一个新的Ⅰ型咪唑啉受体可变剪接体的克隆、鉴定及亚细胞分布

目的克隆Ⅰ型咪唑啉受体(I1R,Nischarin)新的可变剪接体,并对其进行表达特征和亚细胞定位研究,探索其表达与I1R的差异,从而为解释I1R药理学作用多样性奠定基础。方法在本课题组前期研究基础上设计引物,通过RT-PCR从大鼠肝组织中克隆新的可变剪接体,将其克隆到pcDNA3.1、pEGFP-N1和PCMV-myc3个真核表达载体中,并通过细胞转染探索其在293T细胞中的分布,应用Western印迹测定其在真核细胞中表达蛋白的相对分子质量特征。结果成功克隆获得一个新的I1R可变剪接体(命名为I1R-ISO-472),编码472个氨基酸,与GenBank中序列号AK036043.1的新基因的序列完全一致。生物信息学分析表明,该基因染色体定位于14号染色体14B,含有磷酯酰肌醇结合位点(PX_domainsuperfamily)与亮氨酸富集重复(LRR-RIsuperfamily)两个重要的功能结构域。I1R-ISO-472在293T细胞中表达的蛋白相对分子质量约为52×103,与预测基本一致。细胞免疫荧光结果表明,其在293T细胞内呈均匀弥散分布。结论成功克隆一个新的I1R可变剪接体,其表达特征及亚细胞分布提示其药理学作用可能与已知的I1R不同。

咪唑啉Ⅰ型受体与磷脂代谢相关的信号转导研究进展

咪唑啉Ⅰ型受体 (I1 imidazolinereceptor ,I1R)参与多种生理功能的调节 ,在中枢神经系统可能与抑郁症、阿片成瘾、早老性痴呆等疾病的发病机制有关。近年研究发现 ,I1R在PC1 2细胞中的信号转导与磷脂代谢途径有关。激活I1R首先活化磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C ,产生二酰甘油和花生四烯酸 ;两者作为第二信使 ,通过激活蛋白激酶C ,使细胞外信号调节激酶和c JunN端激酶活化 ,继而引起促分裂原活化蛋白激酶级联反应 ,最终调节细胞增殖或神经分化。上述各种酶共同组成了I1R在PC1 2细胞中的信号转导途径。

咪唑啉Ⅰ型受体候选蛋白——非G蛋白偶联受体信号转导与ERK相关

目的:研究在咪唑啉Ⅰ型受体(imidazoline-1receptor,I1R)激动剂莫索尼定和利美尼定作用下,I1R抗体选择性蛋白(imidazolinereceptorantiseraselectedprotein,IRAS)的信号转导机制。方法:采用[35S]-GTPγS结合实验,确定IRAS是否与G蛋白相偶联;采用蛋白免疫印迹方法,研究IRAS的激活与ERK磷酸化之间的关系。结果:以稳定表达有IRAS的CHO细胞(CHO-IRAS)为实验对象研究发现,利美尼定、莫索尼定在多种实验条件下均不能提高[35S]-GTPγS结合量,表明IRAS不与G蛋白偶联,而利美尼定和莫索尼定在激活IRAS的同时,能够浓度依赖性地显著升高ERK磷酸水平,其刺激作用能被I1R拮抗剂依法克生完全拮抗。结论:IRAS不与G蛋白偶联,ERK可能是IRAS偶联的信号分子之一。

新基因Nischarin生物信息学分析及初步验证

目的:对新基因Nischarin进行生物信息学分析,探索其新功能特征,并通过实验进行初步验证。方法:用生物信息学方法对Nischarin进行初步分析,阐明了它的基因结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、相互作用基因、相互作用蛋白、亚细胞定位、蛋白质功能域等信息。最后采用细胞免疫荧光对其DNA结合位点进行初步验证。结果:对新基因Nischarin的上述性质进行了有效的预测,分析表明该基因结构复杂,相互作用基因或蛋白多,亚细胞分布预测复杂。验证了Nishcarin存在的DNA结合位点。结论:通过生物信息学分析,表明新基因Nischarin是一个复杂的基因,可能存在的多种蛋白表达形式、这些不同的蛋白可能存在不同的亚细胞分布,且该蛋白可能与多种蛋白存在相互作用,上述基因和蛋白特性可能是Ⅰ型咪唑啉受体(Imidazoline-1 receptor,I1R)复杂药理学作用的分子基础。