海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的：探讨海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白沉积及转化生长因子β1（TGFβ1）表达的影响。方法：采用CCl4诱导的大鼠产生肝纤维化模型,设置模型组、空白组、秋水仙碱治疗组、海南血竭总黄酮治疗组,分别灌胃给药。实验末期,取肝,采用HE染色,观察肝脏组织的病理学变化。采用免疫组化（SP）法,RT-PCR法观察TGFβ1的表达。采用免疫组化（SP）法观察I、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,四氯化碳模型大鼠肝脏出现典型的纤维化表现,肝脏胶原纤维间隙广泛形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显,Ⅰ、Ⅲ型胶原（0.58±0.09）vs（7.40±0.55）,（1.36±0.27）vs（6.48±0.82）,（P均〈0.001）及TGFβ1表达明显增加;大剂量血竭总黄酮应用可以明显减轻肝脏胶原纤维增生沉积（P〈0.05）,抑制肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白（2.38±0.57）vs（7.40±0.55）,（2.13±0.44）vs（6.48±0.82）,（P〈0.050.01）及TGFβ1表达。结论：海南血竭总黄酮可抑制肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGFβ1表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。

细胞外信号调节激酶1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制转化生长因子-β_1诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白中的作用,及新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)对该作用的影响。方法体外培养肺成纤维细胞随机分为4组:对照组(0.4%血清)、TGF-β1组(5μg/L)、阴性转染组(TGF-β1+阴性对照si RNA)和Prx-1 si RNA转染组(TGF-β1+Prx-1 si RNA)。采用脂质体转染法转染si RNA,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后Prx-1 m RNA表达;Western blot检测Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ERK1/2及Prx-1表达;2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 si RNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 m RNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显提高。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、p-ERK1/2水平进一步提高,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并促进ERK1/2通路的激活,导致Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成增加,而Prx-1 si RNA可通过提高ROS水平进一步促进TGF-β1该作用。

大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺血管壁异常堆积的调节作用

目的探讨大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺血管壁异常堆积的调节作用。方法购买首都医科大学实验动物中心提供的38只健康雄性Wistar大鼠,依据随机数字表法将大鼠分为低氧组(n=14)、低氧+硫氢化钠(Na HS)组(n=12)、对照组(n=12),建立大鼠HPH模型,监测其血流动力学,测定其血浆H2S含量,检测其肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,最后进行结果判定与半定量分析、统计学分析。结果低氧组大鼠的m PAP、RV/(LV+SP)均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05),血浆H2S含量显著低于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05),肺小型肌性动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05);低氧组、低氧+Na HS组、对照组大鼠肺中型肌性动脉Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐降低(P<0.05),低氧组、低氧+Na HS组大鼠肺中型肌性动脉Ⅲ型胶原蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05)。低氧组大鼠肺小型肌性动脉、肺中型肌性动脉Ⅰ型胶原m RNA表达均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05);低氧组、对照组、低氧+Na HS组大鼠肺小型肌性动脉、肺中型肌性动脉Ⅲ型胶原m RNA表达均逐渐降低(P<0.05)。结论大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢能够有效抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其m RNA在肺血管壁的表达,进而可能对低氧性肺血管重塑进行有效缓解,值得临床充分重视。

HMGB1对心肌成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白分泌的影响及意义

通过观察HMGB1(High mobility group protein-B1)对新生SD(Sprague-Dawley)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖和胶原合成的影响,探讨HMGB1在心梗后心脏重构过程中的作用。以培养的新生SD(Sprague-Dawley)大鼠CFs为实验对象,分别给予0(对照组)、0.01、0.1、和1mg/L浓度的HMGB1进行干预,6、12、18、24和48h后进行四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖水平,采用荧光实时定量PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达。结果:(1)与对照组相比,48h后,不同浓度的HMGB1组新生SD大鼠CFs增殖水平和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平均较对照组有所增高(p<0.05)。(2)HMGB1浓度为0.1mg/L时CFs增殖水平和I、Ⅲ型胶原mRNA表达水平较其他处理组均升高(p<0.05)。说明HMGB1能促进SD大鼠CFs增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,其作用显示在低水平时可能呈浓度依赖性,并且浓度为0.1mg/L时效应最明显,显示HMGB1参与了心梗后的心脏重构过程并发挥了重要作用。

绝经后阴道前壁膨出患者阴道组织中胶原蛋白与ERα表达的相关性分析

目的:探讨绝经后阴道前壁膨出(AVP)患者阴道组织中胶原蛋白Ⅰ/Ⅲ与雌激素受体α(ERα)表达的相关性及其临床意义。方法:选择2014年6月至2016年3月在北京大学深圳医院行手术治疗的绝经后AVP患者20例(AVP组),另选取同期在本院接受手术治疗的绝经后妇科疾病且无AVP的20例患者作为对照组。采用免疫组化法检测阴道前壁组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达量,Western blotting方法检测ERα的表达;Spearman相关分析法分析阴道前壁组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白与ERα表达的关系。结果:AVP组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达量均明显低于对照组(均P<0.05);AVP组患者阴道前壁组织ERα的表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,AVP组患者Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白与ERα表达均呈正相关关系(r=0.511、0.541,均P<0.05)。结论:盆底Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白含量的减少及ERα的缺乏是绝经后AVP的主要发病机制;ERα与胶原蛋白之间的协同作用可能促进AVP的病情进展。

羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响

目的观察羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响。方法人增生性瘢痕标本取自整形患者。采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并用ELISA方法检测羟基喜树碱干预下体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量。结果各剂量浓度(63、125、250、500、1000ng/mL)羟基喜树碱均抑制人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌,随着作用浓度的升高,抑制强度增加,但与作用时间无明显关系。结论羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌有明显的抑制作用,对防治增生性瘢痕有一定意义。

RNA干扰CD36表达对大鼠矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达的影响

为观察RNA干扰CD36基因表达对大鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达是否有抑制作用,选取健康Wistar大鼠96只,随机分为4组,即生理盐水组、SiO2模型组(10 mg SiO2/大鼠)、SiO2+Lv-shCD36(CD36 shRNA表达的重组慢病毒)组和SiO2+Lv-shCD36-NC(对照慢病毒)组。染尘后7、21、28 d处死动物,应用免疫组织化学方法测定大鼠肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,并采用图像分析系统进行定量分析。SiO2+Lv-shCD36组大鼠肺组织中Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白阳性着色弱于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,SiO2+Lv-shCD36组大鼠Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的平均积分光密度值低于SiO2模型组和SiO2+Lv-shCD36-NC组,且差异有统计学意义(P<0.05)。提示RNA干扰CD36基因表达对大鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达具有明显抑制作用。

CD36功能肽段对小鼠实验性矽肺组织内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的观察CD36功能肽段YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化是否有阻抑作用。方法将小鼠按体重随机分为4组:生理盐水组、SiO2模型组、CD36功能肽段组[YRVRYLAKENITQDPEDH(93-110)]、CD36对照肽段组[TVDGVYKVFNGKDNISKV(208-225)]。采用暴露式气管内注入法染尘,分别于7、14、21 d处死动物,测定小鼠肺脏器系数和采用免疫组织化学染色法测定肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果在染尘后14 d、21 d时,小鼠肺脏器系数和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显低于SiO2模型组和CD36对照肽段组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD36功能肽段(93-110)对小鼠实验性矽肺纤维化具有明显的抑制作用。

通心络通过调节TGF-β1/Smads通路抑制高糖处理大鼠心肌成纤维细胞功能的机制研究

目的 观察通心络抑制高糖处理的大鼠心肌成纤维细胞功能的作用及可能的机制。方法 大鼠心肌成纤维细胞分为对照组和模型组,通心络分为低、中、高剂量组,MTT法检测各组细胞的增殖和活力,酶联免疫检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及TGF-β1蛋白表达水平,免疫印迹检测phopho-Smad2、phopho-Smad3,Smad7蛋白表达水平。结果 模型组的细胞增殖和活力明显高于对照组,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、TGF-β1蛋白表达水平显著升高;与对照组比较,模型组的phospho-Smad2、phospho-Smad3蛋白表达水平明显升高,而通心络各组上述异常指标均得到改善,通心络各组Smad7蛋白表达水平明显高于模型组。结论 通心络能够抑制成纤维细胞的增殖和活力,从而抑制了Ⅰ、Ⅲ型胶原的活性,减少了Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌,通心络的上述作用可能是通过对TGF-β1/Smads通路的活化进行调节来实现的。

大黄游离蒽醌对糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的探讨大黄游离蒽醌(free anthraquinone from rhubarb,FAR)对糖尿病大鼠心肌CTGF和collagen表达及间质纤维化的影响。方法健康♂SD大鼠一次性腹腔注射STZ制备糖尿病大鼠模型,2周后随机分为模型对照组(DCM组)和大黄游离蒽醌干预组(FAR组),同时设立正常对照组(CON组);干预8周后检测大鼠空腹血糖;心脏质量指数;Masson染色观察心肌纤维化程度;RT-PCR法检测CTGF、procollagenⅠ和collagenⅢmRNA表达;免疫组化法检测CTGF蛋白含量;ELISA法检测collagenⅠ和collagenⅢ胶原含量。结果与CON组相比,DCM组大鼠空腹血糖、心脏质量指数、心肌纤维化程度以及CTGF、collagen I和collagenⅢ表达均明显升高;与DCM相比,FAR组心脏质量指数、心肌纤维化程度以及CTGF、collagenⅠ和collagenⅢ表达均明显下降。结论大黄游离蒽醌可通过调低糖尿病大鼠心肌组织CTGF的表达,减少心肌间质中collagen I和Ⅲ合成及沉积。