PEP教材“Let’s play”板块的分析与评价——以2012新版四年级教材为例

2012年秋季推行的新人教版小学英语(PEP)教材已在我国各地广泛使用,新版教材更加注重小学生语言能力的培养,突出语言的实践性、交际性、真实性和实用性。本研究以教材分析与评价理论为依据,试图从活动内容、活动形式和语言技能三个维度对新版PEP四年级上、下册教材中玩演(“Let’ s play”)版块进行分析和评价,为基础英语教学提供一些建议。

Research on the Construction and Practice of College English Spoken Language Network Training Camp under the “Let’s talk” Model

Based on the"Understandable Output Hypothesis"a practical study on the construction of college oral English network training camp is set up,through speech learning and imitation,building language input in natural environment,exploring effective output mode based on information technology platform,providing foreign language learners with opportunities to express language and get feedback.Students use relevant resources on the Internet to complete the oral activities of"thematic activities"together,so as to cultivate students'cooperative learning,communication skills,team spirit and language communication ability.

miR-let-7a-5p靶向调控SNAP23影响食管鳞状细胞癌发展的研究

目的:探讨微小RNA miR-let-7a-5p靶向调控突触体相关蛋白23(SNAP23)影响食管鳞状细胞癌(ESCC)发展的机制。方法:在人类癌症差异表达的miRNA数据库(dbDEMC)中分析了食管癌组织和癌旁正常组织中miR-let-7a-5p的表达水平,在人类癌症miRNA的交互式分析和可视化数据库(CancerMIRNome)中,采用Kaplan-Meier生存曲线及对数秩检验探讨了食管癌组织中miR-let-7a-5p的表达水平与患者预后之间的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测人永生化食管上皮细胞SHEE和ESCC细胞系中miR-let-7a-5p的表达;利用慢病毒载体转染技术,构建miR-let-7a-5p过表达的稳定转染细胞株;分别采用EdU细胞增殖实验、集落形成实验检测细胞增殖情况;细胞划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭。在dbDEMC和CancerMIRNome数据库中分析miR-let-7a-5p在食管癌患者外周血中的表达情况。在ENCORI、Diana Tarbase、miRDB数据库寻找miR-let-7a-5p的下游靶基因。Western blot法检测SNAP23蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验分析miR-let-7a-5p和SNAP23的靶向关系。结果:在食管癌组织中,miR-let-7a-5p的表达水平较癌旁正常组织降低,其表达水平与患者总生存期呈正相关(HR=0.57,P<0.05)。与人永生化食管上皮细胞SHEE相比,ESCC细胞系中miR-let-7a-5p呈低表达(P<0.01)。与对照组相比,增强miR-let-7a-5p表达后,ESCC细胞系TE-13的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05或P<0.01)。在ESCC患者的外周血中,miR-let-7a-5p的表达水平较健康对照组增加(P<0.01)。分泌蛋白SNAP23被预测出是miR-let-7a-5p的下游靶基因。过表达miR-let-7a-5p后SNAP23的蛋白表达水平下降(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7a-5p可下调野生型-SNAP23的相对荧光素酶活性(P<0.01)。结论:miR-let-7a-5p通过靶向下调SNAP23的表达,抑制ESCC的恶性生物学行为。

miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖

目的 研究缺氧在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖中的作用及机制。方法 采用HE染色法检测RA和对照骨关节炎(osteoarthritis,OA)滑膜组织FLS增生情况。分离原代RA-FLS并采用流式细胞术鉴定;将RA-FLS置于常氧(21%O_(2))或缺氧环境(3%O_(2))中培养,CCK-8法检测细胞增殖水平的变化,RT-PCR检测miR-let-7d表达的变化。通过类似物或抑制物改变miR-let-7d的表达,观察其对RA-FLS增殖、凋亡的影响;探究miR-let-7d靶基因在缺氧诱导的RA-FLS增殖中的作用。结果 FLS在RA滑膜中增生明显,在缺氧环境下RA-FLS增殖加快,miR-let-7d表达水平降低;过表达miR-let-7d抑制RA-FLS增殖,但对细胞凋亡水平无明显影响;进一步的研究证实miR-let-7d靶基因HMGA2参与缺氧诱导的RA-FLS增殖。结论 miR-let-7d-HMGA2通路调控缺氧诱导的RA-FLS增殖。

子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

食管鳞癌中microRNA let-7a-3甲基化与IGF-Ⅱ的相关性

目的探讨食管鳞癌组织中microRNA let-7a-3甲基化状态与血浆中类胰岛素样生长因子2(Insulin like growth factor 2,IGF-Ⅱ)表达的相关性。方法采用甲基化特异性PCR法(Methylation specific PCR,qMSP)检测83例食管癌及相对应的癌旁正常组织中let-7a-3甲基化状态,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中IGF-Ⅱ的表达水平。结果83例食管鳞癌患者癌组织中的microRNA let-7a-3甲基化程度显著高于癌旁正常组织(P<0.001)。83例食管鳞癌患者血浆中IGF-Ⅱ的表达水平与let-7a-3基因的甲基化程度总体上呈正相关,具有统计学意义(r=0.600,P<0.001)。结论microRNA let-7a-3可能通过对下游分子的甲基化调控参与食管鳞癌的发生发展,这对了解食管鳞癌形成的机制具有重要意义,可为食管鳞癌的诊断和预后提供依据。

Ⅰ型子宫内膜癌中miRNA Let-7的表达及意义

目的 检测Ⅰ型子宫内膜癌(endometrioid adenocarcinoma,EA)组织中miRNA Let-7的表达,并探讨其与患者临床病理特征及预后的关系;方法 选取我院2016年1月至2022年12月期间,经病理确诊和根治手术切除的EA患者59例作为病例组,及同期因子宫肌瘤或肌腺瘤切除的15例子宫组织作为对照组;收集肿瘤患者的临床病理参数及术后随访资料,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测miRNA Let-7的表达以及在不同临床病理特征间的差异;采用Kaplan-Meier法分析不同miRNA Let-7表达水平与患者生存时间关系、Cox回归模型对影响EA预后的危险因素进行分析;结果 74例检测样本中,病例组的miRNA Let-7表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(t=3.232,P<0.05);且病例组中,复发患者的miRNA Let-7表达明显低于未复发患者;绘制miRNA Let-7预测EA发生的ROC曲线分析显示,当约登指数最大时,对应的miRNA Let-7值为0.831,其诊断灵敏度为0.881,特异度为0.95;EA患者中miRNA Let-7的表达与肿瘤的临床分期、肌层浸润、淋巴结转移及复发情况有关(均P<0.05);由Log-rank检验可见,临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移情况以及miRNA Let-7表达水平与患者的预后生存相关(均P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线图可见miRNA Let-7低表达组的生存时间显著低于高表达组(P<0.05);多因素Cox风险分析结果显示,肿瘤的组织学级别、淋巴结转移以及miRNA Let-7表达水平是影响EA患者生存时间的独立危险因素。结论 miRNA Let-7的表达水平与Ⅰ型子宫内膜癌的恶性程度有关,并且是患者复发的独立危险因素,对于评估患者的预后复发具有较好的敏感度和特异度,有可能成为Ⅰ型子宫内膜癌鉴别诊断和复发的新标记物。

血清标志物联合miRNA-let-7对胶质母细胞瘤化疗效果及预后的评估价值

目的分析miRNA-let-7联合血清标志物对多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者化疗效果和预后的预测效果。方法收集25例GBM患者临床资料。纳入同期20名健康志愿者作为对照组。收集患者空腹血清样本,通过实时定量PCR分析血清样本中let-7b、let-7d以及let-7e水平。结果与对照组相比,GBM组患者外周血中let-7b(192.50±18.71 vs.98.13±11.68,t=6.42,P<0.0001)、let-7d(82.97±14.14 vs.44.62±6.83,t=2.41,P<0.05)以及let-7e(139.60±14.62 vs.75.86±9.72,t=5.45,P<0.001)水平显著降低。let-7b、let-7e水平在≥60岁、肿瘤大小≥5 cm、非额颞叶病变、ECOG为2、仅接受活检的GBM患者中显著降低(P<0.05)。此外,Let-7b、Let-7e水平在不同治疗反应的GBM患者中差异有统计学意义(P<0.05)。let-7b和let-7e高表达GBM患者的OS显著高于let-7b和let-7e低表达患者(P<0.05)。结论血液样品中的let-7b、let-7e表达可用于监测GBM、预测患者对治疗的反应和预后。

EHD2、miR-let-7c和lncRNA FOXD2-AS1在人喉鳞状细胞癌组织中的表达及其关联性分析

目的:探讨Eps15同源结构域蛋白2 (EHD2)、微小RNA let-7c (miR-let-7c)和长链非编码RNA (lncRNA)FOXD2-AS1在喉鳞状细胞癌(LSCC)组织中的表达水平,阐明EHD2/miRlet-7c/FOXD2-AS1信号轴与LSCC发生的关联性。方法:收集40例LSCC患者的癌组织标本,按照病理类型分为低级别组(中或高分化,32例)和高级别组(低分化,8例),按照肿瘤淋巴结转移(TNM)临床分期分为TNM早期组(Ⅰ-Ⅱ期,13例)和TNM晚期组(Ⅲ-Ⅳ期,27例),按照有无淋巴结转移分为转移组(21例)和无转移组(19例)。另取40例对应癌旁正常组织标本作为对照组。采用免疫组织化学法检测各组标本中EHD2表达情况,分析其与LSCC患者临床病理参数之间的关系,采用生物信息学方法筛选出miR-let-7c作为候选微小RNA (miRNA),与其启动子区域存在结合位点的FOXD2-AS1作为候选lncRNA。取10对新鲜的LSCC组织标本和癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组样本中EHD2 mRNA、miRNA-let-7c和FOXD2-AS1表达水平,并验证其关联性。结果:与癌旁正常组织比较,LSCC组织中EHD2表达水平明显降低(P<0.01),且TNM早期组患者LSCC组织中EHD2阳性表达率明显高于TNM晚期组(P<0.05),病理类别和有无淋巴结转移与EHD2表达无明显关联(P>0.05)。与癌旁正常组织比较,LSCC组织中miR-let-7c表达水平明显降低(P<0.01),FOXD2-AS1表达水平明显升高(P<0.05)。LSCC组织中FOXD2-AS1与miR-let-7c表达水平呈负相关关系(r=-0.67,P<0.05),miR-let-7c与EHD2 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.83,P<0.01)。结论:EHD2和miR-let-7c在LSCC组织中呈低表达,可能是新的抑癌基因;FOXD2-AS1在LSCC组织中高表达,可能是新的原癌基因;FOXD2-AS1/miR-let-7c/EHD2信号轴可能参与了LSCC的发生发展。

let-7i-5p在肿瘤中的研究进展

let-7i-5p是非编码小分子RNA(miRNA)中的一员,它通过多靶点和信号通路来抑制肿瘤的生长、增殖和迁移,还具有调节肿瘤微环境延缓癌症进展和改善肿瘤耐药的作用。文章综述了let-7i-5p在肝癌、乳腺癌、结直肠癌、宫颈癌、鼻咽癌、肾癌和胶质母细胞瘤中的研究进展。有望发掘let-7i-5p成为新肿瘤标志物,为肿瘤的防治提供新策略。

miR-Let-7b靶向LOX-1减轻子宫内膜纤维化的机制

目的:检测miR-Let-7b及LOX-1在纤维化子宫内膜中的表达,分析miR-Let-7b靶向LOX-1在减轻子宫内膜纤维化中的作用。方法:分别构建人子宫内膜间质细胞株(hESCs)纤维化模型(TGF-β1-hESCs)及小鼠宫腔粘连模型,qRT-PCR法检测miR-Let-7b及LOX-1表达。慢病毒转染法将TGF-β1-hESCs细胞分为NC组、miR-con组、miR-Let-7bmimic组、miR-Let-7b+pcDNA组和miR-Let-7b+pcDNA-LOX-1组,CCK-8法、EdU法及细胞划痕试验检测各组细胞增殖、迁移能力。将小鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组(宫腔注射miR-Let-7bmimic),HE染色观察子宫内膜病理变化,Masson染色法观察子宫内膜纤维化面积,Westernbloting检测各组细胞及子宫内膜组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达。双荧光素酶报告基因法验证miR-Let-7b和LOX-1间的靶向关系。结果:TGF-β1-hESCs细胞及宫腔粘连小鼠子宫内膜组织中miR-Let-7b均呈低表达,而LOX-1呈高表达,差异显著(P<0.001)。miR-Let-7bmimic组细胞活力、EdU阳性率、细胞迁移率均低于NC组及miR-con组,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-Let-7b+pcDNA-LOX-1组细胞活力、EdU阳性率、细胞迁移率均高于miR-Let-7b+pcDNA组,细胞内α-SMA、E-cadherin、FN蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-Let-7b与WT-LOX-1共转染后,miR-Let-7bmimic组细胞荧光素酶活性明显低于miR-con组,差异显著(P<0.001)。与模型组相比,治疗组小鼠子宫内膜腺体数量增多,纤维化面积减少,α-SMA、E-cadherin、FN蛋白表达降低,差异明显(P<0.05)。结论:miR-Let-7b在纤维化子宫内膜中低表达,而LOX-1呈高表达,miR-Let-7b可靶向LOX-1减轻子宫内膜纤维化,机制可能与抑制上皮间充质转化有关。

地西泮通过let-7a-5p/MYD88轴抑制LPS诱导的细胞焦亡和炎症从而缓解小鼠肺纤维化

目的探讨地西泮(Dia)如何通过介导let-7a-5p与MYD88之间的靶向调控作用,来减轻由脂多糖(LPS)诱导的细胞焦亡和炎症反应,从而缓解肺纤维化的进程。方法MRC-5细胞分为正常对照组(NC)、LPS组、LPS+Dia组,LPS+Dia+let-7a-5p mimic组、LPS+Dia+let-7a-5p mimic+pc-DNA-MYD88组。RT-qPCR检测let-7a-5p和MYD88的表达。ELISA检测炎症因子的表达,Western blotting检测纤维化和焦亡相关蛋白的表达。C57BL/6小鼠随机分为NC组、LPS组、LPS+Dia、LPS+Dia+let-7a-5p mimic组、LPS+Dia+ST2825(MYD88抑制剂)组、LPS+Dia+let-7a-5p mimic+pc-DNA-MYD88组。Masson染色观察小鼠肺纤维化,免疫荧光检测α-SMA的表达。结果与NC组比较,LPS组let-7a-5p的表达下调(P<0.01),MYD88的表达上调(P<0.01)。炎症相关因子IL-4、IL-6、TGF-β和TNF-α的浓度均升高(P<0.001),此外,纤维化相关蛋白Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA和细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD-N的表达量也升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+Dia组有效抑制了炎症相关因子、纤维化相关蛋白、细胞焦亡相关蛋白的表达。动物实验中,与LPS组相比,LPS+Dia组小鼠肺组织纤维化程度降低,α-SMA相对荧光密度降低(P<0.05)。此外,与LPS+Dia组相比,LPS+Dia+let-7a-5p mimic组或LPS+Dia+ST2825的处理进一步促进了Dia的作用(P<0.05)。而过表达MYD88又削弱了let-7a-5p mimic对Dia的作用(P<0.05)。结论Dia可以通过上调let-7a-5p的表达负调控MYD88抑制LPS诱导的细胞焦亡和炎症反应从而缓解肺纤维化。

敲低多房棘球蚴let-7-5p可抑制BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长

旨在明确敲低多房棘球蚴emu-let-7-5p对小鼠腹腔巨噬细胞极化和虫体生长的影响。构建表达多房棘球蚴emu-let-7-5p海绵序列的重组腺相关病毒载体,并在293T细胞上验证其抑制效果和特异性。70只清洁级BALB/c小鼠分别经尾静脉注射AAV8-si-let-7-5p、AAV8-control和PBS后两周,每组随机选取2只小鼠分别用Western blot和qRT-PCR分析肝组织中GFP、let-7-5p及其靶基因C/EBP δ的表达。随后,所有小鼠每只腹腔接种1 000个原头蚴,3个月后qRT-PCR检测腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p、C/EBP δ、M1型(IL-1β、iNOS和IL-6)和M2型(Arg-1、IL-4和IL-10)相关分子的转录水平,并统计各组小鼠多房棘球蚴的包囊重量和原头蚴数量。结果表明,注射后第15天,AAV8-si-let-7-5p成功靶向小鼠肝脏,并引起emu-let-7-5p的敲低和C/EBP δ的上调表达。感染后3个月,AAV8-si-let-7-5p组小鼠腹腔巨噬细胞emu-let-7-5p和M2型相关分子Arg-1均显著下调,而C/EBP δ和M1型相关分子IL-1β和iNOS均显著上调。此外,AAV8-si-let-7-5p组IL-4和IL-6下调表达,而IL-10上调表达,且小鼠肝脏包囊重量和原头蚴数量显著低于对照组。敲低多房棘球蚴感染小鼠体内emu-let-7-5p,可促进C/EBP δ的表达,进而抑制M2型极化和虫体生长。

miR-let-7a对脂磷壁酸诱导炎性牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用

[目的]研究微小RNA let-7a(microRNA let-7a,miR-let-7a)对脂磷壁酸(Lipoteichoic acid,LTA)诱导的炎性奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)的增殖和凋亡作用。[方法]通过实时荧光定量PCR(Quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、实时细胞分析仪和流式细胞术检测过表达和抑制表达miR-let-7a在炎性MAC-T中的影响。[结果]qRT-PCR检测结果显示,转染miR-let-7a模拟物会使炎性MAC-T细胞中miR-let-7a的表达量极显著上调(P<0.001),转染miR-let-7a抑制剂会使细胞中miR-let-7a的表达量极显著下降(P<0.001);RTCA结果显示,转染miR-let-7a模拟物能明显促进MAC-T细胞增殖,转染miR-let-7a抑制物会使MAC-T细胞的增殖受到抑制;流式细胞术结果显示,转染miR-let-7a模拟物的MAC-T细胞的凋亡率显著降低(P<0.01);而转染miR-let-7a抑制剂则与之相反,MAC-T细胞的凋亡率显著升高(P<0.01)。即过表达miR-let-7a可以促进MAC-T细胞增殖,并降低细胞的凋亡率。而抑制表达miR-let-7a的作用与之相反,抑制表达miR-let-7a使MAC-T细胞的增殖下降,细胞的凋亡率增大。[结论]miR-let-7a是一种抑制炎症调节因子,其过表达可以缓解奶牛乳腺炎,为阐明奶牛乳腺炎的分子调控机制奠定基础。

重度子痫前期患者血清miR-134-5p和Let-7a表达水平及临床意义

目的 分析重度子痫前期(Severe preeclampsia, SPE)患者血清微小RNA(microRNA,miR)-134-5p和Let-7a表达水平及临床意义。方法 选取已确诊妊娠高血压孕妇100例为研究对象,其中子痫前期(preeclampsia, PE)孕妇40例、SPE孕妇60例。同期在本院孕检的正常妊娠女性100例为对照组。实时荧光定量PCR(real-time quantitative pcr, qRT-PCR)法检测血清中miR-134-5p、Let-7a相对表达水平;Pearson法进行相关性分析;多因素Logistic回归分析SPE的影响因素。结果 对照组、PE组、SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平比较,差异有统计学意义(F=288.012、251.780,P<0.001);其中,PE组、SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平均高于对照组(P<0.05),SPE组血清中miR-134-5p、Let-7a水平均高于PE组(P<0.05)。PE组和SPE组收缩压、舒张压、尿蛋白、肌酐、乳酸脱氢酶、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、平均血小板体积(mean platelet volume, MPV)、白蛋白(albumin, ALB)水平、新生儿身长、新生儿体重比较差异有统计学意义(均P<0.05)。PE患者血清中miR-134-5p表达水平与新生儿身长呈负相关(r=-0.608,P<0.05),与收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶呈正相关(r=0.613、0.548、0.635,均P<0.05);Let-7a表达水平与新生儿身长呈负相关(r=-0.587,P<0.05),与收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶呈正相关(r=0.624、0.571、0.478,均P<0.05),PE患者血清miR-134-5p、Let-7a表达水平呈显著正相关(r=0.623,P<0.001)。收缩压(OR=1.527,95%CI:1.042~2.238)、尿蛋白(OR=1.825,95%CI:1.010~3.299)、miR-134-5p(OR=1.467,95%CI:1.023~2.104)、Let-7a(OR=1.523,95%CI:1.010~2.299)均是SPE发生的危险因素(P<0.05)。结论 SPE孕妇血清miR-134-5p、Let-7a水平显著升高,miR-134-5p、Let-7a与新生儿身长、收缩压、尿蛋白、乳酸脱氢酶具有相关性,是SPE发生的影响因素。

基于生物信息学探索let-7c-5p通过靶向OLFM4参与支气管哮喘疾病进展研究

目的基于生物信息学探索let-7c-5p通过靶向OLFM4参与支气管哮喘疾病进展。方法选取基因表达公共数据库(GEO)中芯片数据集GSE207751和GEO222894,采用R软件的“Limma”和“DESeq2”软件包分析2个数据集中的差异表达基因(DEGs)和差异miRNA。利用hclust函数进行WCGNA分析。应用“ClusterProfiler”软件包进行基因本体(GO)功能注释富集分析和京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析,STRING数据库建立蛋白互作网络(PPI网络),Cytoscape筛选严重哮喘患者的核心基因。miRWalk、miRBase和miRTarBase数据库用于靶基因的miRNA预测。结果分析获得80个DEGs,包括上调的OLFM4,进行WCGNA分析后发现和哮喘严重程度相关的Darked模块基因24个,之后进行PPI网格构建和mRNA-miRNA预测筛选出4个核心上调基因(包括OLFM4)和6个miRNA(包括hsa-let-7c-5p)。分析获得98个差异表达miRNA,其中上调5个,下调93个。进行轻度哮喘患者和重度哮喘患者差异miRNA交叉分析发现,let-7c-5p在轻度哮喘患者和重度哮喘患者中表达下调。结论研究多重验证了在哮喘患者中,let-7c-5p通过调控OLFM4影响哮喘的气道炎症和气道重塑,参与哮喘疾病进展,有利于了解哮喘疾病状态进展的潜在分子机制,同时验证了let-7c-5p成为哮喘潜在生物标志物的潜力,为进一步研究哮喘疾病进展提供理论基础。

Let-7c靶向IGF2BP2调控人牙髓干细胞增殖的分子机制

目的:探讨let-7c过表达对人类牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖的影响及其作用机制。方法:分离培养hDPSCs,应用let-7c模拟物和抑制剂转染hDPSCs。利用qRT-PCR检测转染效率,利用CCK-8检测细胞增殖情况。应用流式细胞术检测细胞周期,通过蛋白质印迹分析let-7c抑制细胞增殖的作用机制。应用小干扰RNA(small interfer RNA,siRNA)瞬时转染方法构建针对胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2,IGF2BP2)基因的细胞模型,通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验探讨分析let-7c是否直接靶向IGF2BP2。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Let-7c过表达抑制细胞增殖。Let-7c通过调节S和G2/M周期阻断细胞增殖,直接与hDPSCs中与细胞周期调控有关的一组信使RNA(messenger RNA,mRNA)序列IGF2BP2结合,靶向抑制IGF2BP2的表达,两者的表达水平呈现负相关关系。结论:Let-7c通过靶向抑制IGF2BP2表达,抑制hDPSCs增殖。

美沙拉嗪对小鼠溃疡性结肠炎模型中Let-7i-5p/TLR4/MyD88依赖性通路的调控机制

目的:本研究旨在探讨美沙拉嗪(MSLZ)对小鼠2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)模型中Let-7i-5p和TLR4/MyD88依赖通路的调控机制。方法:采用TNBS/乙醇结肠法建立溃疡性结肠炎(UC)模型。将44只雄性小鼠随机分为对照组、模型组、MSLZ组和Let-7i-5p抑制剂组,每组11只。小鼠灌胃或腹腔注射相应的药物或生理盐水,连续14d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平。在显微镜下,用苏木精和伊红(HE)染色观察结肠组织的病理病变。分别采用qRT-PCR,Western blot和免疫组化方法检测小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因的mRNA和蛋白水平。通过ELISA检测小鼠血清中TNF-α和IL-1β的表达水平。结果:根据疾病活跃指数(DAI)、结肠损伤和病理病变的评分,成功构建了小鼠UC模型。模型组小鼠结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达水平显著高于对照组(P<0.0001)。与模型组相比,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制Let-7i-5p的表达(P<0.0001)。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中TLR4/MyD88依赖通路相关基因(包括TLR4、MyD88、TRAF-6和NF-κB)的mRNA和蛋白水平显著上调。MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能显著抑制这些基因的表达,且MSLZ的抑制作用略强于Let-7i-5p抑制剂。与对照组相比,模型组小鼠结肠组织中IL-1β和TNF-α的mRNA水平和血清中的蛋白水平显著上调,MSLZ和Let-7i-5p抑制剂处理均能抑制IL-1β和TNF-α的表达水平。结论:在TNBS/乙醇诱导的UC小鼠模型中,MSLZ可以抑制结肠组织中和血清中Let-7i-5p的表达。此外,MSLZ还通过抑制UC小鼠的TLR4/MyD88依赖性通路来抑制炎症因子的释放。

Hsa-let-7b-5p抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌临床诊断和靶向治疗中的价值。方法收集2020年9月-10月的13对哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理类型相同的非小细胞肺癌癌组织及其癌旁组织,通过RNA-Seq获得差异表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证候选miRNA在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达水平。通过CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验验证miRNA对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。利用MiRDB、TarBase和ENCORI数据库预测靶基因,并利用FunRich工具进行基因富集分析。结果与癌旁组织及正常支气管上皮细胞系(Human bronchial epithelial cell,HBE)相比,hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌组织及非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H358和H460)中低表达(P<0.05)。hsa-let-7b-5p的高表达可以抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)。靶基因预测及富集分析结果显示hsa-let-7b-5p的378个靶基因及其相关基因中,147个基因与hsa-let-7b-5p的表达呈负相关(P<0.05)。结论Hsa-let-7b-5p对非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭有抑制作用。

Let-7c-5p在食管鳞癌中的表达及生物学功能

目的探讨食管鳞癌(ESCC)中let-7c-5p的表达,同时分析let-7c-5p对ESCC细胞KYSE150增殖与迁移的影响。方法收集本院食管鳞癌组织标本42例,癌旁组织作为对照组,经由qRT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)测定ESCC组织与其相邻癌旁组织内let-7c-5p表达量;经由脂质体Lipofectamine 2000对KYSE150进行转染,qRT-PCR测定let-7c-5p于转染KYSE150细胞内的表达,借助CCK-8技术测定转染后细胞的增殖情况;通过伤口愈合试验与Transwell迁移试验对细胞迁移活性展开测定。结果ESCC组织内let-7c-5p mRNA表达量较其癌旁正常组织明显偏低(P=0.000);经过KYSE150细胞转染,在表达量上,let-7c-5p mimics较NC组明显偏高(P<0.05);转染组KYSE150增殖功能显示大幅下降,其迁移活性也大幅受抑。结论let-7c-5p在食管鳞癌中呈低表达,上调其表达能够明显抑制食管鳞癌KYSE150细胞增殖和抑制其迁移,为食管鳞癌患者的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。