腹主动脉缩窄大鼠模型心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原改变及其mRNA的表达

目的:通过建立腹主动脉缩窄大鼠模型,观察腹主动脉缩窄大鼠心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原及其mRNA的表达。方法:30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(14只)和模型组(16只)。模型组根据Doering等的方法,用银夹造成腹主动脉部分狭窄(银夹内径0.7 mm)。8 w后用免疫组化法对心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色,并用光密度值作为其含量指标行图像分析,即时PCR扩增后分析并测定胶原mRNA水平。结果:模型组造模8 w时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原平均光密度及其mRNA表达较假手术组显著升高(P<0.01)。胶原组化染色显示,模型组胶原明显增多、增粗、排列紊乱。结论:大鼠腹主动脉缩窄导致反应性纤维化心肌中Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高,以心肌间质和血管周围增加为主;本模型适合高血压、心力衰竭等慢性过程致心肌纤维化的研究。

二甲氨基乙醇和复方氨基酸溶液对衰老大鼠皮肤Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响

目的依据中胚层疗法理念，观察真皮内注射二甲氨基乙醇（Dimethylaminoethano，DMAE）和复方氨基酸溶液（compound amino acid injection，AA）对D-半乳糖（D-galactose，D-gal）诱导的化学性衰老大鼠皮肤Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达的影响。方法80只Wistar大鼠随机分为正常对照组、衰老对照组和衰老治疗组。衰老治疗组从注射D-gal后第18天开始，在大鼠两侧臀部皮肤分别皮内注射0．2％DMAE＋AA、0．1％DMAE＋AA、0．2％DMAE、0．1％DMAE、AA、生理盐水（NS），1次／周，连续4周。观察各组皮肤组织学变化、真皮厚度、羟脯氨酸（Hydroxyproline，Hyp）、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白mRNA和成纤维细胞增殖细胞核抗体（proliferating cell nuclea antigen，PCNA）表达水平的变化。结果真皮内注射0．1％DMAE＋AA、0．2％DMAE＋AA可使衰老大鼠真皮厚度、Hyp、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达水平显著增加（P〈O．05），而对PCNA表达无显著影响（P〉O．05）。结论真皮内注射0．2％DMAE＋AA、0．1％DMAE＋AA可促进衰老大鼠皮肤Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白合成，显著增加真皮厚度和胶原蛋白含量，具有一定延缓皮肤衰老的作用。

脂质体介导HSP27干扰质粒转染人肺泡Ⅱ型上皮细胞对胶原合成的影响

目的：用脂质体Lepo 2000介导热休克蛋白27（HSP27）干扰质粒转染A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞株,检测转染后对转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化中对胶原合成的影响.方法：流式细胞仪检测不同配比的Lepo 2000与HSP27质粒转染效率;激光共聚焦检测最优配比的干扰质粒的转染效率;Real-time PCR检测HSP27基因的表达并筛选最佳干扰HSP27质粒;免疫印迹检测最佳干扰HSP27质粒转染效果及胶原表达的变化.结果：8 μg∶20μl的配比细胞转染效率可达到83％,为最优脂质体与HSP27质粒的配比;干扰HSP27质粒4个不同的基因干扰片段中,干扰HSP27质粒第4个干扰片段基因沉默效果最好,能达到70％的HSP27基因沉默效果.成功转染HSP27的干扰质粒能明显下调TGF-β1诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结论：HSP27干扰质粒能明显抑制TGF-β1诱导的A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成.

Ⅲ度烧伤创面切痂混合移植后胶原重建规律的实验研究

在异体皮、自体皮片混合移植的大鼠Ⅲ度烧伤模型上观察了移植后4、7、14、21、28d时羟脯氨酸、Ⅰ型和Ⅲ型胶原、前Ⅲ型胶原N端多肽（PⅢNP）和胶原酶活性的变化规律。应用特异性强、灵敏度高的单克隆抗体检测Ⅲ型胶原和PⅢNP。结果发现：自体皮区移植14d后羟脯氨酸、Ⅲ型胶原和胶原酶活性显著增加，Ⅲ／Ⅰ比例非常明显增高。在异体皮区移植后14d内，羟脯氨酸、Ⅰ型和Ⅲ型胶原活性降低，至21d后才见羟脯氨酸和Ⅲ型胶原，Ⅲ／Ⅰ增加；相反地。Ⅰ型胶原在移植后4、7、14d均见降低。实验证实了血清中PⅢNP能灵敏地反应局部烧伤后Ⅲ型胶原合成的增加，移植后7～28d均见PⅢNP显著升高。局部组织学观察在混合移植后21d异体表皮完全被排异，异体真皮已完全被延伸的自体表皮所覆盖。结果表明：异体皮区胶原代谢的启动迟于自体皮区约1周左右。混合移植14d自体皮区胶原合成开始活跃，而新生合成的胶原主要是Ⅲ型胶原，28d后创面已完全被自体表皮覆盖，其下的胶原代谢仍未停止，无论在原先的自体皮区及异体皮区胶原的合成，代谢仍在高水平进行。混合移植不仅防止了感染、高能代谢、水和电解质紊乱和对付自体皮不足，而且对烧伤愈合中的胶原代谢有显著作用。

尘肺清颗粒防治大鼠实验性矽肺的病理观察

目的了解尘肺清颗粒对大鼠实验性矽肺的病理形态学影响。方法用超细粉碎的石英粉注入大鼠气管,造成矽肺动物模型。4周后开始给药,20、10、5g/kg,灌胃,每日1次,连续给药12周处死动物,做肺组织常规病理学、羟脯氨酸含量测定和肺干重等检查。并对肺碱性磷酸酶、Ⅰ型和Ⅲ型胶原进行原位定量。结果给药组肺干重、羟脯氨酸含量明显低于模型组;肺病变程度减轻;图像分析显示给药组肺组织内碱性磷酸酶增加;Ⅰ型胶原纤维明显减少。结论尘肺清颗粒可以明显改善大鼠实验性矽肺的组织形态,促进组织修复,改变胶原沉着比例,减轻肺纤维化。

我的博士学位论文(下)

为了研究心肌中胶原蛋白种类和结构变化,我去中国医学科学院基础所组胚教研室找到了著名专家许增禄。我在许老师那里第一次听说苦味酸天狼猩红染色和偏振光显微镜可观察组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原。许老师帮我制作了病理切片,并亲自带我用偏振光显微镜观察实验标本。

Nd：YAG激光与强脉冲光非剥脱性嫩肤的动物实验

目的探讨Nd：YAG激光长脉宽波长1064nm与强脉冲光（intense pulsed light，IPL）波长560～1200nm两种波长照射SD大鼠皮肤后组织学变化趋势，为临床非剥脱性光嫩肤的科学治疗提供理论依据。方法应用两种波长照射SD大鼠背部脱毛皮肤，通过HE染色和免疫组织化学染色方法检测真皮厚度、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达，并测定平均吸光度值进行半定量分析。结果两种波长照射后真皮厚度、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白平均吸光度值均高于正常对照组（P〈0．05），激光组均又高于IPL组（P〈O．05），Ⅰ型胶原蛋白平均吸光度增加值均高于Ⅲ型胶原蛋白（P〈0．001）。结论两种波长均可使SD大鼠真皮厚度和Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白增加，激光组优于IPL组。Ⅲ型胶原蛋白在照射早期增加幅度较高，而Ⅰ型胶原蛋白在照射后期增加幅度较高，提示非剥脱性光嫩肤真皮重塑机制可能与Ⅰ型胶原蛋白增加的时间和量有关。