认识儿童Ⅰ型干扰素通路病——早期识别,精准治疗,改善预后

Ⅰ型干扰素通路病是一类由单基因突变引起的自身炎症性疾病,其特征是Ⅰ型干扰素信号通路异常激活,导致广泛的全身性炎症反应。在日常自身免疫性疾病诊疗中,早期识别这类疾病至关重要。对于起病年龄小、多系统炎症表现及自身抗体阳性的患者,临床医师应高度警惕Ⅰ型干扰素通路病,必要时进行基因检测以尽早诊断。早期诊断,精准治疗,不仅有助于及时控制炎症,还能有效预防或减缓脏器损伤的进展,显著改善患者的长期预后。

Ⅰ型干扰素通路IRF5基因多态性与系统性红斑狼疮的关联性研究

目的:研究Ⅰ型干扰素通路IRF5基因rs2004640、rs10954213、rs4728142位点的单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮易感性之间的关联。方法:运用Taqman荧光定量PCR检测218例SLE患者及200例健康对照者IRF5基因rs10954213、rs4728142、rs2004640位点基因型,计算等位基因频率,分析其与SLE的关系;用IIF法和LIA法测定218例SLE患者血浆中抗核抗体、抗双链DNA抗体和特异性抗体,并分析其与IRF5 rs2004640、rs10954213位点基因频率的关系。结果:IRF5 rs2004640位点等位基因T频率分布SLE组高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=6.809,P=0.009),基因型GG/TT分布在两组差异有统计学意义(χ~2=5.111,P=0.024,);IRF5 rs10954213位点等位基因G频率分布在SLE组高于对照组,差异有统计学意义(χ~2=4.332,P=0.037);基因型GG在两组的分布差异有统计学意义(χ~2=5.805,P=0.016);IRF5 rs4728142位点等位基因频率及基因型,两组比较差异无统计学意义。SLE组IRF5 rs2004640位点等位基因T和抗Sm抗体、抗Rib-P抗体相关(χ~2=8.512、4.057;P=0.005、0.048)。218例SLE患者中活动期患者特异性抗体主要以Anti-NUC、Anti-His、Anti-Rib-P为主,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IRF5基因rs2004640、rs10954213基因位点单核苷酸多态性与SLE易感性相关,rs4728142基因位点单核苷酸多态与SLE易感性不相关;IRF5 rs2004640 T等位基因和抗Sm抗体、Anti-Rib-P抗体相关,SLE活动期患者特异性抗体主要以抗ds-DNA抗体、抗NUC抗体、抗His抗体、抗Rib-P抗体为主。

利用ATAC-seq技术研究Ⅰ型干扰素通路活化后人单核细胞的染色质开放性改变

目的检测人单核细胞经干扰素α(interferon α,IFNα)刺激后在全基因组水平上的染色质开放性变化。方法收集健康人外周血单核细胞,运用基于转座酶和高通量测序的染色质分析(assay for transposase-accessible chromatin using sequencing,ATAC-seq)技术检测染色质开放性。使用生物信息学工具进行富集分析和可视化分析。结果经过 IFNα处理后,染色质开放性发生显著增加的区域有 430 个,显著降低的区域有 442 个;大部分开放结构位于基因的启动子和临近区域,其次是基因间区域以及基因的内含子区域。富集分析显示,染色质开放性明显增加的区域所关联的基因涉及的生物学过程大多是与干扰素相关的信号通路和抗病毒反应。可视化相应的染色质区域,效应性干扰素诱导表达基因(interferon-stimulated gene,ISG)的启动子及转录起始位点区域在 IFNα刺激之后 ATAC-seq 信号强度明显增强;而调节性 ISG 在 IFNα刺激前即已具备一定程度的开放性,刺激之后开放性有所增强。开放性增强区域含有干扰素刺激反应元件以及干扰素调控因子等重要转录因子的识别基序。结论Ⅰ型干扰素刺激后,人单核细胞的染色质开放性发生了特征性改变,为下游的相关基因表达做出准备。

清肺解毒颗粒调控Ⅰ型干扰素通路抗RSV效应的机制研究

目的:基于Ⅰ型干扰素通路探究清肺解毒颗粒(QJG)发挥抗呼吸道合胞病毒(RSV)的效应机制。方法:将40只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组(Con组),模型组(RSV组),RSV+清肺解毒颗粒组(RSV+QJG组),RSV+IFN-α阻滞剂组(RSV+IFN-α Inh组),RSV+IFN-α阻滞剂+清肺解毒颗粒组(RSV+IFN-α Inh+QJG组)。除Con组外,其余各组小鼠给予RSV毒株,其中RSV+IFN-α Inh组、RSV+IFN-α Inh+QJG组在两次滴鼻造模前分别给予IFN-α阻滞剂。在感染后治疗组采用QJG给药治疗。观察各组小鼠的一般状态,并在治疗3 d后处死取材。HE染色法观察肺组织的病理改变并评分,ELISA方法检测小鼠血清中IFN-α/β的水平,Q-PCR检测小鼠肺组织RIG-Ⅰ、MAVS、RSV-F、RSV-G等基因的转录水平,免疫荧光、Western Blot检测RSV-F、IRF3、OAS1、MX1等蛋白表达水平。结果:与RSV组比较,QJG药物治疗能够显著抑制肺组织RSV水平,同时改善肺组织炎性损伤(P<0.01)。与RSV组比较,RSV+QJG组小鼠肺组织中RIG-Ⅰ、MAVS、p-IRF3、IFN-α/β、OAS1、MX1等基因的表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。IFN-α阻滞剂的干预能够影响QJG的抗病毒效应及IFN-α、OAS1、MX1升高水平(P<0.01,P<0.05)。结论:QJG可能通过调控Ⅰ型干扰素通路从而发挥抗RSV的效应。

程序性细胞死亡因子10抑制Ⅰ型干扰素表达并促进FMDV复制

旨在探究宿主蛋白程序性细胞死亡因子10(programmed cell death factor 10,PDCD10)通过抑制Ⅰ型干扰素表达进而促进口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的复制。首先,本研究验证了过表达和沉默PDCD10对FMDV复制的影响,接着利用双荧光素酶报告系统探究PDCD10对Ⅰ型干扰素信号通路活化的影响,最后,利用实时荧光定量PCR探究PDCD10对Ⅰ型干扰素通路下游刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)转录的影响。结果表明,过表达PDCD10显著促进FMDV的复制,沉默PDCD10显著抑制FMDV的复制。与对照相比,过表达PDCD10后感染仙台病毒(Sendai virus,SeV)的细胞培养液上清液显著促进FMDV复制,进一步,PDCD10显著抑制SeV诱导的IFN-β启动子以及NF-κB的激活且呈剂量依赖性,并且PDCD10负调控Ⅰ型干扰素通路信号分子转录,最后还发现PDCD10负调控Ⅰ型干扰素下游ISGs转录。本研究结果为深入探究PDCD10在抗病毒天然免疫中的作用积累了资料。

干扰素基因刺激蛋白相关婴幼儿起病的血管病成人起病患者的护理

干扰素基因刺激蛋白相关的婴幼儿起病的血管病(stimulator of interferon genes associated vasculopathy with onset in infancy,SAVI)是一种罕见的单基因遗传的自身炎症性疾病^([1]),为Ⅰ型干扰素通路疾病^([2]),可累及全身多个脏器,具有全身炎症及自身免疫性疾病的特点^([3])。该疾病的发生机制主要是干扰素基因刺激蛋白(stimulator of interferon genes,STING)本身发生功能获得性突变^([4])。

miR-133a-3p高表达对ZIKV复制的影响及其潜在机制

目的探究寨卡病毒(ZIKV)感染A549细胞后诱导的小分子非编码RNA-133a-3p(miR-133a-3p)对ZIKV复制的影响及其潜在机制。方法在1×10^5/mL腺癌人类肺泡基底上皮细胞系A549中感染ZIKV,感染复数(MOI)为0.5,感染后在不同时间点收取RNA样品,以荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-133a-3p相对表达变化;同时在1×10^5/mL的A549中,转染3μL的miR-133a-3p模拟物(miR-133a-3p mimic)使miR-133a-3p高表达,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,感染后48 h收取细胞RNA或蛋白样品,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blots)检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和50 ng海肾荧光报告质粒(pRL-TK)与3μL的miR-133a-3p共转入1×10^5/mL的A549中,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,在处理48 h后通过双荧光报告实验检测含ISRE序列的萤火虫荧光蛋白表达情况。结果ZIKV感染可影响A549细胞内miR-133a-3p表达,相对于0 h,在8、16、24、36、48和72 h,miR-133a-3p值分别为:0.45±0.048、0.4±0.084、0.52±0.004、0.82±0.229、1.41±0.167、2.86±0.219;miR-133a-3p过表达使miR-133a-3p mimic组的ZIKV NS5 RNA相对于mimic control组值为:0.3355±0.031,使IFN-α/β、ISG15、IFIT1(按图A→H的顺序)相对值为:3.46±1.10^5、1.329±0.198、2.723±0.966、1.48±0.0595、3.3±0.4、2.83±0.442、5.79±0.277、1.98±0.362、5.96±0.796、5.94±1.007、7.07±0.1115、5.96±0.7957、5.96±0.796、7.16±0.42、2.2±0.491、1.92±0.189。结论ZIKV感染A549细胞影响miR-133a-3p表达;miR-133a-3p过表达抑制ZIKV复制并激活Jak/STAT信号通路。

IFN-I通路中的ISG15、USP18及MxA表达在特发性炎性肌病中的研究

皮肌炎本质上属于一种自身免疫性疾病,主要是由于免疫功能紊乱而导致的。通常情况下,主要表现为对称性四肢近端肌无力,与此同时,还可能出现骨骼肌以及皮肤损害的情况。近年来研究发现,Ⅰ型干扰素介导的相关信号通路在皮肌炎的发病中具有重要意义,其中以ISG15、USP18及MxA通路蛋白的表达在皮肌炎发病中所起的作用正在成为新的研究方向。本文对Ⅰ型干扰素的产生、Ⅰ型干扰素在JAK/STATs通路中的作用机制、Ⅰ型干扰素下游的表达产物ISG15、USP18及MxA等,在皮肌炎发病中的作用进行综述。

NEAT1与系统性红斑狼疮发病的相关研究

本研究探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达情况及其意义。收集诊断明确的42例SLE患者和54例正常对照者外周血,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测NEAT1的表达并分析其与SLE临床特征和干扰素(IFN)积分的相关性。与正常对照相比,NEAT1在SIE患者外周血中异常高表达,并且NEAT1的表达水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、SLE肾脏损伤活动指数(Renal-SLEDAI)、干扰索积分显著正相关,SLE并蛋白尿患者NEAT1表达量显著高于SLE非蛋白尿患者,SLE并低补体患者NEAT1表达量显著高于SLE并正常补体患者,这就为SLE发病机制的研究提示了新的方向。