梅花鹿DLX5基因克隆及表达分析

为研究梅花鹿(Cervus nippon)DLX5基因的结构和功能,进一步探究其与梅花鹿茸角骨化机制间的关系,采用RT-PCR技术对梅花鹿DLX5基因进行克隆,获得包含全部编码区的c DNA序列,对该基因的氨基酸序列进行生物信息学分析并构建系统进化树,通过KEGG富集分析其信号通路,运用实时荧光定量RT-PCR检测该基因在鹿茸生长不同时期的表达情况。结果表明:梅花鹿DLX5基因编码区长为870 bp,共编码289个氨基酸。DLX5蛋白为可溶性的不稳定蛋白,有2个保守结构域,主要定位于细胞核。梅花鹿DLX5蛋白与许多不同物种来源的DLX5蛋白氨基酸序列有较高相似度,比较保守。DLX5蛋白二级结构中无规则卷曲占比最大(78.89%),其后依次是α-螺旋、延伸链,占比分别为16.96%和4.15%。DLX5基因主要的作用通路为TGFβ信号通路、MAPK信号通路和Wnt信号通路等。实时荧光定量RT-PCR结果表明,DLX5基因在鹿茸生长后期(三杈茸)表达量显著增高,这种上调表达暗示了其在鹿茸骨化过程中发挥重要作用,说明其可能是鹿茸骨化相关候选基因。

不同发情处理方案对梅花鹿同期发情效果的影响

为探索梅花鹿(Cervus nippon)最佳同期发情方案,在吉林省双阳鹿业良种繁育有限公司挑选163只健康、发情周期正常、繁殖机能良好的供试母鹿随机分为3组:A组采用国产阴道孕酮栓(CIDR),B组采用进口CIDR,C组采用二次前列腺素(PG),均辅以孕马血清促性腺激素(PMSG)法处理。另挑选100只供试母鹿随机均分为4组,采用筛选出的较优方案结合不同剂量PMSG法处理(Ⅰ组100 IU、Ⅱ组300 IU、Ⅲ组500 IU、Ⅳ组700 IU),探析不同发情处理方案对梅花鹿母鹿发情效果、发情时间分布、受胎率和双胎率的影响以及不同PMSG剂量对母鹿发情受胎的影响。结果表明:A、B组同期发情率差异不显著,但A、B组同期发情率分别较C组高23.5%和33.3%(p<0.01),且A组掉栓率较B组高8.8%(p<0.05);3种处理方案对发情时间分布的影响极显著(p<0.01);B组与A、C组比较,受胎率和产仔率分别高6.5%和9.8%(p>0.05),双胎率分别高13.4%和17.6%(p>0.05);采用进口CIDR辅以不同剂量PMSG法对梅花鹿进行同期发情处理,发现Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组同期发情率较Ⅰ组分别高36.0%、40.0%和48.0%(p<0.05),呈随PMSG剂量升高而升高的趋势,其他各组间差异不显著(p>0.05),但发情时间均集中在24~48 h,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组受胎率分别为46.2%、61.9%、59.1%和50.0%,呈先升高后下降的趋势(p>0.05)。综上所述,阴道埋栓的发情方案显著好于二次PG法,进口CIDR优于国产CIDR;进口CIDR+PMSG法的母鹿发情率和受胎率随PMSG剂量的增加而升高,但发情时间不受PMSG剂量的影响,PMSG适宜剂量为300 IU。

朱鹮(Nipponia nippon)栖息地质量的初步评价

本文应用地理信息系统，分析了朱（Ｎｉｐｐｏｎｉａｎｉｐｐｏｎ）栖息地洋县的地形、植被、水域和人为干扰的地理特征，根据朱的喜好将这４种景观因子对朱的适宜度进行量化，并把这４个图层叠加，得到栖息地对朱的综合适宜度。对比朱的实际分布，发现朱集中分布在适宜度较高的区域内，由此证明这４种景观因子对朱的重要性。另外，在部分高适宜度区域内从未发现朱，所以可能有其它因素影响朱的分布。

不同年限梅花鹿干扰对亚热带森林土壤和植物生物量的影响

有蹄类动物的采食、践踏、排泄等行为会影响森林土壤理化特性与植物群落特征。选取浙江清凉峰国家级自然保护区典型亚热带针阔混交林地,设置4个华南梅花鹿干扰处理(禁养,圈养10、15、20 a),以探讨华南梅花鹿圈养对亚热带林地土壤和植被功能的影响。结果表明:(1)随着华南梅花鹿圈养年限的增加,土壤pH、含水率、毛管孔隙度、有机质和阳离子交换量呈现降低的趋势,土壤容重、碱解氮、有效磷和速效钾呈现升高的趋势。(2)华南梅花鹿圈养对0—40 cm土层土壤容重、含水率、毛管孔隙度、有机质、阳离子交换量以及0—20 cm土层碱解氮和有效磷的影响显著,均为圈养20 a处理与对照处理之间差异性达到显著水平(P<0.05)。(3)华南梅花鹿干扰能显著降低林下植被的地上生物量(P<0.05)。研究结果揭示亚热带森林土壤-植被对梅花鹿干扰的响应特征,为探讨森林蹄类动物栖息地退化机制和优化区域生态恢复模式提供科学的数据与理论基础。

梅花鹿鹿茸顶端茸皮组织PIM1基因生物信息学及表达分析

为了研究梅花鹿(Cervus nippon)PIM1基因的结构和功能,利用RT-PCR技术扩增梅花鹿PIM1基因,获得该基因的cDNA序列,对PIM1基因及其蛋白的基本性质进行生物信息学分析,并根据PIM1蛋白的同源序列对比结果构建系统进化树,同时对PIM1基因在鹿茸生长前、中、后期顶端茸皮组织中的相对表达量进行检测。结果表明,梅花鹿PIM1基因的CDS序列全长942 bp,共编码313个氨基酸;PIM1蛋白是一种亲水性较强且无信号肽的不稳定蛋白,主要定位在细胞质和细胞核;同源性分析可知,梅花鹿PIM1蛋白与白尾鹿、黇鹿、马鹿的PIM1蛋白氨基酸序列相似度高达98.50%以上;PIM1蛋白的二级结构由43.45%的无规则卷曲、36.10%的α-螺旋、12.78%的延伸链以及7.67%的β-转角组成;实时荧光定量RT-PCR结果表明,PIM1基因在鹿茸生长后期的表达量极显著高于生长前期(P<0.01)和生长中期(P<0.01)。说明PIM1基因可能在梅花鹿鹿茸生长后期起着促进骨化的作用。

朱鹮源大肠埃希氏菌的耐药性及毒力基因与种系分型检测分析

为了解陕西圈养朱鹮源大肠埃希氏菌耐药性、系统进化分群、毒力基因及耐药基因携带情况,对采集自陕西省周至县32份朱鹮源肛拭子进行肠道细菌分离鉴定,采用微量肉汤稀释法测定9种抗菌药物对分离株的最小抑菌浓度(MIC),PCR检测毒力基因、耐药基因携带情况,采用三重PCR鉴定分离菌株的系统进化分群,并进行小鼠致病性试验。结果显示,在32份朱鹮源肛拭子中分离到大肠埃希氏菌15株,分离率为46.87%;分离菌株对氨苄西林100%耐药,对多西环素、恩诺沙星、头孢噻夫耐药率较高,对美罗培南、替加环素、黏菌素表现较高敏感,耐2种以上抗菌药物的菌株达100%;从分离菌株中检测到blaTEM、blaSHV、blaCTX-M等耐药基因的检出率分别为100%、93.3%、33.3%,phop、tetx3占比较高(66.67%、53.33%),未检测到cfr、tetx4耐药基因;分离菌株携带10种不同的毒力基因,未检测到hlyA、saf、cnf1、iutB、stx1、stx2、papC、FasA等8种毒力基因,其中etrA、aer、hlyE、ompA的检出率最高,均达到93.33%,其他依次为iutA(80%)、fimC(73.33%)、rfc(60%)、ompT(53.33%)、hlyF(46.67%)、Tsh(20%),且检测到9株分离菌株携带的rfc毒力基因。该批朱鹮源大肠埃希氏菌以B2型为主(占53.33%),其次为D型(占33.34%),A型仅占比13.33%,未检测到B1型;小鼠致病性试验表明,小鼠表现较轻的临床症状。结果表明,该批朱鹮源大肠埃希氏菌耐药现象较为严重,毒力基因与耐药基因在该批朱鹮中较流行,与其他动物相比,其种系分型较特殊。研究结果可为朱鹮源大肠杆菌病的防控、治疗及圈养朱鹮的放飞提供参考依据。

基于种群生存力分析的陕西铜川朱鹮再引入种群的可持续性及保护对策

种群生存力分析(population viability analysis,PVA)虽然已经在濒危物种的保护管理中得到广泛应用,但目前面临的严峻挑战是如何采用PVA分析影响濒危物种种群长期维持的内外因子。经过数十年的保护,朱鹮(Nipponia nippon)野生种群的数量已经从7只增长到约4 400只,若干再引入计划也分别在中国、日本和韩国相继实施。过去的研究表明,种群统计随机性、灾害和种群性比等因素是影响朱鹮野生种群稳定增长的主要因素,然而,对影响朱鹮再引入种群长期稳定维持的因素却知之甚少,这严重阻碍了在释放地开展具有针对性的优先保护计划。本研究在野外收集了2014—2023年铜川朱鹮再引入种群的生活史监测数据,利用基于个体的Vortex模型(Version 10.0),将朱鹮移动的适应模式与环境容纳量、死亡率、扩散、性比和灾害频率相结合,预测该种群的未来生存能力。结果发现,铜川朱鹮种群在未来100年内的存活概率为99.10%,种群规模估计值为508只,种群遗传多样性估计值为0.930 4。敏感性分析表明,种群大小和灭绝概率主要取决于环境容纳量、幼鸟死亡率和扩散存活率。因此,后续的保护措施应优先考虑如何提高与栖息地质量密切相关的环境容纳量、降低死亡率和提高扩散存活率。

基于宏基因组学的江西桃红岭梅花鹿潜在病原初步调查

近些年,江西桃红岭梅花鹿国家级自然保护区植被正向演替明显,大量梅花鹿(Cervus nippon)开始向保护区外围扩散和聚集,调查桃红岭梅花鹿潜在病原携带情况,有利于掌握其种群健康状况,进而制定精确的保护管理对策,因此在该保护区不同区域(核心区、缓冲区和实验区)采集梅花鹿新鲜粪便样品,并基于宏基因组测序技术分析其病原携带情况。结果表明:桃红岭梅花鹿携带病原微生物包括细菌、真菌、放线菌、支原体、衣原体和螺旋体,共34属63种,其中包含大量人兽共患病病原;病原丰度最高的5个属分别是拟梭菌属(Clostridioides)、李斯特菌属(Listeria)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、志贺氏菌属(Shigella)和沙门氏菌属(Salmonella),丰度最高的5个种分别是艰难拟梭菌(Clostridioides difficile)、单核增生李斯特氏菌(Listeria mono⁃cytogenes)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enter⁃itidis)和福氏志贺氏菌(Shigella flexneri);不同研究区域中,核心区梅花鹿携带病原数量显著低于缓冲区和实验区。以上结果表明,桃红岭梅花鹿携带有多种病原,存在一定疫病发生风险。建议在保护区核心区积极开展栖息地矮化工作,同时开展高危病原的持续性监测及预警,并加强对保护区外围扩散梅花鹿种群的保护管理。

浙江清凉峰华南梅花鹿与同域分布有蹄类动物时间生态位关系

为探究梅花鹿华东亚种(华南梅花鹿Cervus nippon kopschi)与同域分布有蹄类动物的日活动节律,及其在时间生态位上的分化,于2014年12月—2016年11月,在浙江清凉峰国家级自然保护区千顷塘区域采用1 km×1 km网格布设51台红外相机,对华南梅花鹿与其同域分布的有蹄类动物进行监测。通过核密度估计法对华南梅花鹿与同域分布的有蹄类的日活动节律、日活动节律季节性差异和重叠进行了分析。共收集到华南梅花鹿、小麂(Muntiacus reevesi)、野猪(Sus scrofa)和中华鬣羚(Capricornis milneedwardsii)4种有蹄类动物照片数据,其中小麂的相对多度指数最高(30.43),其次是华南梅花鹿(8.83)和野猪(7.47),中华鬣羚最低(0.02);除中华鬣羚外,华南梅花鹿与同域分布的小麂和野猪在日活动节律上表现出一致性,日活动曲线均呈双峰型,为典型的晨昏性动物;三者的日活动节律曲线差异显著,具有明显的日活动节律分化;华南梅花鹿与同域分布小麂和野猪的日活动节律存在季节性变化,春季,华南梅花鹿日活动节律相对平缓,小麂(05:00—07:00和17:00—19:00)和野猪(11:00—13:00和16:00—18:00)存在2个活动高峰,三者的日活动节律存在显著性差异;夏季,华南梅花鹿、小麂和野猪均存在2个活动高峰,华南梅花鹿与小麂(Δ=0.8194;P<0.001)、小麂与野猪(Δ=0.8212;P<0.001)之间的日活动节律差异显著,存在一定的分化;秋季和冬季,三者的日活动节律存在2个活动高峰,但相互之间无显著性差异。华南梅花鹿与同域分布有蹄类动物的日活动节律存在相对分化,季节性日活动节律受物种生理特点、食物利用及栖息环境的影响而变化。本研究可为华南梅花鹿与同域分布有蹄类动物的共存机制提供理论基础。

梅花鹿源彭氏变形杆菌F2d株基因组的测序分析

为探究鹿源彭氏变形杆菌(Proteus penneri)致病及耐药机制,利用二代测序技术对从云南野生动物园病死梅花鹿(Cervus nippon)肺组织中分离鉴定出的1株彭氏变形杆菌F2d株进行基因组测序,将获得的F2d株基因组序列注释到毒力因子、耐药基因和代谢通路等数据库中。毒力因子数据库注释结果显示,菌株含黏附、营养代谢、运动和免疫调节等类型毒力因子;耐药基因数据库注释结果显示,F2d株对β-内酰胺类、四环素类、黏菌素类和磺胺类等多种抗生素耐药,并且携带多种抗生素外排机制编码基因;代谢通路数据库注释结果显示,注释的基因富集在42个通路上,其中新陈代谢相关注释的基因数量最多,共有2250个基因分布在12个通路上。利用基因组测序技术分析鹿源彭氏杆菌F2d株致病性、耐药情况及代谢特点,可为预防彭氏变形杆菌感染和相关药物的研发提供理论依据。

朱鹮性别分子鉴定的研究进展

朱鹮(Nipponia nippon)为世界濒危物种,也是国家一级重点保护鸟类。虽然一系列的保护措施显著增加了朱鹮种群规模和分布区域,但近交衰退、低繁殖力和雏鸟高致残率等问题一直制约着朱鹮种群的发展。朱鹮由于雌雄同型,难以从外观区分性别,因此性别鉴定将对其人工繁殖具有重要意义。本文综述了朱鹮性别的分子鉴定方法,主要包括基于性染色体连锁的染色体解旋酶DNA结合蛋白CHD基因及EcoRⅠ片段的PCR鉴定方法,以期进行有效的人工繁育工作,实现对朱鹮种群的保护及规模重建。

河南董寨保护区再引入朱鹮种群数量和分布现状

2021年9—11月,对河南董寨国家级自然保护区再引入朱鹮(Nipponia nippon)的分布区和潜在分布区进行调查,共发现游荡期夜宿地17个,分布在河南罗山县12个、浉河区1个、光山县砖桥镇1个和湖北大悟县1个,11月朱鹮利用夜宿地15个。对这些夜宿地同步开展野外朱鹮种群数量调查,共统计到268只,其中84.33%的朱鹮种群分布在罗山县。最大夜宿集群数量为46只,集群超过15只的10个夜宿地停歇的朱鹮数量占总数的80.22%。结果表明,罗山县是再引入朱鹮的主要分布地,部分种群已出现向周边其他地区活动迁移和跳跃式向外扩散的现象。野外朱鹮种群中当年出生的幼鸟数量占20.52%,截至秋冬季,朱鹮幼鸟存活率为77.78%。建议加强管理保护区以外的朱鹮栖息地,尤其是再引入朱鹮的新扩散、新迁移地。同时,应与当地相关部门合作,优化朱鹮联合保护措施,对研究朱鹮习性特征,促进再引入朱鹮种群的扩大和复壮有重要意义。

朱■（Nipponianippon）种群生存力分析

到目前为止，只有一个野生朱群体幸存下来，而且它的种群大小自１９８１年重新发现以来，一直在２０只以下波动。本文应用种群生存力分析的方法，借助漩涡模型，根据朱１４年的种群数据，总结和预测了其种群动态，并着重研究了朱的濒危程度。结果显示，按过去１０余年的生存状况，朱在５０年内绝灭的可能性是９８．５％，平均绝灭时间为１５．７２年。现存种群数量很低，所以种群统计随机性对其命运有很大影响。灵敏度分析表明，当前的朱种群对意外死亡和生存环境的波动较为敏感。

“津田飞鸿”与日本的近代国家形象

津田梅子是近代日本女性教育家。1872年,梅子作为岩仓使团最年轻的成员之一负笈美国。日本派遣女学生留学美国的举动引发了美国舆论对日本女留学生的关注。此后美国报刊发表了津田父母与其美国监护人之间的往来信函(飞鸿),这进一步激发了美国舆论对日本近代化进程的报道热情。本文通过对相关往来信函内容的分析,可知“津田飞鸿”的发表是日本利用英美舆论的全球影响力,在近代国家形象展示上的最初尝试,一定程度上改善和提升了日本的近代国际形象,为随后的日美欧三方博弈提供了互信的基础。

朱鹮(Nipponia nippon)的古籍记载与地方名考释

查阅了大量古籍、地方志资料和鸟类文献,全面系统地总结了中国、日本以及俄罗斯(西伯利亚)在不同年代关于朱鹮的古籍记录、地方称呼及其变化。从中可以了解朱鹮的过去,如古代地理分布、生活习性、灭绝原因、相对数量以及分布地区的文化背景等。

R-Band of Northeastern Sika Deer (Cervus nippon hortulorum) Chromosomes

Objeclive The aim of this study was to investigate R-band of Cervus nippon hortulorum chromosomes and to provide references for genetic variation and gene location of Cervus nippon hortulorum. [Metbod] Cell division was synchronized by the pepripheral blood lymphocyte culture and the excessive dosage of thymine deoxyribonucleoside, and R-band of Cervus nippon hortulorum chromosomes was also analyzed by RBG-banding technique. Result The number of haploid chromosome banding increased to 400. The R-band of No. 1, No. 2, No. 3, No. 4, chromosome X and Y were almost just opposite to the high-resolution G band of them. The terminal of chromosomes except No. 21, No. 24 and No. 28 were all pos- itive deeply stained. E Conclusion] R-band of Cervus nippon hortulorum chromosomes can be manifested by RBG-binding technique.

冬末春初圈养梅花鹿健康与腹泻个体粪便菌群的比较分析

腹泻是制约梅花鹿(Cervus nippon)养殖发展的主要因素之一,通常与肠道菌群失衡有关,而健康与腹泻梅花鹿个体菌群组成变化尚不清楚。为探究健康与腹泻梅花鹿肠道菌群差异,分析梅花鹿腹泻原因,以圈养雄性梅花鹿为实验对象,采集正常及腹泻梅花鹿粪便共18份,通过16S rRNA基因测序进行比较分析。研究结果表明,腹泻组菌群丰度及多样性较健康组均有所下降。在门至属水平,腹泻组理研菌科(Rikenellaceae)、克里斯滕森菌科(Christensenellaceae)等有益菌丰度下降,Treponema_2菌属等促炎菌丰度上升。此外,瘤胃球菌科UCG-014菌属(Ruminococcaceae_UCG-014)和理研菌科RC9菌属(Rikenellaceae_RC9_gut_group)在健康组中显著富集;疣微菌门(Verrucomicrobia)、拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)、阿克曼氏菌属(Akkermansia)在腹泻组显著富集。腹泻梅花鹿与健康梅花鹿粪便菌群组成和多样性存在显著差异,疣微菌门丰度升高可能是导致梅花鹿腹泻的一个原因。

黑龙江省老爷岭南部东北梅花鹿栖息地适宜性评价及廊道构建

东北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)在我国主要分布区为黑龙江省老爷岭南部,开展栖息地适宜性评价和构建连接核心栖息地斑块的生态廊道是对该物种保护和恢复的基础。本研究于2018—2021年,通过大样方调查和相机监测的方法收集到763个梅花鹿出现位点,利用最大熵(Maximum entropy,MaxEnt)模型对该地区梅花鹿栖息地进行适宜性评价,基于最小成本路径(Least-cost path,LCP)分析方法识别并规划梅花鹿的迁移廊道。MaxEnt模型对环境变量预测的贡献率表明:河流、林间小道、常绿针叶林、居民区和公路对模型累积贡献率达77.3%,是影响梅花鹿分布的关键因子。栖息地适宜性分析结果表明,黑龙江省老爷岭南部梅花鹿适宜栖息地面积为1055.62 km^(2),占研究区域面积的27.38%。适宜栖息地主要集中分布于西南部的穆棱东北红豆杉国家级自然保护区和东部的东宁朝阳沟林场、绥阳三岔河和暖泉河林场,而研究区域中部适宜栖息地破碎化严重,且呈条带状分布。适宜栖息地面积的减少以及破碎化可能是影响野生梅花鹿种群恢复的关键因素。基于栖息地适宜性分析结果和梅花鹿种群分布情况共确定总面积为705.22 km^(2)的4块梅花鹿核心栖息地斑块,构建总长度为84.43 km、最小宽度为600 m的3条适宜梅花鹿迁移的生态廊道。本研究成果可为野生动物保护部门开展野生东北梅花鹿种群恢复提供科学依据,亦为推动生物多样性保护服务。

朱鹮源大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏检测

为初步了解朱鹮肠道正常菌群的组成,并对其可能发生的疾病进行用药监测及预防,对采集自成年健康朱鹮的11份肛拭子进行了大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性检测。结果显示,从11只朱鹮肛拭子中分离到9株大肠埃希氏菌、7株肺炎克雷伯氏菌和4株A型产气荚膜梭菌,分离率分别为81.8%、63.6%和36.4%。药敏试验显示,大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对磺胺异噁唑、青霉素、氨苄西林、四环素和多西环素等药物的耐药性较强,产气荚膜梭菌仅对磺胺类药物表现出较强耐药性。初步鉴定朱鹮的肠道正常菌群中存在大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和产气荚膜梭菌,并检测分析了各菌株的耐药规律,为进一步研究朱鹮肠道正常菌群结构和防控朱鹮消化道疾病提供了参考依据。

圈养梅花鹿肠道菌群组成的性别差异

为探究圈养梅花鹿(Cervus nippon)肠道菌群的结构、多样性以及肠道菌群组成的性别差异,利用Illumina MiSeq高通量测序平台对10只圈养健康梅花鹿粪便中的细菌16S rRNA V3—V4区扩增子进行PCR扩增,采用生物信息学手段以性别作为分组因素,分析雄、雌圈养梅花鹿肠道菌群的结构、多样性和差异物种。结果显示:在门水平上,圈养梅花鹿肠道菌群的优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes;雄性61.69%,雌性58.23%)和拟杆菌门(Bacteroidetes;雄性27.40%,雌性31.19%);在属水平上,优势菌属为拟杆菌属(Bacteroides;雄性4.60%,雌性6.13%)和梭菌属(Clostridium_IV;雄性3.42%,雌性3.25%)。雄、雌圈养梅花鹿肠道菌群的α多样性无显著差异(p>0.05)。β多样性分析表明,不同性别梅花鹿的肠道菌群组成相似度较高,且组间不存在显著差异(p>0.05)。STAMP和LEfSe分析表明,雌性圈养梅花鹿中起重要作用的菌群为拟杆菌门(LDA值>4,p<0.05)。研究表明,圈养梅花鹿肠道菌群结构及多样性性别间无显著差异,但雄、雌梅花鹿肠道中个别菌门、菌属的分布存在一定差异,拟杆菌门受宿主性别影响较大。