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针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 乔思娜 李丽薇 +8 位作者 赵款 高飞 周艳君 姜一峰 童武 赵冉 童光志 李国新 董世山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期67-72,共6页
为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异... 为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示,本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10^(11)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-2.797,检测下限为10^(2)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.53774%,重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) k205r基因 荧光定量PCr 检测方法
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基于4R理论对“K12线上教育”营销策略的研究——以作业帮为例
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作者 何幸超 《电子商务评论》 2024年第3期4024-4030,共7页
“K12线上教育”近年来发展迅猛,但一直存在问题。本文以作业帮为例,运用4R营销理论研究该行业的营销策略,寻找其问题所在,并根据理论提出优化策略,尝试为行业健康发展寻找正确方向。研究表明,K12线上教育行业要让营销策略以学习服务为... “K12线上教育”近年来发展迅猛,但一直存在问题。本文以作业帮为例,运用4R营销理论研究该行业的营销策略,寻找其问题所在,并根据理论提出优化策略,尝试为行业健康发展寻找正确方向。研究表明,K12线上教育行业要让营销策略以学习服务为中心、以教育服务为基石。降低行业的功利性、淡化营销色彩、专注教育本身、与用户互利共赢,是K12线上教育行业健康发展的必由之路。 展开更多
关键词 k12线上教育 4r理论 作业帮 营销策略
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基于迁移学习与改进的Mask R-CNN液晶屏缺陷检测方法
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作者 王远志 范旭辉 《安庆师范大学学报(自然科学版)》 2024年第1期78-82,97,共6页
针对液晶屏生产过程中出现的表面划痕、脏点、裂痕等细微缺陷,在有限数据集下探寻一种既能提高液晶屏表面缺陷的检测精度和速率又能满足实际工厂检测要求的检测方法,意义重大。基于此,本文提出一种基于迁移学习与改进的Mask R-CNN液晶... 针对液晶屏生产过程中出现的表面划痕、脏点、裂痕等细微缺陷,在有限数据集下探寻一种既能提高液晶屏表面缺陷的检测精度和速率又能满足实际工厂检测要求的检测方法,意义重大。基于此,本文提出一种基于迁移学习与改进的Mask R-CNN液晶屏缺陷检测方法,可解决传统的图像缺陷检测方法无法有效利用特征信息进行高精度检测与漏检的问题。设计K-means算法对缺陷液晶屏标注框进行聚类以获得合适的长宽比和锚框个数,并对改进的Mask RCNN模型应用本文数据集对缺陷区域特征提取并进行训练分类。为加速模型收敛,利用迁移学习思想将DAGM 2007数据集在本文改进模型上预训练并得到最优权重且迁移到液晶屏缺陷检测任务中。同时与主要目标检测方法进行对比,结果表明:通过引入迁移学习与改进的Mask R-CNN方法,能在样本较少的情况下准确识别背景复杂且微小瑕疵缺陷,测试集缺陷识别达到95.25%,较改进前综合提升5%。 展开更多
关键词 目标检测 迁移学习 k-MEANS Mask r-CNN
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基于IGF-1R/PI3K/AKT的益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影响及作用机制研究
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作者 徐丹 荆晶 +4 位作者 李争 王晶 姜敏 王益德 张艳丽 《世界中医药》 CAS 2023年第1期81-86,共6页
目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建... 目的:益气固表丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)有明显的治疗作用,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨益气固表丸对脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治疗作用机制。方法:通过大鼠气管内灌注LPS和吸入香烟烟雾构建慢性阻塞性肺病模型,同时给予模型大鼠低、中、高剂量益气固表丸治疗14 d。观察呼吸参数及肺组织病理变化。采用酶联免疫吸附试验测定支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠肺组织样品中胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)/PI3K/AKT信号通路组分的磷酸化状态。结果:与对照组和低剂量益气组比较,大剂量益气固表丸治疗可显著改善COPD大鼠呼吸参数,减轻肺损伤和炎症,降低BALF和血清炎症介质水平。此外,高剂量益气固表丸干预的COPD大鼠肺组织标本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平显著降低。结论:益气固表丸对COPD有明显的治疗作用,可能与靶向IGF-1R/PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 益气固表丸 脂多糖 慢性阻塞性肺疾病 IGF-1r/PI3k/AkT信号通路 作用机制 胰岛素样生长因子1受体 白细胞介素-1β 白细胞介素-10
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IGF1R/PI3K/Akt通路及其调控对非小细胞肺癌血管生成拟态形成影响的研究
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作者 李荣宾 黄延延 +1 位作者 林贤宾 杨建胜 《福建医药杂志》 CAS 2023年第3期112-115,共4页
目的为非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗探索一个潜在的分子靶标.方法通过qPCR、Western blot、免疫组化检测NSCLC组织和癌旁组织KLF16、IGF1R表达情况;通过抑制IGF1R/PI3K/Akt通路活化,检测相关靶标MMP2和MMP9的表达;通过IGF1R/PI3K/Akt通路... 目的为非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗探索一个潜在的分子靶标.方法通过qPCR、Western blot、免疫组化检测NSCLC组织和癌旁组织KLF16、IGF1R表达情况;通过抑制IGF1R/PI3K/Akt通路活化,检测相关靶标MMP2和MMP9的表达;通过IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预血管生成拟态(VM)形成.结果与癌旁组织相比,免疫组化、Western blot和qPCR提示,KLF16在NSCLC组织中表达降低,且随着NSCLC级别提高,表达量递减.NSCLC组织中存在明显IGF1R阳性,且IGF1R阳性表达量随着NSCLC级别增高而递增.同时,Western blot和Matrigel三维细胞培养结果表明,随着IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂浓度增加,IGF1R/PI3K/Akt通路相关蛋白质、MMP2、MMP9表达水平也随之降低,肿瘤VM形成随之减少.结论NSCLC VM的形成与IGF1R/PI3K/Akt信号通路有关,KLF16在NSCLC中的表达趋势与IGF1R表达相反,两者之间是否存在调控关系需进一步验证. 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 抗血管生成 kLF16 IGF1r/PI3k/Akt 血管生成拟态
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槲皮素对K562和K562R细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响 被引量:4
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作者 李蔚 赵瑛 +1 位作者 邱林 马军 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1409-1415,共7页
目的:观察槲皮素(Qu)对伊马替尼(IM)敏感细胞K562及耐药细胞K562R的增殖、凋亡、细胞周期的影响,探讨凋亡及细胞周期调控因子、Wnt/β-catenin信号通路及BCR-ABL的表达变化,为Qu的临床应用提供实验室依据。方法:应用台盼蓝染色法检测K56... 目的:观察槲皮素(Qu)对伊马替尼(IM)敏感细胞K562及耐药细胞K562R的增殖、凋亡、细胞周期的影响,探讨凋亡及细胞周期调控因子、Wnt/β-catenin信号通路及BCR-ABL的表达变化,为Qu的临床应用提供实验室依据。方法:应用台盼蓝染色法检测K562和K562R细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布;荧光定量PCR及Western blot法分别检测Wnt/β-catenin信号通路成员、细胞凋亡及细胞周期相关因子的mRNA及蛋白的表达。结果:经Qu 5、10、20、40、80、160、320μmol/L作用于K562细胞后,K562细胞抑制率分别为5.07%、5.98%、11.09%、31.88%、56.89%、70.44%、86.63%;K562R细胞抑制率分别为4.99%、9.75%、10.54%、8.93%、25.13%、46.89%、68.60%。K562、K562R的IC50分别为76.4和230.2μmol/L。Qu 50、100和200μmol/L可诱导K562和K562R细胞凋亡(r=0.9914),使细胞周期阻滞于G1期(r=0.9871),且呈剂量依赖趋势。与对照组比较,Qu作用于K562后,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9及p21、p27 mRNA及蛋白(Caspase-9除外)表达均有升高(P<0.05),K562R细胞除p27外,其他mRNA和蛋白(Caspase-3除外)均表达增加。Wnt/β-catenin信号通路成员GSK-3β、β-catenin、Lef-1,下游靶向PPAR-δ、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05)。BCR-ABL mRNA表达降低,但BCR-ABL及p-BCR-ABL蛋白表达无明显变化。结论:Qu能够抑制K562及K562R细胞的增殖,降低其耐药性,增加敏感性,这与Qu抑制Wnt/β-catenin信号通路、激活凋亡途径及细胞周期因子相关。 展开更多
关键词 槲皮素 WNT/Β-CATenIN信号通路 k562和k562r BCL-ABL蛋白
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miR-129-2靶向PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路减轻肺内皮细胞损伤 被引量:1
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作者 袁江汉 郑喜盛 +3 位作者 贾明雅 冯永利 李长力 周发春 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期586-593,共8页
目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、... 目的探讨miR-129-2在肺血管内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法SPF级小鼠40只随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、空载组、过表达组,给予气管滴注LPS诱导急性肺损伤(ALI),尾静脉注射高表达慢病毒来过表达miR-129-2,观察ALI小鼠呼吸频率、体质量等一般情况,检测miR-129-2及炎症因子IL-6、IL-10、TNF-α表达水平和肺损伤程度。人肺微血管内皮细胞(HPMECs)分为Control组、LPS组、NC组和mimic组,LPS处理诱导细胞损伤,转染miR-129-2 mimic来上调miR-129-2的水平,划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,检测各组细胞中miR-129-2、IL-6、IL-10、TNF-α及PIK3R1 mRNA的表达水平。双荧光素酶实验验证miR-129-2与PIK3R1的靶向关系,Western blot检测miR-129-2对PIK3R1及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响。结果在小鼠中,miR-129-2过表达能使小鼠进食增加、呼吸频率减慢、体质量增加、肺组织损伤减轻,IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。在HPMECs中,mimic转染使miR-129-2表达水平上调,炎症因子表达水平降低,细胞迁移能力增强,PIK3R1表达降低(P<0.05);双荧光素酶报告显示miR-129-2与PIK3R1存在结合位点,miR-129-2下调使PIK3R1表达增加,PI3K/AKT信号通路被激活。结论miR-129-2过表达能够减轻小鼠炎症反应和肺损伤,并能介导PIK3R1通过PI3K/AKT信号通路缓解肺内皮细胞损伤。 展开更多
关键词 mir-129-2 PIk3r1 PI3k/AkT 内皮细胞损伤 炎症因子
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PIK3R1基因低甲基化在肺腺癌中的临床意义 被引量:1
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作者 田甜 陈港军 +2 位作者 胡创 蔡兴东 赖文佳 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS 北大核心 2023年第4期358-370,共13页
目的:为早期筛查、获取有效诊治手段来提高肺腺癌(LUAD)患者的总体生存率,探索PIK3R1基因低甲基化指标对肺腺癌诊疗及预后判断的影响。方法:使用大型公共数据库:TCGA、GEO、GEPIA2、UALCAN、KaplanMeier Plotter、LinkedOmics和TIMER进... 目的:为早期筛查、获取有效诊治手段来提高肺腺癌(LUAD)患者的总体生存率,探索PIK3R1基因低甲基化指标对肺腺癌诊疗及预后判断的影响。方法:使用大型公共数据库:TCGA、GEO、GEPIA2、UALCAN、KaplanMeier Plotter、LinkedOmics和TIMER进行在线分析。在LUAD人群不同的临床特征亚组中构建单变量和多变量COX比例风险模型。结果:低表达的PIK3R1会导致LUAD患者的总生存期(OS)、首次进展后生存期(FP)和疾病进展后生存期(PPS)较差。性别、肿瘤分期、吸烟史、T分型、N分型和PIK3R1低表达是LUAD发病的危险因素,低表达的PIK3R1是LUAD的潜在独立危险因素。DNA甲基化分析显示,探针ID(包括cg01239651、cg24797508、cg16664523和cg25008444)的PIK3R1启动子内CpGs的低甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT1)降低PIK3R1的表达。ROC曲线分析显示,PIK3R1的甲基化和表达在LUAD的准确诊断中具有高灵敏度和特异度。免疫分析研究表明,PIK3R1低甲基化和表达与免疫细胞(B细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞)浸润有关。此外,共表达基因(PGR、C5orf41、SCN7A、RBMS3、FAT4、RASSF2、A2M、ITGA8、FLI1和RECK)通常与PIK3R1具有相似的功能。结论:PIK3R1的低甲基化及表达可视为肺腺癌的一种特异性诊断生物标志物和独立的预后因素,并可以预测免疫治疗的有效性。 展开更多
关键词 DNA甲基化 PIk3r1生物标志物 肺腺癌 预后因素 免疫治疗效果 PI3k通路
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K_(n)□K_(m,s)的r-hued染色
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作者 梁玲梅 刘凤霞 赖虹建 《吉林大学学报(理学版)》 CAS 北大核心 2023年第1期85-93,共9页
考虑完全图K_(n)和完全二部图K_(m,s)的笛卡尔乘积图的r-hued色数.首先,根据正整数r的不同值进行分类,并结合K_(n)□K_(m,s)的性质,刻画该图r-hued色数的下界;其次,找到K_(n)□K_(m,s)的一个具体的(k,r)-染色,并以此刻画该图r-hued色数... 考虑完全图K_(n)和完全二部图K_(m,s)的笛卡尔乘积图的r-hued色数.首先,根据正整数r的不同值进行分类,并结合K_(n)□K_(m,s)的性质,刻画该图r-hued色数的下界;其次,找到K_(n)□K_(m,s)的一个具体的(k,r)-染色,并以此刻画该图r-hued色数的一个上界;最后,确定了K_(n)□K_(m,s)的r-hued色数. 展开更多
关键词 (k r)-染色 r-hued色数 笛卡尔乘积图
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非洲猪瘟病毒K205R蛋白重组腺病毒载体的构建及小鼠免疫效力评价
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作者 何宇恒 刘雪婷 +6 位作者 庞忠宝 翟文竹 黄颖 蒋思文 吉日木图 贾红 李焕荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期12-18,共7页
为了研制安全有效的非洲猪瘟(ASF)疫苗,本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV) Georgia 2007/1株基因组序列合成ASFV K205R基因,通过同源重组技术构建重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,使用Western blot检测K205R非结构蛋白的表达情况,PCR检测其遗传稳... 为了研制安全有效的非洲猪瘟(ASF)疫苗,本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV) Georgia 2007/1株基因组序列合成ASFV K205R基因,通过同源重组技术构建重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,使用Western blot检测K205R非结构蛋白的表达情况,PCR检测其遗传稳定性,腺病毒滴度检测试剂盒测定其滴度。使用重组腺病毒免疫BALB/c小鼠,通过ELISA测定血清K205R特异性抗体,采用多因子检测试剂盒测定血清中IFN-γ和IL-4细胞因子含量,采用CCK8法检测淋巴细胞的增殖情况。结果显示,成功包装出重组腺病毒Ad5-ASFV-K205R,能够正确表达K205R融合蛋白;接种293T细胞并连续传代20代,均可稳定遗传,病毒滴度可达9.5×1010PFU/mL;ELISA结果显示,小鼠一免后7~21 d可检测到K205R特异性抗体,并在二免后14 d内产生更高的抗体水平;K205R蛋白能显著刺激免疫小鼠脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4,同时也能显著刺激脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05)。结果表明,Ad5-ASFV-K205R重组腺病毒免疫小鼠能诱导机体的体液免疫应答和细胞免疫应答,具有很好的应用潜能,为进一步研发ASF疫苗提供基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 k205r 重组腺病毒 免疫效力
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非洲猪瘟病毒K205R蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定
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作者 吴书雅 赵慧君 +7 位作者 任佳慧 董昊鑫 张铭芳 李嘉骥 杜永坤 万博 张昂克 张改平 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第2期307-315,共9页
【目的】利用噬菌体展示技术筛选非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)K205R蛋白的特异性纳米抗体。【方法】将原核表达、纯化的ASFV K205R蛋白免疫双峰驼,采集全血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录,巢式PCR扩增VHH基因... 【目的】利用噬菌体展示技术筛选非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)K205R蛋白的特异性纳米抗体。【方法】将原核表达、纯化的ASFV K205R蛋白免疫双峰驼,采集全血,分离外周血淋巴细胞,提取总RNA并反转录,巢式PCR扩增VHH基因,构建VHH噬菌体文库,利用噬菌体展示技术筛选K205R特异性纳米抗体。【结果】成功构建库容量为5×10^(8)的VHH噬菌体文库,然后利用噬菌体展示技术经过3轮淘选,特异性VHH噬菌体得到明显富集,氨基酸序列比对显示共筛选出5株K205R蛋白的特异性纳米抗体,分别为ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb14、ASFV-K205R-Nb35、ASFV-K205R-Nb64和ASFV-K205R-Nb82。【结论】筛选的5株纳米抗体均具有良好的特异性,其中ASFV-K205R-Nb1、ASFV-K205R-Nb35和ASFV-K205R-Nb82具有更好的亲和力,为以纳米抗体作为灵敏探针建立的特异性强、灵敏度高、成本低的新型ASFV血清学诊断方法提供依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 k205r蛋白 VHH噬菌体文库 噬菌体展示 纳米抗体
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基于改进Mask R-CNN的多片烟叶部位的同步识别 被引量:3
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作者 徐淼 朱波 +1 位作者 刘宇晨 张冀武 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期170-175,共6页
为解决烟叶智能分级识别中需对多片散放烟叶同步进行部位识别的问题,提出一种基于改进Mask R-CNN的多片烟叶的部位同步识别方法:在Mask R-CNN区域建议网络中引入K-means聚类算法,对已标注目标检测框进行聚类,实现对预设的5种尺度的锚点... 为解决烟叶智能分级识别中需对多片散放烟叶同步进行部位识别的问题,提出一种基于改进Mask R-CNN的多片烟叶的部位同步识别方法:在Mask R-CNN区域建议网络中引入K-means聚类算法,对已标注目标检测框进行聚类,实现对预设的5种尺度的锚点尺寸和3种比例的锚点长宽比的优化,使其更加符合烟叶图像数据的分布特性,达到提高生成建议框的精确性、缩短识别时间的目的。基于采集的烟叶图像数据集,验证改进Mask R-CNN方法的有效性。结果表明,当IoU为0.5时,改进Mask R-CNN单样本耗时313 ms,比Mask R-CNN的326 ms快,在测试集上的均值平均精度(mAP)提高了3.56%。与Faster R-CNN和SSD目标检测算法相比,在准确率和召回率上也表现出优势。 展开更多
关键词 烟叶部位识别 Mask r-CNN 区域建议网络 k-MEANS聚类
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ITIC:一种高效的k-影响社区top-r查询算法
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作者 谭玉婷 王习特 +2 位作者 白梅 周虹宇 朱斌 《计算机应用与软件》 北大核心 2023年第9期30-36,共7页
k-影响社区(k-Influential Community, k-IC)是网络中具有较大影响值且无包含关系的最大连通k-core。k-IC的top-r查询的目标是返回影响值较大的前r个k-IC。针对此问题,提出W-D(Weight-Degree)索引用于管理网络。提出k-IC的top-r查询优... k-影响社区(k-Influential Community, k-IC)是网络中具有较大影响值且无包含关系的最大连通k-core。k-IC的top-r查询的目标是返回影响值较大的前r个k-IC。针对此问题,提出W-D(Weight-Degree)索引用于管理网络。提出k-IC的top-r查询优化算法ITIC(Index-based Top-r Query Algorithm for k-Influential Community),该算法无须频繁计算连通分量,并且从权重较大的节点开始处理,一般只对部分节点进行处理即可求得结果。同时,该算法是渐进输出k-IC,可根据用户需求随时终止算法。通过实验验证所提算法的有效性。实验结果表明,相对于现有算法,ITIC可以显著提高计算效率。 展开更多
关键词 k-影响社区 k-core W-D索引 Top-r 网络
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非洲猪瘟病毒K205R蛋白的原核表达与单克隆抗体制备 被引量:1
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作者 陈寅龙 郑南南 +6 位作者 吴宏举 侯浩宇 李潮 张昂克 韩世充 吴亚楠 杜永坤 《动物医学进展》 北大核心 2023年第11期1-7,共7页
为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材,制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因,构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R... 为研发非洲猪瘟病毒的免疫检测试剂提供素材,制备非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。采用PCR方法扩增K205R基因,构建重组表达质粒pET-30a-K205R,将重组质粒pET-30a-K205R转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达ASFV K205R蛋白。将纯化出的蛋白乳化后免疫小鼠,采用杂交瘤技术制备能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。将筛选出来的单克隆细胞注射至小鼠腹腔中,待小鼠腹部膨大时收集腹水,通过ELISA方法鉴定腹水效价、Western blot和IFA鉴定单克隆抗体特异性及反应原性,并对单克隆抗体亚型进行鉴定。经SDS-PAGE鉴定,重组ASFV K205R蛋白成功表达。Western blot分析显示,His标签抗体能够特异性识别重组表达的ASFV K205R蛋白,表明其具有良好的特异性以及反应原性。通过细胞融合和细胞筛选得到1株能稳定分泌抗ASFV K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,将其命名为1C3G6。ELISA检测腹水中抗体效价为1∶100000。Western blot和IFA鉴定结果显示单克隆抗体1C3G6与K205R蛋白反应性良好。通过亚型鉴定,单克隆抗体1C3G6的重链为IgG2b类,轻链为Kappa型。经Western blot和IFA鉴定,筛选得到的1C3G6单克隆抗体可以特异性识别原核系统和真核系统表达的K205R蛋白,说明该抗体具有良好的特异性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 k205r蛋白 原核表达 单克隆抗体 Western blot鉴定
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Top-k空间偏好查询方法研究
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作者 田春 鲍金玲 +1 位作者 张志威 刘刚 《长春师范大学学报》 2024年第4期43-53,共11页
随着无线通信技术的发展和智能移动终端的广泛普及,基于位置的服务已经融入了人们生活的方方面面。其中,Top-k空间偏好查询在地理信息系统、城市建设规划、资源调度与分配、旅游规划等领域具有重要的意义。Top-k空间偏好查询是根据空间... 随着无线通信技术的发展和智能移动终端的广泛普及,基于位置的服务已经融入了人们生活的方方面面。其中,Top-k空间偏好查询在地理信息系统、城市建设规划、资源调度与分配、旅游规划等领域具有重要的意义。Top-k空间偏好查询是根据空间对象周围的特征对空间对象进行等级评价,并返回具有最高等级评价的k个空间对象。目前,对于Top-k空间偏好查询的研究主要集中在欧式空间和路网环境,本文对欧式空间和路网环境下的Top-k空间偏好查询方法进行分析和比较。 展开更多
关键词 Top-k空间偏好查询 欧式空间 路网环境 r-tree索引 网络索引
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Hilbert空间中的K-R-融合框架
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作者 洪国庆 杨富超 张建霞 《河南工学院学报》 CAS 2023年第6期38-41,共4页
给出了Hilbert空间中K-R-融合框架和紧K-R-融合框架一些新的刻画,并利用框架理论和算子理论的方法和技术给出了K-R-融合框架的几个性质。最后,讨论了Hilbert空间中的K-R-融合框架的冗余性。
关键词 框架 k-r-融合框架 线性算子 HILBErT空间
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一类新的r-K-泛圈图
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作者 刘艳芳 《闽南师范大学学报(自然科学版)》 2023年第3期61-66,共6页
在现有研究的基础上,推广并构造一类r-K-泛圈图,其中K=(2,2,4,4,4,4,2,2,(2^(μ),2^(μ),2^(μ),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ+1),2^(μ))等.
关键词 r-k-泛圈图 缠绕弦 圈长
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Preparation of Layered Potassium Titanate Whiskers with Large Length-diameter Ratio by KDC Method 被引量:4
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作者 吉晓莉 WU Shijiang +1 位作者 章嵩 ZHAO Xiujian 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2014年第4期669-673,共5页
Pure K2Ti4O9 whiskers were prepared by KDC(Kneading-Drying-Calcination) method with TiO2 and K2CO3 as raw materials. The influences of TiO2/K2CO3 molar ratio(RT/K), calcination temperature(TC) and cooling proces... Pure K2Ti4O9 whiskers were prepared by KDC(Kneading-Drying-Calcination) method with TiO2 and K2CO3 as raw materials. The influences of TiO2/K2CO3 molar ratio(RT/K), calcination temperature(TC) and cooling process on phase composition and morphology of the whiskers were investigated by TG-DSC(thermo gravimetric-differential scanning calorimeter), XRD(X-ray diffraction), and SEM(scanning electron microscope). Pure K2Ti4O9 potassium titanate whiskers with large length-diameter ratio(r)(over 250) can be obtained at RT/K = 2.9 and TC = 950 ℃. 展开更多
关键词 kDC(kneading-drying-calcination) method potassium titanate whiskers TiO2/k2CO3 molar ratio(rT/k length-diameter ratio(r
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Numerical stability of solution to delay differential equations under resolvent condition for Runge-Kutta methods
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作者 赵景军 刘明珠 《Journal of Harbin Institute of Technology(New Series)》 EI CAS 2001年第2期135-139,共5页
Deals with the application of Kreiss resolvent condition in the error growth analysis of numerical methods, and studies the stability of Runge Kutta method in respect of Kreiss resolvent condition with emphasis on the... Deals with the application of Kreiss resolvent condition in the error growth analysis of numerical methods, and studies the stability of Runge Kutta method in respect of Kreiss resolvent condition with emphasis on the study on the subclass of collocation methods with abscissas in [0,1] by applying the methods to the test equation U′(t)=λU(t)+μU(t-τ)τ>0 with complex constraints μ and λ, and proves under some assumptions on the R K methods that the error growth is uniformly bounded in the stability region. 展开更多
关键词 Delay differential equations STABILITY kreiss resolvent r k methods
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Distinct protein kinase C isozymes mediates inhibitory effects of different G-protein coupled receptors on cardiac rapidly activating delayed rectifier K ~ current
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《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第B11期165-166,共2页
Aim Evidence has shown that stimulation of alA-adrenorecetors receptor (alA-AR) or angiotensin II type 1 receptor (AT1R) acutely down-regulates the rapid component of the delayed rectifier K + current (IKr) via... Aim Evidence has shown that stimulation of alA-adrenorecetors receptor (alA-AR) or angiotensin II type 1 receptor (AT1R) acutely down-regulates the rapid component of the delayed rectifier K + current (IKr) via protein kinase C (PKC). This study was designed to investigate which PKC isozymes mediate down-regulations of IKr by alA-AR and AT1R. Method The whole-cell patch-clamp technique was used to record IKr in native cardio- myocytes and in human embryonic kidney (HEK) 293 cells co-transfected with human ether-a-go-go related gene (hERG) encoding α-subunit of IKr and human alA-AR or AT1R gene. Result In isolated guinea-pig ventricular cardiomyocytes the inhibitory action of Ang II on IKr was little affected by Go6976 (selectively inhibiting PKCα, β and γ) and Go6983 (selectively inhibiting PKCα, β, γ , δ, and ζ), but was significantly antagonized by an inter- nal dialysis with PKCe-selective inhibitory peptide εV1 -2. In contrast, the inhibitory action of alA-AR agonist A61603 on IKr was remarkably attenuated by Go6976 or Go6983, but not affected by peptide εV1 -2. Moreover, specific PKC-selective inhibitory peptide antagonized the effect of A61603. The results suggested that PKCe and PKCα isoform respectively mediated the inhibitory effect of AT1R and a1A-AR. In heterologous expression system, both PKCα and e-selective activator peptides down regulated hERG current with different manner. PKCα activator peptide shifted the activation curve of the channel to the right, but PKCe-selective activator peptide did not. Simi- larly, A61603 shifted the activation curve to the right, whereas Ang Ⅱ had no effect. In addition, both A61603 and PKCα activator peptide showed inhibitory action on bERG A PKC current (an bERG mutant in which 17 of the 18 ROSITE-predicted PKC acceptor serines/threonines were changed to alanine) with a similar potency to wild type bERG current. But, both Ang Ⅱ and PKCe-selective activator peptide exhibited no effects on bERG △ PKC cur- rent. The results indicated that PKCα and PKCe isoforms down-regulated bERG current through different mecha- nism. Conclusion PKCα and PKCe isoform respectively mediates the inhibition on IKr by stimulation of AT1R and alA-AR via different molecular mechanism. 展开更多
关键词 rapidly ACTIVATING delayed rectifier k + CUrrenT protein kINASE C AT1r alA-Ar
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