,且弱精子组高于正常组(P<0.05)。研究组精液NAG与HIF-1α、血清FSH水平呈负相关(P<0.05),与精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、T水平呈正相关(P<0.05);精液HIF-1α与PR、血清T水平呈负相关(P<0.05)。精液NAG、HIF-1α诊断不育症的曲线下面积分别为0.885、0.807,两者联合检测为0.927。结论不育症患者精液NAG低表达,HIF-1α高表达,与相关精液参数、性激素存在一定的相关性,精液NAG、HIF-1α及联合检测诊断不育症有较好的临床价值。

α-糖苷酶抑制剂致膝关节疼痛1例

1病例介绍患者,男,63岁。2021年因其他疾病在外院住院,检查发现血糖升高,诊断为“2型糖尿病”,开始给予二甲双胍片0.25 g,tid,po,阿卡波糖片50 mg,tid,po。服用约半天后,患者自诉双侧膝关节疼痛,不能耐受,遂停药,数小时后症状好转。出院后患者未再使用降糖药物。2022年1月22日,患者因“胆囊结石伴慢性胆囊炎”收入普通外科,因血糖偏高,再次口服二甲双胍片0.25 g,tid,阿卡波糖片50 mg,tid,服用1 d后,患者自诉双侧膝关节疼痛。2022年1月24日停用二甲双胍片、阿卡波糖片,出院后患者未再使用降糖药物。

糖脂清提取物对淀粉水解中α-糖苷酶抑制作用研究

[目的]针对淀粉水解的各个步骤,研究糖脂清提取物(TZQ)对参与淀粉水解的α-糖苷酶的抑制作用,考察TZQ干预淀粉水解的途径。[方法]以参与淀粉水解各环节的碳水化合物淀粉、糊精、麦芽糖、异麦芽糖为底物,运用体外酶抑制动力学研究的方法,考察TZQ对参与淀粉逐级水解的α-糖苷酶(淀粉酶、糊精酶、麦芽糖酶和异麦芽糖酶)的抑制作用。[结果]在6.88×10^(-5)~5.50×10^(-4)mg/mL浓度范围内,TZQ对淀粉酶活性的抑制作用未显示剂量依赖性;在1.10×10^(-4)~6.60×10^(-3)mg/mL浓度范围内,TZQ对糊精酶活性没有明显的抑制作用;在5.50×10^(-4)~1.10×10^(-2)mg/mL浓度范围内,TZQ对麦芽糖酶活性具有较好的抑制作用,IC_(50)值为2.96×10^(-3)mg/mL;在5.50×10^(-4)~1.10×10^(-2)mg/mL浓度范围内,TZQ对异麦芽糖酶活性具有较好的抑制作用,IC_(50)值为1.77×10^(-3)mg/mL。[结论]TZQ可通过抑制淀粉酶、麦芽糖酶、异麦芽糖酶活性干预淀粉水解过程降低血糖,TZQ为一潜在的α-糖苷酶抑制剂。

贵州废弃烟叶中具有α-糖苷酶抑制活性的多酚类化合物的分离纯化与结构鉴定

为了探究贵州废弃烟叶在降低血糖方面的物质基础,以贵州废弃烟叶为原料,通过提取、浓缩、硅胶柱层析、凝胶柱层析等技术方法从其乙醇提取物的石油醚中分离纯化获得9个多酚类单体化学成分,通过ESI-MS、^(1)H-NMR、^(13)C-NMR、DEPT等现代波谱学检测解析技术对所有得到的化合物进行了结构鉴定,被鉴定的9个多酚类单体化合物分别为Chlorogenicacid(1)、Rutin(2)、5,7,4'-trihydroxy-3,3'-dimethoxyflavone(3)、5,7-dihydroxyl-6,8,4'-trimethoxylflavone(4)、Kaempferol-3-methyl ether(5)、Scosoletin(6)、Dihydroferulic acid methyl ester(7)、2-(4-hydroxyphenyl)ethanol(8)、1,2,4,5-tetrahydroxybenzene(9)。继续采用PNPG法测定多酚类单体化合物的α-糖苷酶抑制活性,结果显示化合物9具有显著的抑制α-糖苷酶的活性,且优于阳性药阿卡波糖,这表明化合物9具有成为α-糖苷酶抑制剂的潜力,也为进一步探讨贵州废弃烟叶多用途和研制天然α-糖苷酶抑制剂产品奠定了科学依据。

基于西药中用理论下α-糖苷酶抑制剂的中医药性论述

“西药中用”是以中医理论体系为基础,认识和总结西药的中医药属性,研究并掌握“西药中用”的各种规律,有助于临床水平的提高。目前对于临床常用降糖药物α-糖苷酶抑制剂的中医四气五味、归经及药物功效归纳较少见到报道。本文旨在运用“西药中用”理论,以《黄帝内经》对谷物精微转化的理论为切入点,结合α-糖苷酶抑制剂临床适应症和药物不良反应等情况进行分析探讨。分析结果认为α-糖苷酶抑制剂中医药性归纳为沉降药,归脾胃、小肠经,四气归纳为凉性,五味为苦甘,具有清热润燥、健脾养阴之效。

原发性肝癌患者血清α-L-岩藻糖苷酶、糖类抗原724、糖类抗原19-9水平与临床病理特征的相关性分析

目的 分析原发性肝癌(PHC)患者血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、糖类抗原724(CA724)、糖类抗原19-9(CA19-9)水平与临床病理特征的相关性。方法 我院2021年3月至2023年1月收治的71例PHC患者为PHC组,71例同期肝硬化患者为对照组。比较两组入院时血清AFU、CA724、CA19-9水平及不同临床病理参数的血清AFU、CA724、CA19-9水平;并分析其相关性;采用ROC进行相关分析。结果 研究组血清AFU、CA724、CA19-9水平高于对照组(t1=15.782;t2=14.195;t3=18.504,P<0.05);不同病理学参数PHC患者血清AFU、CA724、CA19-9水平比较:肿瘤数目(单发)低于肿瘤数目(多发)(t1=5.531;t2=8.155;t3=4.937,P<0.05);肿瘤直径(≤5cm)低于肿瘤直径(>5cm)(t1=7.333;t2=11.808;t3=9.026,P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期低于Ⅲ~Ⅳ期(t1=12.733;t2=15.329;t3=15.623,P<0.05);低分化高于中高分化(t1=13.450;t2=26.847;t3=17.349,P<0.05);无淋巴结转移低于有淋巴结转移(t1=14.745;t2=33.192;t3=16.148,P<0.05);入院时血清AFU、CA724、CA19-9水平与分化程度呈负相关,与肿瘤直径、肿瘤数目、淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.05);入院时血清AFU、CA724、CA19-9水平联合检测PHC的AUC为0.878(95%CI:0.857~0.890,P<0.05)。结论 血清AFU、CA724、CA19-9水平与PHC关系密切,可作为临床诊断的辅助参考指标。

59份野生桑桑叶中的DNJ含量及粗提物对α-糖苷酶的抑制活性

对来自云南省不同地区的59份野生桑桑叶中的1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量,以及桑叶粗提物对淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶的体外抑制活性进行了测定,同时采用液-质联用(LC-MS)仪分离纯化桑叶粗提物中的DNJ,并对其抑制蔗糖酶的机制进行了初步研究,期望筛选出适用于治疗糖尿病药物开发的药用桑资源,以及为解析桑叶粗提物和纯化的桑叶DNJ抑制α-糖苷酶活性的机制提供线索。研究结果表明:不同来源的野生桑桑叶中的DNJ含量存在明显差异,其中来自开远地区的岩桑桑叶中DNJ的质量分数高达0.791 1%,是具有药用开发价值的野生桑资源;不同来源的野生桑桑叶粗提物对淀粉酶、蔗糖酶和麦芽糖酶活力的体外抑制率差异显著,但抑制活性的大小与样品中的DNJ含量不成正比,推测桑叶中除含有DNJ外还含有具有明显的α-糖苷酶抑制活性的多种DNJ类似物;从野生桑桑叶粗提物中分离纯化的DNJ对淀粉酶无明显抑制活性,但对蔗糖酶和麦芽糖酶有显著的抑制活性,对蔗糖酶表现为非竞争性抑制作用。

茶树新梢不同叶片中β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因表达的实时定量PCR分析

在建立茶树基因表达绝对定量实时PCR检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>第五叶>第二叶>一芽一叶;而β-樱草糖苷酶基因在一芽一叶中最高,为4.31E+06拷贝/μl,一芽一叶>第二叶>第三叶>第四叶>第五叶。与茶叶香气密切相关两个基因在茶树不同部位的叶片中表达量和表达类型存在明显差异。本实验建立的实时荧光定量PCR可有效地用于茶树基因表达的定量分析。

紫甘薯花青素体外抑制α-糖苷酶活性研究

为了研究紫甘薯花青素体外对α-糖苷酶活性的影响,采用HPLC和LC-MSn对紫A19(ZA1)和京薯(JS6)中花青素的含量和组分进行对比分析。结果表明:两种紫甘薯花青素含量分别为52.44mg/g和39.46mg/g,其组分基本一致,不同的是ZA1另含牵牛花色素类色素,而JS6另含天竺葵色素类色素;这两种紫甘薯花青素对α-糖苷酶活性都有抑制效果,但ZA1的抑制效果最佳,当加入质量浓度为0.1mg/mL 600μL(即抑制剂ZA1占总反应体积的18%)、抑制时间15min、抑制温度40℃时对α-糖苷酶活性抑制率可达50%以上,用Lineweaver-Burk双倒数作图考察其抑制类型,根据曲线可判定为竞争性抑制,抑制常数Ki=5.43×10-2mmol/L,vmax=1.71μmol/(L.min)。

大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。

桑叶的α-葡萄糖苷酶抑制作用研究

目的:研究桑叶各活性组分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。方法:制备桑叶各化学活性组分并充分“纯化”,采用α-糖苷酶体外抑制试验及小鼠灌胃给药对正常小鼠的血糖及对小鼠糖耐量的影响以观察桑叶不同部位对α-糖苷酶的抑制作用。结果:桑叶煎剂、桑叶生物碱具有显著的α-糖苷酶抑制作用,多糖作用不明显,黄酮作用弱。结论:桑叶生物碱是桑叶α-糖苷酶抑制作用的主要有效部位。

α-甘露糖苷酶研究进展

α-甘露糖苷酶多具有糖苷水解酶38、47家族保守序列,目前已测序的α-甘露糖苷酶基因序列超过2000多种,根据α-甘露糖苷酶基因保守序列可将其分为三类,即Ⅰ类α-甘露糖苷酶、Ⅱ类α-甘露糖苷酶和未分类α-甘露糖苷酶。α-甘露糖苷酶主要参与蛋白质糖基化修饰和糖蛋白聚糖水解修饰。其代谢异常可以引起多种疾病,目前研究较多的是由α-甘露糖苷酶功能障碍引起的先天性红细胞生成异常性贫血Ⅱ型和α-甘露糖苷贮积症。论文主要对α-甘露糖苷酶的分类及其在糖基化过程中的作用,以及与之有关的疾病进行介绍,以期为苦马豆素毒性作用机制研究提供理论参考。

桑枝皮醇提物的抗氧化和对α-糖苷酶活性的抑制作用

α-糖苷酶活性抑制剂是一种治疗糖尿病的口服药物。以醇水溶液为萃取溶剂,从桑树枝条的皮中获得一种具有抑制α-糖苷酶活性的桑枝皮醇提物。桑枝皮醇提物的体外生物活性试验显示其对1,1-二苯基苦基苯肼自由基具有良好的清除作用,抑制中值(IC50)为100μg/mL;对酪氨酸酶、麦芽糖酶和蔗糖酶的活性均具有很强的抑制作用,IC50值分别为0.44 mg/mL、6.5μg/mL和0.25μg/mL。对桑枝皮醇提物的酶动力学分析显示其属于底物竞争性的α-糖苷酶抑制剂。研究结果初步表明,桑枝皮醇提物不仅具有一定的抗氧化作用,而且可作为一种新型的α-糖苷酶抑制剂用于糖尿病的血糖控制。

示差折光-液相色谱法测定蜂蜜中β-呋喃果糖苷酶残留量

基于β-呋喃果糖苷酶与棉子糖在柠檬酸-氢氧化钠缓冲介质(pH 4.50)中50℃下反应16 h后的酶解产物蜜二糖含量的变化,建立了高效液相色谱示差折光检测(HPLC-RID)技术测定蜂蜜中β-呋喃果糖苷酶残留量的新方法。以Agilent Carbohydrate柱为分离柱,乙腈-水(78∶22,V/V)为流动相,流速为1.4 mL/min,检测器为示差折光检测器,柱温和检测器温度均为35℃。结果表明,蜂蜜样品经过聚丙烯酰胺凝胶柱分离后,样品峰形得到简化,灵敏度提高了1.3倍;方法的线性范围为10～200 U/kg;测出限为10 U/kg;回收率为81.3%～112.4%;相对标准偏差为3.7%～9.7%(n=6)。当蜂蜜样品中β-呋喃果糖苷酶含量>20 U/kg时,判定为阳性样品,即掺假蜂蜜。

精浆肉毒硷和α-糖苷酶的测定在男性学中的应用

本文测定了80例无精症精浆肉毒碱,29例无精症精(?)α-糖苷酶,其值与正常生育力组存在明显差异。测定了12例明确诊断为严重睾丸病变引起的分泌性无精症,10例由排出障碍引起的阻塞性无精症,两者相比,差异十分明显,阻塞性无精症精浆肉毒碱低于100nmol/ml,因此100nmol/ml精浆肉毒碱可作为阻塞性无精症的诊断标准。测定90例精索静脉曲张不育症,精浆肉毒碱也有明显降低,表明附睾功能受到了影响,在用中西医结合方法治疗后,精浆肉毒碱上升,精子活动度改善。

一种来源于Leifsonia shinshuensis DICP 16菌体的β-D-木糖苷酶的分离纯化及其性质

采用盐析、DE52、Q-SepharoseFast Flow阴离子交换层析、Toyopearl Butyl 650C疏水层析以及Sephacryl S-300HR凝胶过滤层析联用的方法,从Leifsonia shinshuensis DICP 16菌体中纯化出一种β-木糖苷酶。分离后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带,通过SDS-PAGE和凝胶过滤层析法,测得该酶是一个由两个分子量约为91kD的相同亚基组成的同源二聚体。其水解对硝基苯酚木糖苷（pNPX）的最适反应温度为55°C,pH值为7.0。该木糖苷酶在45°C以下,pH6.0-11.0之间具有很好的稳定性。在45°C,pH值为7.0的条件下,水解pNPX的Km,Vmax分别为1.04mmol/L,0.095mmol/（min·mg）。研究不同的金属离子对该酶的活性影响,发现Fe^2＋和Cu^2＋是很强的抑制剂。通过对天然木糖苷化合物的水解测试,发现该酶可以水解人参皂苷Rb3的木糖基,产生人参皂苷Rd,却不能水解紫杉烷木糖苷的木糖基。