Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对大鼠肝CYP450酶活性的作用

目的:研究牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶活性的影响。方法:建立大鼠肝微粒体体外代谢的HPLC法,采用Cocktail探针法评价牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶的作用。(1)分别精密称取美托洛尔、奥美拉唑、非那西汀、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲、硝苯吡啶各适量,配制Cocktail混合探针底物溶液。(2)设活性组、无活性组和抑制剂组,活性组:大鼠肝微粒体活性未进行灭活处理;无活性组:大鼠肝微粒体被灭活,其他同活性组;抑制剂组(分别为奎宁丁、噻氯匹定、α-萘黄酮、二乙氨基二硫代甲酸钠、磺胺苯吡唑、酮康唑组):在活性组的基础上加抑制剂各2.5μl。检测各组CYP2D6、CYP2C19、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP3A4/5亚酶的相对活性。结果:与无活性组比较,活性组中CYP2D6、CYP2C19、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9、CYP3A4/5相对酶活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与活性组比较,牛樟芝高、中、低剂量组中CYP1A2和CYP3A4/5相对酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05);CYP2C9相对酶活性降低,但差异无统计学意义(P>0.05);高、中剂量组中CYP2D6相对酶活性降低,高剂量组中CYP2E1、低剂量组中CYP2C19相对酶活性降低,高剂量组中CYP2C19相对酶活性升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:牛樟芝醇提物对大鼠肝微粒体CYP450亚酶中CYP1A2、CYP3A4/5、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1的代谢活性在一定浓度范围内有抑制作用,而对CYP2C19亚酶的代谢活性在一定浓度范围内有促进作用。

LC-MS/MS法研究Cocktail探针药物咖啡因、右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑及其代谢产物在大鼠血浆中的药代动力学

目的建立灵敏、快速、稳定的测定大鼠血浆中CYP450探针药物/代谢产物,咖啡因/副黄嘌呤、奥美拉唑/5-羟基奥美拉唑、右美沙芬/右啡烷、咪达唑仑/1'-羟基咪达唑仑的LC-MS/MS方法,并用于其在大鼠体内的药代动力学研究。方法 100μL血浆样品加入内标地西泮及乙酸铵溶液,乙酸乙酯进行液液萃取,离心取上清挥干复溶,LC-MS/MS检测。选用Agilent Eclipse Plus-C_(18)色谱柱(50 mm×2.1mm,3.5μm),乙腈和0.01%甲酸(1 mmol·L^(-1)甲酸铵)作为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 m L·min^(-1),进样量10μL。采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应正离子监测模式(MRM+),咖啡因m/z:195.0/138.1;副黄嘌呤m/z:181.1/124.1;奥美拉唑m/z:346.1/198.1;5-羟基奥美拉唑m/z:362.1/214.1;右美沙芬m/z:272.2/147.1;右啡烷m/z:258.1/157.1;咪达唑仑m/z:326.1/291.1;1'-羟基咪达唑仑m/z:342.1/324.1;内标地西泮m/z:285.1/154.0。结果咖啡因、副黄嘌呤、奥美拉唑、5-羟基奥美拉唑、右美沙芬、右啡烷、咪达唑仑和1'-羟基咪达唑仑的线性范围分别为1.95~2 000、0.98~250、0.48~2 000、0.98~250、0.98~2 000、0.48~125、1.95~2 000和1.95~250μg·L^(-1)。RSD<15%且无基质效应。结论该方法快速、灵敏、重现性好,可用于血浆中上述探针药物/代谢产物浓度的测定,便于深入进行代谢酶CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的代谢相关研究。

“cocktail”探针药物法及其在研究中药对细胞色素P450影响中的应用进展

"cocktail"(鸡尾酒)探针药物法作为一种快速、高通量的研究方法,目前已广泛应用于药物对细胞色素P450(CYP450)活性影响评估、药物代谢途径确认、药物-药物相互作用预测、药物代谢表型分析、临床用药方案优化等诸多研究方向。此方法具有独特的优势和广阔的应用前景。本文主要从CYP450同工酶的特性、"cocktail"探针药物法的特点、探针药物选择依据、"cocktail"探针药物法在中药对CYP450代谢酶影响中的应用进行综述。旨在较为系统地梳理相关研究进展,并为此方面的深入研究工作提供参考。

Cocktail探针法评价仙茅不同炮制品对CYP450亚型酶的影响

目的:研究仙茅不同炮制品对4种大鼠CYP450亚型酶活性的影响。方法:各组大鼠给药1周后给予混合探针药物,不同时间点采集血样,HPLC法检测探针药物在体内的代谢情况,通过DAS3.0软件计算药动学参数并进行统计分析。结果:与空白组相比,各给药组茶碱和氯唑沙宗的t_(1/2)、AUC_((0-∞))和AUC_((0-∞))均显著降低,CLZ/F显著升高(P<0.05);酒仙茅组、萸仙茅组、姜仙茅组氨苯砜的AUC_((0-∞))和AUC_((0-∞))均显著降低,CLZ/F显著升高(P<0.05),而盐仙茅组氨苯砜t_(1/2)、AUC_((0-t))和AUC_((0-∞))均显著升高,Tmax、CLZ/F显著降低(P<0.05);生品组、酒仙茅组、姜仙茅组甲苯磺丁脲的t_(1/2)均显著降低,而盐仙茅组甲苯磺丁脲的t_(1/2)、CLZ/F均显著降低,AUC_((0-t))和AUC_((0-∞))均显著增加(P<0.05)。结论:仙茅各炮制品对CYP1A2及CYP2E1活性有诱导作用;酒、萸、姜制仙茅对CYP3A4活性有诱导作用,盐仙茅对CYP3A4活性有抑制作用;盐仙茅对CYP2C9活性有抑制作用,其余3组对CYP2C9活性无显著影响。

基于Cocktail探针药物法分析辛伐他汀对肝脏药物代谢酶的影响

目的利用Cocktail探针药物法分析辛伐他汀对肝脏药物代谢酶CYP450活性的影响,为药物相互作用研究提供参考,促进临床合理用药。方法选择CYP450酶中亚型相应的特异性探针底物,UPLC-MS测定探针药物血药浓度,并使用DAS3.0软件计算药代参数。通过空白对照组和辛伐他汀组中探针底物药代参数的比较,评价辛伐他汀对CYP450酶活性的影响。结果与空白对照组比较,辛伐他汀组中非那西汀的AUC降低,甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和睾酮的AUC升高,奥美拉唑和美托洛尔的主要药代参数与空白对照组比较均无显著性差异。结论辛伐他汀对大鼠的CYP1A2有诱导作用,对CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4有抑制作用,而对CYP2C19和CYP2D6无显著性影响。

人常见肝UGTs活性与抑制体外评价体系的建立与验证

目的 本研究旨在建立一种可靠的体外评价体系,用于评估人肝UDP-葡萄糖醛酸转移酶活性及药物对人肝UGTs的抑制作用,并验证该体系的准确性和稳定性。方法 选择了人肝微粒体UGTs酶6种主要亚型的6个探针底物,在优化的温孵条件下通过测定其代谢产物生成反映人肝微粒体UGTs酶的活性,代谢产物浓度测定利用经过确证的液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)进行。同时应用已知抑制剂对所建立的温孵体系进行验证。结果 建立的LC-MS/MS分析方法符合生物分析要求;在本实验温孵体系下,已知的UGT抑制剂均表现出明显的抑制作用。结论 该研究成功建立了一种准确可靠的体外评价体系,该方法可应用于评估药物对UGTs酶的体外抑制作用,该研究可为药物研发和临床合理用药提供重要指导。

乌头类生物碱组分在CYP450中的代谢指纹图谱及对CYP450活性的影响

利用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的多反应监测(MRM)技术,结合多探针底物方法,对单酯型及双酯型乌头类生物碱组分对细胞色素P450(CYP450)亚型的活性影响进行了研究;同时利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对单酯型和双酯型乌头类生物碱组分在CYP450中的代谢指纹图谱进行了研究.活性影响研究结果表明,单酯型生物碱组分对CYP2C及2D的抑制能力较强,其IC50值分别为7.44和6.74μmol/L;双酯型生物碱组分对CYP1A2,3A,2C和2D均有较弱的抑制作用,其IC50值分别为39.48,70.44,17.36和86.04μmol/L.代谢指纹图谱显示,双酯型生物碱组分在大鼠肝微粒体中有6个特异性产物可以作为该反应的特征峰.

LC-MS/MS法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用

建立同时测定大鼠肝微粒体中7种特异性底物对应代谢产物(对乙酰氨基酚、4″-羟基美芬妥英、右啡烷、4-羟基甲苯磺丁脲、6-羟基氯唑沙宗、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮)的LC-MS/MS法,并应用探针底物法研究苯环喹溴铵对大鼠肝微粒体CYP450酶的抑制作用。将CYP450酶6种亚型的7种特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、S-美芬妥英(CYP2C11)、右美沙芬(CYP2D1/2)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2)和睾酮(CYP3A1/2)分别与大鼠肝微粒体及系列浓度的苯环喹溴铵溶液进行温孵反应,合并处理后的微粒体溶液,采用LC-MS/MS法同时测定对应底物代谢产物的含量,计算相应的IC50,评价是否有抑制作用。并应用已知抑制剂对所建立的探针底物法进行验证。在大鼠肝微粒体温孵体系中,苯环喹溴铵对CYP1A2,CYP2C11,CYP2C6,CYP2E1和CYP3A1/2的IC50均大于100μmol/L,对CYP2D1/2的IC50为(2.16±0.22)μmol/L。结果表明,苯环喹溴铵对CYP2D1/2可能有抑制作用,对CYP450酶的其他亚型无抑制作用。

单探针与混合探针底物法在细胞色素P450酶底物酶促动力学中的比较研究

[目的]研究5种细胞色素P450酶亚型的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、右美沙芬(CYP2D6)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、咪达唑仑(CYP3A4)在人和大鼠肝微粒体中的酶动力学特征,比较两种探针底物法的适用性。[方法]5种特异性探针底物分别经人或大鼠的肝微粒体代谢反应后,采用高效液相色谱法测定特异性探针底物的代谢速率,根据底物浓度-代谢速率曲线计算酶动力学常数。[结果]单探针与混合探针两种方法在人肝微粒体中所得的V max、Km值具有一致性;而在大鼠肝微粒体中所得的K m具有一定差异,表明该混合探针底物法在用于药物对大鼠肝微粒体中的细胞色素P450酶活性评价时可能会出现一定程度的影响。[结论]在人肝微粒体中,两种探针底物法的V max、Km值具有一致性,因而混合探针底物法可代替单探针法用于细胞色素P450酶活性评价;在大鼠肝微粒体中,探针底物混合后可使得部分探针底物的K m值升高,与酶亲和力下降,在细胞色素P450酶活性评价中可能出现假阴性结果。

超高效液相色谱法检测6种探针底物代谢产物并评价人细胞色素P450同工酶活性

目的：建立同时测定非那西丁（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、睾酮和咪达唑仑（CYP3A4）6种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,评价药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。方法：人肝微粒体与6种探针底物在还原系统NADPH的作用下,37℃共同孵育;以蛋白沉淀法处理样品,采用超高效液相色谱系统（UPLC-MS/MS）,建立Cocktail混合探针,对药物的6种代谢物进行定量分析,并分析药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。结果：6种探针底物物代谢产物乙酰氨基酚（0.26~8.35μmol/L）、6-羟基氯唑沙宗（3.02~96.63μmol/L）、5-羟基奥美拉唑（0.10~3.09μmol/L）、羟基甲苯磺丁脲（0.15~4.88μmol/L）、6β-羟基睾酮（3.67~117.37μmol/L）和α-羟基咪达唑仑（1.64~52.37μmol/L）线性关系良好,各成分相关系数（R2）〉0.996,准确度为95.96%~103.10%,日内和日间精密度RSD（%）〈15%,提取回收率、基质效应RSD（%）〈11%,稳定性好。结论：UPLC-MS/MS准确、灵敏度高,可作为研究受试药物对CYP450酶影响及相关研究的分析测定方法。

以混合探针药的方法评价白藜芦醇对人体细胞色素酶P450活性的影响

目的:采用混合探针法研究白藜芦醇对人细胞色素酶P450五种亚型CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP3A4和CYP2C19的影响。方法:采用随机对照研究,将26名男性健康受试者随机分为安慰剂组和白藜芦醇组,分别予以口服安慰剂/白藜芦醇每次1 g,每日一次,连续服药14 d,再口服咖啡因、氯沙坦、奥美拉唑、右美沙芬和咪达唑仑五种探针药物,采集不同时间的血样,检测咪达唑仑、咖啡因、奥美拉唑三种探针药物的血药浓度。并收集0~8 h尿液,记录尿量,检测氯沙坦及右美沙芬的代谢速率。比较两组之间的药代动力学差异。结果:与对照组相比,白藜芦醇组CYP1A2的探针药物咖啡因AUC0-12、AUC0-∞、Cmax分别增加32.10%(P<0.001)、71.52%(P<0.001)、10.62%(P=0.004),同时T1/2也显著增加(P=0.002);CYP2C19的探针药物奥美拉唑和CYP3A4的探针药物咪达唑仑的药代动力学参数AUC0-12、AUC0-∞、T1/2和Cmax均未见显著改变(P>0.05);CYP2C9探针药物右美沙芬与其代谢产物去甲右美沙芬比率(DTM/DT)的比率增加了79.91%(P=0.003);CYP2D6探针药物氯沙坦与其代谢产物E-3174的比率(losartan/E-3174)增加了531.34%(P<0.001)。结论:白藜芦醇多次给药后,能显著抑制CYP1A2、CYP2D6和CYP2C9的酶活性,而对CYP3A4和CYP2C19的酶活性无显著影响。

基于探针底物法的高效液相色谱-串联质谱法测定蚯蚓体内4种CYP同工酶活力及其应用

基于探针底物法,将蚯蚓微粒体悬浮液加入至含有混合探针底物香豆素(50μmol·L^(-1))、安非他酮(25μmol·L^(-1))、阿莫地喹(50μmol·L^(-1))、右美沙芬(5μmol·L^(-1))的孵育体系中(微粒体蛋白质量浓度需控制在32~96 mg·L^(-1)内),于37℃孵育20 min后,加入甲醇终止反应,静置10 min后过0.22μm滤膜,采用高效液相色谱-串联质谱法测定对应的代谢物7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的生成量。根据相应代谢物的生成量分别评价蚯蚓CYP2A6、CYP2B6、CYP2C8及CYP2D6酶活力。采用Acquity UPLC HSS T3柱作为分离柱,以不同体积比的含1 mmol·L^(-1)乙酸铵的0.05%(φ)甲酸溶液和甲醇的混合溶液作为流动相进行梯度洗脱,串联质谱中采用电喷雾离子源正离子模式和多反应监测模式检测,并用基质匹配法配制混合标准溶液系列。结果显示:7-羟基香豆素、羟基-安非他酮、N-脱乙基阿莫地喹、右啡烷的质量浓度均在2.5~50μg·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系;对空白样品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为73.7%~103%,日内相对标准偏差(RSDs,n=5)为2.1%~11%,日间RSDs(n=5)为4.6%~10%。方法用于分析分别暴露于多壁碳纳米管染毒土壤(暴露组)和普通土壤(对照组)21 d后蚯蚓体内4种CYP同工酶的活力,CYP2C8酶活力明显高于CYP2A6、CYP2B6及CYP2D6,暴露组中CYP2A6及CYP2C8酶活力显著(P<0.05)高于对照组,而CYP2B6及CYP2D6酶活力与对照组的无显著性差异,因此推测可将CYP2A6及CYP2C8作为一套生物标记物,用于定性诊断土壤的多壁碳纳米管污染。

毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体中6种CYP酶的体外抑制作用

目的考察毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用。方法采用探针底物法,在大鼠肝微粒体中加入0.1、0.3、1、3、10、30μmol/L的毛蕊花糖苷,与探针底物非那西丁、美芬妥因、双氯芬酸、香豆素、右美沙芬、睾酮(分别为CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4酶的底物)共同孵育。在另设空白对照组和阳性抑制剂组[α-萘黄酮、噻氯匹定、磺胺苯吡唑、毛果芸香碱、奎尼丁、酮康唑(分别为CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4酶的抑制剂)]的基础上,以吲达帕胺为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法检测相应代谢产物(对乙酰氨基酚、4-羟基美芬妥因、4-羟基双氯芬酸、7-羟基香豆素、右啡烷、6β-羟基睾酮)的含量,运用GraphPad v8.0软件计算半数抑制浓度(IC_(50));采用计算机分子对接技术,将毛蕊花糖苷和阳性抑制剂分别与CYP酶进行分子对接,分析二者分子结合方式及结合能力强弱。结果毛蕊花糖苷对CYP1A2、CYP2A6酶的IC_(50)>30μmol/L,对CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4酶的IC_(50)分别为24.87、21.52、12.56、7.55μmol/L。毛蕊花糖苷与CYP3A4酶之间可形成氢键并产生疏水作用力,酮康唑与CYP3A4酶之间可形成氢键并产生静电相互作用;毛蕊花糖苷和酮康唑与CYP3A4酶的结合自由能分别为-10.2、-12.4 kcal/mol(1 kcal/mol=4.19 kJ)。结论毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体中CYP3A4酶有中等强度的抑制作用,且亲和力与阳性抑制剂相当;该化合物对其他5种CYP酶的抑制作用弱。

寒证大鼠细胞色素P_(450)亚酶的表征及肉桂的调控

目的:考察寒证大鼠肝脏细胞色素P_(450)(CYP_(450))亚酶的表征特点及热性中药的调控效果。方法:选取知母-石膏-黄柏-龙胆草制备寒性造模药,对SD大鼠诱导21 d后复制寒证模型;另取肉桂提取物对寒性大鼠进行干预,制备观察组;用生理盐水处理为对照组。钙盐沉淀法制备肝脏微粒体,与混合探针药物温孵,用高效液相色谱(HPLC)法测定探针药物的代谢消除百分率,评价CYP_(450)亚酶活性变化。提取肝脏总RNA,实时荧光定量PCR法测定CYP_(450)亚酶的mRNA表达。结果:寒性中药对大鼠CYP3A1酶的活性和mRNA具有显著的抑制作用,热性肉桂具有一定的调控作用,并且这种调控发生在mRNA水平。结论:本研究从多角度系统评价和验证寒证机体CYP_(450)亚酶的表征特点及热性中药的调控效果。

树豆酮酸A对人肝微粒体中5种常见细胞色素P450酶的体外抑制作用研究

目的:研究树豆酮酸A对人肝微粒体中的5种细胞色素P450(CYP)酶的体外抑制作用。方法:采用Cocktail探针药物法,在人肝微粒体中加入50.0、15.0、5.0、1.5、0.5、0.15、0.05μmol/L的树豆酮酸A,与混合探针药物[包含非那西丁、右美沙芬、奥美拉唑、睾酮、甲苯磺丁脲(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的探针药物)]共同孵育60 min。在另设空白组和阳性对照组[α-萘黄铜、奎尼丁、(+)-N-3-苄基香酚、酮康唑、磺胺苯吡唑(分别为CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9的特异性抑制剂)]的基础上,以葛根素为内标,采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)分析相应代谢产物(对乙酰氨基酚、右啡烷、5-羟基奥美拉唑、6β-羟基睾酮、羟基甲苯磺丁脲)的含量。以ACQUITY UPLC■BEH C18为色谱柱,以0.01%甲酸水溶液-0.01%甲酸乙腈为流动相(梯度洗脱),柱温为40℃,流速为0.4 mL/min,进样量为2μL;采用电喷雾电离源,以多反应监测模式进行正负离子扫描,数据采集范围为m/z 100~1200,碰撞气为氩气,雾化气为氮气,锥孔气流量为50 L/h,脱溶剂气流量为800 L/h,正、负离子模式下毛细管电压分别为2.0、1.5 k V,离子源温度分别为120、110℃,脱溶剂的温度分别为400、450℃。使用Graphpad Prism 5.0软件进行非线性回归分析并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果:上述各代谢产物检测浓度的线性范围分别为0.26~8.35、0.36~34.56、0.10~3.09、3.67~117.37、0.15~4.88μmol/L(R^2>0.99),定量下限分别为0.26、0.36、0.10、3.67、0.15μmol/L。阳性对照组特异性抑制剂对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP2C19、CYP3A4、CYP2C9酶的IC50均在文献报道的可接受范围内。树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶的IC50值均大于50μmol/L,对CYP2C9、CYP2C19酶的IC50值分别为4.94、18.00μmol/L。结论:树豆酮酸A对人肝微粒体中CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4酶没有抑制作用,对CYP2C9、CYP2C19酶有一定的抑制作用。

桑叶提取物对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响

目的采用“Cocktail”混合探针药物法,探究桑叶水提物(aqueous extract of mulberry leaves,AML)、桑叶醇提物(ethanol extract of mulberry leaves,EML)对大鼠体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶活性的影响,从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用,为临床合理用药提供参考。方法选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9)的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d,第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物,根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱-串联质谱测定各组血药浓度,用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果连续灌胃桑叶提取物14 d后,与9.0 g/L氯化钠注射液相比,AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢,安非他酮则不明显;与羧甲基纤维素钠组相比,EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢,非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP2B6可能无显著性影响;EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP1A2可能无显著性影响。

探针底物法评价柚皮苷对大鼠肝脏CYP3A1/2酶代谢活性的影响

目的采用体内探针底物法评价柚皮苷连续灌胃给药7 d对大鼠肝脏CYP3A1/2酶代谢活性的影响。方法选择咪达唑仑作为CYP3A1/2的特异性探针底物;将大鼠随机分成对照组和4个柚皮苷给药组,其中对照组灌胃给予等体积超纯水,柚皮苷4个剂量组分别按50、125、250和500 mg·kg^-1剂量灌胃给药连续7 d;给药完成后,尾静脉注射咪达唑仑溶液,于不同时间点采集血样,采用高效液相串联质谱法测定大鼠血浆中咪达唑仑的浓度,利用DAS2.0软件计算咪达唑仑的药动学参数AUC0~t、AUC0~∞、MRT0~t、MRT0~∞、t1/2、V、Cl和C max,以评价柚皮苷对大鼠肝脏CYP3A1/2酶代谢活性的影响。结果与对照组比较,柚皮苷四个剂量组中的咪达唑仑主要药代动力学参数AUC0~t、AUC0~∞、MRT0~t、MRT0~∞、t1/2、V、Cl和C max均无显著差异(P>0.05)。结论大鼠经连续7 d灌胃给予柚皮苷(50~500 mg·kg^-1)后,肝脏CYP3A1/2酶代谢活性未受到显著影响。

土茯苓抑制CYP3A4酶活性的研究

利用高效液相色谱技术测定了土茯苓中六种活性成分含量,实验结果表明:表儿茶素、新落新妇苷、落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷和白藜芦醇的含量分别为0.14、1.30、6.48、2.80、0.83、0.61 mg/g。以睾酮为底物,应用液相色谱与三重四级杆质谱联用技术测定土茯苓乙酸乙酯提取物体外抑制CYP3A4酶能力,IC 50值为0.003±0.12μg/μL(n=3),结果表明,土茯苓具有很强的抑制CYP3A4作用。

Cocktail探针药物法评价丹参注射液和心可舒片对家兔CYP450酶5种亚型的作用

目的采用"Cocktail"探针药物法考察丹参注射液和心可舒片对家兔CYP酶5种亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4代谢的影响。方法将16只雄性家兔同时空腹给予混合探针药咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬和咪达唑仑,采用LC-MS/MS检测特定时间点的探针药物代谢率(代谢产物浓度与探针原型药物浓度的比值)。家兔随机分为丹参注射液组和心可舒片组,设计为自身对照实验,分3个周期,按顺序分别给药丹参低剂量组(0.5 m L·kg-1)、中剂量组(1 m L·kg-1)、高剂量组(2 m L·kg-1)和心可舒低剂量组(90 mg·kg-1)、中剂量组(180 mg·kg-1)和高剂量组(360 mg·kg-1)。每个周期经7 d洗净期后,连续给药7 d,第15天再给予探针药物后测代谢率。采用ANOVA方差分析比较各剂量组家兔和用药前探针药物的代谢率的变化。结果与用药前相比,各剂量组的混合探针药物代谢率均有下降趋势。结论丹参注射液、心可舒片使用7 d后可能抑制家兔体内CYP450酶代谢,与体外实验结果一致。这些药物与经过CYP450酶代谢的药物联合应用时,可能会引起药物相互作用,临床联合使用应提高警惕。

应用Cocktail探针药物法分析中药对CYP450酶活性影响的研究进展

Cocktail探针药物法作为一种快速、准确、高通量的评价CYP450酶活性的研究方法广泛应用于药物研发早期筛选、药物代谢途径及机制研究、药物相互作用研究、指导临床合理用药、上市药物再评价及协助肝肾病理研究等诸多领域。该文对Cocktail探针药物法的特点做简要说明,着重介绍其在中医药领域内的应用进展,从中药活性成分的代谢机制研究,炮制过程,方剂配伍对CYP450的影响,揭示中成药CYP450代谢特点规律,民族药学应用情况,中药保肝作用及中医证候模型研究等,并总结归纳现有研究成果,比较其在中西医药领域内应用的异同点,为该领域的深入研究工作提供参考。