Ⅰ型促代谢性谷氨酸受体在小剂量氯胺酮保护抑郁大鼠电休克后学习记忆功能中的作用

目的·探讨Ⅰ型促代谢性谷氨酸受体(groupⅠmetabotropic glutamate receptor,Ⅰ型mGluR)调节谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)介导的突触可塑性在小剂量氯胺酮保护抑郁大鼠改良电休克(modified electroconvulsive shock,MECS)后空间学习记忆功能中的作用。方法·对2~3月龄Sprague Dawley(SD)大鼠,应用慢性不可预见性应激建立抑郁模型。取10只健康大鼠作为对照组(C组),另取30只抑郁大鼠随机分为D组、M组、KM组。C组不予实验处理;D组腹腔注射生理盐水后行伪MECS处理;M组腹腔注射丙泊酚,KM组腹腔注射丙泊酚复合小剂量氯胺酮(10 mg/kg),之后分别行MECS处理。应用糖水偏好实验评估抑郁状态;Morris水迷宫检测空间学习记忆功能;Western blotting检测海马组织细胞膜NMDAR1、mGluR1、mGluR5蛋白表达。另取36只抑郁大鼠随机分为6组:DE组、m1E组、m5E组,DE'组、m1E'组、m5E'组。DE组、DE'组脑片灌流单纯人工脑脊液;m1E组、m1E'组脑片灌流含有mGluR1阻断剂的人工脑脊液;m5E组、m5E'组脑片灌流含有mGluR5阻断剂的人工脑脊液。检测DE组、m1E组、m5E组长时程增强(long-term potentiation,LTP)以及DE'组、m1E'组、m5E'组NMDAR介导的场电位(fEPSPNMDAR)。结果·实验处理后,与D组比较,M组和KM组糖水偏好百分比升高(P<0.05),逃避潜伏期(escape latency,EL)延长(P<0.05),目标象限空间探索时间(space exploration time,SET)缩短(P<0.05);与M组比较,KM组EL缩短(P<0.05),目标象限SET延长(P<0.05)。与D组比较,M组和KM组NMDAR1、mGluR1、mGluR5蛋白表达降低(P<0.05);与M组比较,KM组NMDAR1、mGluR1、mGluR5蛋白表达升高(P<0.05)。与DE组比较,m1E组和m5E组LTP降低(P<0.05)。与DE'组比较,m1E'组和m5E'组fEPSPNMDAR降低(P<0.05)。结论·小剂量氯胺酮可能通过上调抑郁大鼠MECS后海马组织细胞膜NMDAR和Ⅰ型mGluR表达,增强NMDAR激活状态同时上调LTP,减轻空间学习记忆功能损伤。

大鼠颈上神经节中Ⅰ组代谢型谷氨酸受体表达及慢性间歇性低氧对其的影响

目的观察Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluR1/5)在大鼠颈上神经节(SCG)组织的表达、定位,及慢性间歇性低氧(CIH)对mGluR1/5蛋白水平的影响。方法12只雄性SD大鼠随机分为对照组(Ctrl)和CIH组(CIH),每组6只,模型制作6周。Western blotting检测CIH对mGluR1/5蛋白水平的影响,免疫组织化学法和免疫荧光共定位染色检测大鼠SCG中mGluR1/5的表达及分布。结果mGluR1/5表达于大鼠SCG,mGluR1分布于神经元和小强荧光(SIF)细胞,而在卫星胶质细胞(SGCs)、神经纤维和血管不表达;mGluR5主要分布于神经纤维,少量分布于神经元,而在SIF细胞、SGCs及血管不表达;CIH上调mGluR1/5的蛋白水平(P<0.01)。结论mGluR1和mGluR5均表达于大鼠SCG,但其表达部位有所不同,两者蛋白水平的升高可能参与了CIH诱导的血压升高。

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂对吗啡耐受大鼠热痛阈的影响

目的观察鞘内注射Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)拮抗剂对吗啡耐受大鼠热痛阈的影响。方法 36只雄性Spague-Dawley大鼠随机均分为6组,鞘内置管后第4天开始给药。0.9%氯化钠溶液组(C组)予0.9%氯化钠溶液10μL。吗啡耐受组(M组)予吗啡10μg。吗啡+1-胺塞茚满-1,5-二羟酸(AIDA)组(MA组)予吗啡10μg+AIDA60nmol。吗啡+2-甲基-6-苯基苯乙炔-吡啶(MPEP)组(MM组)予吗啡10μg+MPEP60nmol。AIDA组予AIDA60nmol。MPEP组予MPEP60nmol。连续给药7d,每天2次。给药前和给药后30min测定大鼠甩尾潜伏期(TFL)以观察各组热痛阈的变化。结果 M组在第1、2天的TFL显著高于C组(P值均<0.05),随着用药天数增加,M组TFL逐渐缩短,到第7天与C组的差异无统计学意义(P>0.05)。MA组和MM组的TFL也呈下降趋势,但明显缓于M组。MA组第3～7天的TFL高于MM组,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。AIDA组和MPEP组TFL的变化不大,与C组的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论Ⅰ组mGluRs拮抗剂有抑制吗啡耐受的作用。

中脑导水管周围灰质腹外侧区促代谢型谷氨酸受体亚型7和8对大鼠心脏-躯体运动反射的双向调节作用

目的观察中脑导水管周围灰质腹外侧区(VL-PAG)内促代谢型谷氨酸受体亚型7(mGluR 7)和8(mGluR 8)对大鼠心脏-躯体运动反射(CMR)的调节作用。方法通过心包插管术制作CMR大鼠模型,在VL-PAG内分别注射mGluR 7和mGluR 8的激动剂AMN082和DCPG,观察其对大鼠CMR的调节作用;同时电损毁延髓头端腹内侧区(rostroventral medulla,RVM)亚核中的中缝大核或双侧网状巨细胞核,观察VL-PAG对大鼠CMR的下行调控作用。结果 AMN082选择性激活VL-PAG内mGluR7后,对辣椒素诱发的CMR具有明显的易化作用(P<0.05);与之相反,DCPG激活VL-PAG内mGluR 8对CAP诱发的CMR具有明显的抑制作用(P<0.05);这种易化或抑制效应均可被其拮抗剂MSOP完全拮抗;损毁大鼠VL-PAG的主要中继亚核中的中缝大核后,VL-PAG内AMN082微注射所产生的易化效应没有受到明显的影响(P>0.05),VL-PAG内DCPG微注射所产生的抑制效应被部分地减弱(P<0.05);而双侧网状巨细胞核损毁后,AMN082微注射所产生的易化效应明显被减弱,同时DCPG所产生的抑制效应也有所减弱。结论VL-PAG内mGluR 7和mGluR 8对大鼠CMR具有易化和抑制双向调节效应,而这种双向调节效应很可能是通过RVM的不同亚核、不同神经元的激活而实现的。

离子型及Ⅰ型代谢型谷氨酸受体对大鼠温度过敏的调节作用

目的探讨离子型及Ⅰ型代谢型谷氨酸受体对大鼠温度过敏的调节作用。方法将离子型谷氨酸受体作用药谷氨酸(Glu)、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、α-氨基-3羟基-5甲基-4异恶唑(AMPA),Ⅰ型代谢型谷氨酸受体作用药[(S)-DHPG],非竞争性NMDA受体拮抗剂(MK-801),竞争性AMPA受体拮抗剂(CNQX),选择性Ⅰ型代谢型谷氨酸受体拮抗剂(cpcco E)t分别注入L5~6脊神经结扎和假手术大鼠左足底部皮下组织,观察大鼠对辐射热的反应。结果 Glu、NMDA、AMPA、(S)-DHPG能减少假手术组足底逃避阈值,而对手术组则无效;相反,MK-801、CNQX及cpcco Et能增加手术组足底逃避阈值,但对假手术组无效。结论外周离子型和Ⅰ型代谢型谷氨酸受体敏感性的改变可导致末梢神经可塑性变化,这种变化是神经损伤引发的神经病理性疼痛产生与维持的基础。

小剂量氯胺酮保护抑郁大鼠电休克后学习记忆中Ⅱ组促代谢型谷氨酸受体的作用

目的探讨小剂量氯胺酮保护抑郁大鼠电休克(modified electroconvulsive shock,MECS)后学习记忆中Ⅱ组促代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,m Glu R)的作用。方法 2~3月健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,采用慢性轻度不可预见性应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)建立抑郁大鼠模型。选取30只建模成功的抑郁大鼠随机分为D组、M组、KM组,另取10只正常大鼠作为对照组(C组),腹腔注射给药,D组给予生理盐水后行伪电休克处理,M组和KM组分别给予丙泊酚及丙泊酚+氯胺酮(10 mg/kg)后行电休克处理,C组不做任何处理,行糖水偏好实验和水迷宫实验评价行为学变化,并检测海马m Glu R2和m Glu R3表达水平。另取12只抑郁大鼠进行电生理实验,将其随机分为对照组(P组)和Ⅱm Glu R阻断剂组(L组),制备海马脑片后分别予以正常人工脑脊液和含有Ⅱm Glu R阻断剂的人工脑脊液灌流,应用电生理技术记录海马Schaffer侧枝-CA1神经通路(SC-CA1)长时程增强(long-term potentiation,LTP)。结果实验处理后,与D组相比,M组和KM组糖水偏好百分比升高(P<0.01),M组逃避潜伏期延长(P<0.01),目标象限探索时间缩短(P<0.01),KM组逃避潜伏期缩短,目标象限探索时间延长(P<0.01)。与C组相比,D组、M组、KM组m Glu R2、m Glu R3蛋白表达水平降低(P<0.05);与M组相比,D组、KM组蛋白表达升高(P<0.05);D组与KM组之间差异无统计学意义(P>0.05)。P组海马SC-CA1神经通路LTP高于L组(P<0.05)。结论小剂量氯胺酮可改善抑郁大鼠电休克后学习记忆功能损害,其机制可能与上调海马m Glu R2和m Glu R3表达有关。

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体在帕金森病大鼠模型中的表达变化

目的通过研究Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)mGluR1及mGluR5在帕金森病(PD)大鼠纹状体神经元细胞膜蛋白和总蛋白的表达变化,探讨Ⅰ组mGluRs在纹状体神经元细胞膜/细胞内分布改变是否参与PD的发病机制。方法选取雄性SD大鼠20只,随机分为PD组〔以6-羟多巴(6-OHDA)单侧脑内注射法制备;n=10〕和Sham组(操作方法相同,以等量生理盐水代替6-OHDA;n=10)。采用Western blot方法检测两组大鼠纹状体损伤侧和非损伤侧mGluR1及mGluR5总蛋白和膜蛋白水平变化,以及其下游重要信号分子细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平,比较两组损伤侧与非损伤侧上述各指标表达情况。结果Western blot结果显示Sham组非损伤侧、Sham组损伤侧、PD组非损伤测及PD组损伤侧mGluR1总蛋白水平差异无统计学意义(F=0.329,P=0.805),PD组损伤侧mGluR1膜蛋白表达较PD组非损伤侧、Sham组损伤侧和Sham组非损伤侧均明显增高(均P<0.05);PD组损伤侧mGluR5总蛋白水平和膜蛋白水平均较相应PD组非损伤侧、Sham组损伤侧及Sham组非损伤侧均明显增高(均P<0.05);与PD组非损伤侧、Sham组损伤侧和Sham组非损伤侧比较,PD组损伤侧ERK1/2磷酸化水平明显降低,JNK磷酸化水平明显升高(均P<0.05);上述指标在PD组非损伤侧、Sham组损伤侧和Sham组非损伤侧之间两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论PD大鼠纹状体Ⅰ组mGluRs的变化以膜蛋白的表达异常增加为主,可能与其在细胞膜/细胞内分布的改变相关,并且改变可能影响下游ERK1/2和JNK磷酸化水平,推测纹状体神经元Ⅰ组mGluRs分布的变化可能与PD发病机制相关。

下丘脑室旁核的I组促代谢型谷氨酸受体在压力感受性反射调节中的作用

目的探讨下丘脑室旁核(PVN)内的Ⅰ组促代谢型谷氨酸受体(mGluRI)在压力感受性反射中枢调节中的作用。方法①在清醒自由活动大鼠中,用脑部微量透析法和高效液相色谱法测定静脉注射苯肾上腺素诱发压力感受性反射时的PVN区谷氨酸含量的变化;②用mGluRⅠ的阻断剂MCPG或激动剂ACPD直接灌流PVN区,同时诱发压力感受性反射,并观察血压和心率的变化。结果①静脉注射苯肾上腺素诱发压力感受性反射时,PVN内的谷氨酸含量迅速升高到基础水平的(384.82±91.77)%(P<0.01)。②PVN区灌流mGluRⅠ阻断剂MCPG(2.5mmol/L),同时诱发压力感受性反射,其血压升值明显减小(P<0.01),心率降值明显增大(P<0.05),导致压力感受性反射的敏感性(△HR/△MAP)明显增大(P<0.05)。③PVN区灌流mGluRⅠ激动剂ACPD(1mmol/L)同时诱发压力感受性反射,其血压升值明显增加(P<0.001),心率降值明显减小(P<0.001),导致压力感受性敏感性明显降低(P<0.05)。结论 PVN内的mGluRⅠ在压力感受性反射的中枢调节中起抑制作用。

I型代谢型谷氨酸受体在脊髓水平参与疼痛信号的传递

目的观察I型代谢型谷氨酸受体在脊髓水平痛信号传递过程中的作用。方法先在鞘内分别注射缓冲液或I型代谢型谷氨酸受体两种拮抗剂CPCCOEt和MPEP,再给大鼠脚掌注射致痛物质formalin,1 h后立即处死,用免疫组化的方法检测大鼠脊髓背角Fos免疫阳性神经元的数目。结果分别给予拮抗剂CPCCOEt和MPEP后,大鼠的第二相痛行为反应明显减弱,脊髓背角Fos免疫阳性神经元的数目明显减少。结论I型代谢型谷氨酸受体在脊髓水平促进了痛信号的传递,在脊髓水平阻断I型代谢型谷氨酸受体可能成为镇痛药物的新靶点。

下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达及信号通路的研究进展

本文就下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达的影响因素、相关的信号通路作一综述。在生理状态下 ,大鼠促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体在下丘脑室旁核区的表达非常低 ,急、慢性应激、促肾上腺皮质激素释放激素、脂多糖促进下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达 ,而大剂量糖皮质激素抑制下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达。促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体是与G蛋白相耦联的跨膜结构的受体 ,第二信使为环腺苷一磷酸 ,后者激活蛋白激酶A信号途径 ,促肾上腺皮质激素释放激素的诸多作用都是通过此信号途径实现的。

人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体EC1片段在原核系统中的可溶性表达

目的:研究人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体(hCRFR1)EC1区蛋白片段在原核表达系统中可溶性表达的影响因素。方法:以pcDNA3.1-hCRFR1全长质粒为模板,PCR扩增EC1区分别编码118和88个氨基酸残基(分别对应融合蛋白GST-EC1118和GST-EC188)的片段,将其插入pGEX-4T2载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导目标蛋白表达;采用GSTrap FF亲和纯化柱对目标蛋白进行纯化,并用Western印迹证实。结果:与GST-EC1118相比,GST-EC188可溶性表达增加,为下一步hCRFR1相关研究的开展奠定了基础。结论:hCRFR1的EC1区M1～N19及N108～V118两个片段影响该区域在原核系统中表达的可溶性,推测可能与富含疏水性氨基酸有关。

Homer蛋白介导谷氨酸受体信号转导

Homer蛋白是一类联系突触内细胞骨架蛋白、信号蛋白的重要物质。Homer家族蛋白可和mGluRI、IP3R、Shank、RyR中富含脯氨酸的序列结合。Homer蛋白可以自我交联形成同聚或异聚体 ,此多聚体通过与多种蛋白、受体形成复合体并相互作用 ,在信号转导、突触形成、受体在细胞定位起重要作用。

氟、砷染毒对雄性仔鼠海马组织Ⅰ组代谢型谷氨酸受体蛋白表达的影响

[目的]探讨氟、砷染毒对大鼠雄性仔鼠海马组织中Ⅰ组代谢型谷氨酸受体m Glu R1α和m Glu R5蛋白表达的影响。[方法]无特定病原体(SPF)SD大鼠80只,雌雄按1∶1交配,将观察到有阴栓形成的孕鼠随机分为对照组、氟染毒组、砷染毒组及氟砷联合染毒组,每组10只,从受孕第0天开始分别饮用自来水、100 mg/L Na F、75 mg/L Na As O2及100 mg/L Na F+75 mg/L Na As O2的混合水溶液,连续染毒至子代大鼠断乳(出生后21天,PND21),断乳后仔鼠饮用与母鼠一样的染毒溶液至出生后42天(PND42)。采用高效液相色谱法检测仔鼠海马组织中谷氨酸(Glu)与γ-氨基丁酸(GABA)的含量,Western blot法检测海马组织中m Glu R1α和m Glu R5蛋白表达水平。[结果]与对照组相比,砷染毒组及氟砷联合染毒组PND21和PND42仔鼠海马组织中Glu及PND42仔鼠GABA含量明显下降(P<0.05)。与氟染毒组比较,PND42氟砷联合染毒组仔鼠海马组织中Glu含量明显降低(P<0.05)。砷染毒组及氟砷联合染毒组PND21仔鼠,氟、砷染毒组及氟砷联合染毒组PND42仔鼠海马组织m Glu R1α蛋白表达低于对照组(P<0.05);氟、砷染毒组及氟砷联合染毒组PND21仔鼠,砷染毒组及氟砷联合染毒组PND42仔鼠海马组织m Glu R5蛋白表达低于对照组(P<0.05);与氟染毒组相比,氟砷联合染毒组PND21和PND42仔鼠m Glu R1α蛋白表达均降低(P<0.05)。[结论]生命早期氟、砷染毒及氟砷联合染毒均可下调雄性子代大鼠海马组织中m Glu R1α和m Glu R5蛋白表达,氟砷联合染毒下调的最明显。

评论:Ⅰ型谷氨酸代谢型受体拮抗剂AIDA的神经保护作用

在哺乳动物中枢神经系统中,L-谷氨酸被认为是主要的兴奋信号传导者,与认知、记忆、学习等脑功能有密切关系.脑组织中谷氨酸含量巨大(5～15 mmol/kg),但仅有极少部分存在于细胞外液中.谷氨酸通过相应受体发挥其信号作用,多数神经细胞和胶质细胞在其浆膜上有谷氨酸受体.细胞外液中谷氨酸的浓度决定了受体被刺激的程度.中枢神经系统的兴奋性神经毒性就是由谷氨酸、天门冬氨酸等兴奋性氨基酸通过其受体引起的,谷氨酸的浓度过高就具有兴奋毒性,同样受体过度兴奋也是有害的.

激活谷氨酸促代谢型受体8促进肺腺癌A549细胞凋亡

本文旨在检测谷氨酸促代谢型受体(metabotropic glutamate receptors,mGluR)各亚型在肺腺癌A549细胞中的表达,并进一步探讨呈高表达的mGluR8和mGluR4激活对A549细胞体外生长的影响。采用real-time PCR技术检测A549细胞mGluR各亚型的m RNA表达,采用免疫组化技术检测A549细胞以及肺腺癌组织mGluR8和mGluR4蛋白表达。采用CCK-8试剂盒检测细胞生长,EdU掺入检测细胞DNA合成率,hoechst 33258染色及流式细胞仪检测细胞的凋亡的变化,分别观察mGluR8的激动剂(S)-3,4-DCPG及mGluR4的激动剂VU0155041对A549细胞生长的影响。结果显示:A549细胞I组促代谢型受体mGluR1和mGluR5m RNA呈低水平表达,II组促代谢型受体mGluR2和mGluR3 mRNA无表达,III组促代谢型受体mGluR4、mGluR6、mGluR7和mGluR8 m RNA均有表达,其中以mGluR8的m RNA表达水平最高,mGluR4表达次之;A549细胞及部分患者肺腺癌组织上有mGluR4和mGluR8的蛋白表达。VU0155041对A549细胞的体外生长无明显影响,而(S)-3,4-DCPG呈剂量依赖性抑制A549细胞的生长,并促进其凋亡。这些结果揭示mGluR8激活具有抑制肺癌细胞生长作用,为肺癌防治的研究提供新的线索。

Homer1蛋白与Ⅰ组代谢型谷氨酸受体在神经病理性疼痛中的作用

神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)的既往研究中关于Homer1蛋白和Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor, mGluRs)在疼痛信号转导中的作用相对明确,但它们相互之间的关系并不清楚,在突触后膜中Homer1蛋白和Ⅰ组mGluRs可以相互作用并对疼痛信号转导和疼痛维持有重要影响,Homer1蛋白可能是其中的关键靶点。Homer1b/c作为重要的突触后致密物在突触可塑性调节和突触信号传递中起重要作用。文章综述了Homer1蛋白特殊的果蝇激活蛋白/血管舒张刺激磷酸蛋白同源结构域1(enabled protein of drosophila/vasodilator-stimulated phosphoprotein homology, EVH1)和螺旋卷曲(coiled-coil, C-C)结构在脊髓突触后膜通过与不同突触后蛋白结合产生NP作用,mGluRs在神经损伤模型的潜在作用机制中与上述作用可能存在共同的作用机制。

E2泛素结合酶UBE2S抑制Ⅰ型干扰素产生的分子机制

天然免疫反应是宿主通过识别"自我"与"非我",抵抗病原微生物入侵的第一道防线。病毒感染引发宿主细胞模式识别受体(PRRs)识别病原相关分子模式(PAMPs)并激发一系列的级联反应,最终促进了干扰素(IFN)和促炎性细胞因子的表达。病毒感染宿主后,病毒核酸结合PRR使其构象发生改变并与接头蛋白发生相互作用,进而促进包括核因子(IκB)抑制蛋白激酶(IKK)家族和TANK结合激酶1(TBK1)在内的复合物的形成和激活。

Ⅰ型代谢型谷氨酸受体与癫癎

在哺乳动物的中枢神经系统中,谷氨酸是调节绝大多数神经突触兴奋性的主要神经递质.这种调节作用主要是通过激活以下受体来实现的,配基门控离子通道型谷氨酸受体(iglur,简称离子通道型谷氨酸受体)和代谢调节型谷氨酸受体(mglur,简称代谢型谷氨酸受体).

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体参与神经毒性机制的研究进展

Ⅰ组代谢型谷氨酸受体属于膜受体，是G蛋白偶联受体家族的一员，它在中枢神经系统广泛分布，高表达区主要位于大脑皮质、纹状体、海马；在哺乳动物中枢神经系统介导的生理过程和病理中均有重要作用。本文就近年来Ⅰ组代谢型谷氨酸受参与神经毒性机制的研究作一综述。