三阴性乳腺癌中Ⅰ型胶原蛋白α1链高表达对患者预后的影响

目的了解Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达,探讨其与TNBC临床病理特征及患者预后的关系。方法收集TNBC手术标本148例,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测COL1A1的mRNA表达,采用Western blot法检测COL1A1的蛋白表达,采用免疫组化法检测COL1A1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达状态,分析COL1A1表达状态与TNBC患者临床病理特征和预后的关系。结果MDA-MB-231细胞中COL1A1的mRNA和蛋白表达量分别为1.696±0.486和0.550±0.088,均高于MCF-10A细胞(分别为1.020±0.231和0.350±0.083;P=0.032,P=0.046)。TNBC组织中COL1A1的mRNA和蛋白表达量分别为1.632±0.598和0.733±0.068,均高于癌旁组织(分别为1.041±0.316和0.612±0.016;P=0.003,P=0.039)。TNBC组织COL1A1和α-SMA的高表达率分别为35.8%和56.7%,均高于癌旁组织(分别为16.7%和30.0%;P=0.041,P=0.037)。COL1A1的表达与TNBC的肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移、脉管侵犯、α-SMA表达有关(均P<0.05)。COL1A1高表达组患者的中位生存时间为64个月,低于低表达组(73个月,P<0.05)。Cox比例风险回归模型多因素分析显示,COL1A1表达是TNBC患者生存的独立影响因素(HR=3.952,P=0.004)。结论COL1A1在TNBC组织中高表达,是TNBC患者预后的独立影响因素。

苯丙酸诺龙对烧伤后α1(Ⅰ)型前胶原蛋白mRNA表达影响的实验研究

目的 探讨苯丙酸诺龙对烧伤后成纤维细胞 α1( )型前胶原蛋白 m RNA表达的影响及其作用机制。 方法 Wistar大鼠 32只 ,制成 2 0 % TBSA深 度烧伤模型 ,随机分为苯丙酸诺龙治疗 (NP)组和对照组 ,于 4、7、14和2 1天分别取创面肉芽组织 ,测定其成纤维细胞中雄激素受体及 α1( )型前胶原蛋白 m RNA含量 ,分析比较两组间成纤维细胞雄激素受体和α1( )型前胶原蛋白 m RNA的表达及其相关关系。 结果 NP组在 7、14和 2 1天α1( )型前胶原蛋白 m RNA的表达均高于同期对照组 ,两组间比较有统计学意义 (P<0 .0 5 )。 NP在 4、7、14和 2 1天成纤维细胞雄激素受体的表达均明显高于同期对照组 ,有统计学意义 (P<0 .0 5 )。雄激素受体的表达与胶原蛋白基因的表达之间有相关关系 ,且有统计学意义。 结论 NP能促进 型前胶原蛋白 m RNA和成纤维细胞雄激素受体的表达 ,二者间存在正相关关系 ,NP在转录水平促进胶原蛋白的合成 ,这种作用与改变成纤维细胞雄激素受体的含量有关。

超声联合4-羟苯基维胺微泡对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白α1链表达的影响

目的探讨超声联合4-羟苯基维胺(4-HPR)微泡对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响。方法体外培养KF,分为对照组、15 mg/L 4-HPR微泡组和超声联合15 mg/L 4-HPR微泡组,处理24 h后,运用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法分别测定各组KF中COL1A1 mRNA及其蛋白的表达。结果对照组、4-HPR微泡组和超声联合4-HPR微泡组COL1A1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.18、0.69±0.15和0.35±0.18,COL1A1蛋白相对表达水平为0.93±0.03、0.74±0.07和0.44±0.06。4-HPR微泡组和超声联合4-HPR微泡组COL1A1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或0.001);而超声联合4-HPR微泡组COL1A1 mRNA和蛋白表达水平均显著低于4-HPR微泡组(均P<0.05)。结论超声联合4-HPR微泡对KF中COL1A1 mRNA及蛋白的表达有明显抑制作用。

基于COL1A1启动子和增强型绿色荧光蛋白基因建立人肝星状细胞活化的细胞模型

目的:建立评价人肝星状细胞中Ⅰ型胶原蛋白Ⅰα1肽链(collagen Iα1 chain,COL1A1)基因启动子活性的可视化报告系统,判断细胞的活化状态,为抗肝纤维化药物的研究提供细胞模型。方法:以人肝癌细胞株HepG2基因组DNA为模板,扩增COL1A1启动子序列。在pLVX-AcGFP1-N1质粒基础上构建以COL1A1启动子调控增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因表达的重组质粒pLVX-COL1A1-EGFP。使用慢病毒包装系统将pLVX-COL1A1-EGFP稳定转染至永生化的人肝星状细胞LX-2中,并筛选单克隆细胞株。对该细胞株使用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)激活及2种具有潜在抗肝纤维化作用的药物处理。使用荧光显微镜及ImageJ 1.49软件对细胞中EGFP荧光强度进行半定量分析,再分别使用逆转录实时定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和免疫印迹试验检测胞内COL1A1和EGFP的mRNA水平与蛋白质水平。结果:构建了由COL1A1启动子调控EGFP表达的重组慢病毒质粒pLVX-COL1A1-EGFP,并加入了Kozak序列以增强EGFP的表达,获得了稳定转染pLVX-COL1A1-EGFP的LX-2单克隆细胞株LX-2-CE。LX-2-CE经过TGF-β1和具有潜在抗肝纤维化作用的5μmol/L二氢丹参酮Ⅰ共处理24 h后,其总荧光强度和平均荧光强度均低于TGF-β1单处理组(P<0.05);胞内COL1A1和EGFP的mRNA水平与蛋白质水平同样均低于TGF-β1单处理组(P<0.05)。结论:成功构建了基于COL1A1启动子调控EGFP表达的肝星状细胞活化的报告系统,可在体外直观报告肝星状细胞活化相关标志物COL1A1表达,为抗肝纤维化药物的筛选和研究提供了新的细胞模型。

血管紧张素-(1-7)及丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂U0126对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠右心室心肌成纤维细胞增殖的影响

目的通过大鼠右心室心肌成纤维细胞(RVCFs)体外培养,探讨血管紧张素(Ang)-(1-7)及丝裂原活化蛋白激酶激酶抑制剂U0126对AngⅡ诱导的RVCFs的影响。方法提取乳大鼠RVCFs,经过抗波形蛋白免疫荧光法鉴定,传代培养至第3代,随机分为对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组(分为低、中、高剂量组)、U0126组(分为低、中、高剂量组)。采用噻唑蓝比色法测定各组细胞增殖情况;蛋白质印迹法检测各组Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)表达水平;免疫组织化学法测定转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平。结果AngⅡ组RVCFs的细胞增殖率明显高于对照组[(141.7±9.6)%比(100.0±0.0)%],Ang-(1-7)低、中、高剂量组,U0126低、中、高剂量组RVCFs的细胞增殖率[(118.2±4.9)%、(52.1±5.9)%、(43.6±2.5)%,(43.0±2.3)%、(43.3±3.7)%、(49.4±4.6)%]均显著低于AngⅡ组(均P<0.05),且Ang-(1-7)对RVCFs增殖的抑制作用呈剂量反应关系。AngⅡ能促进RVCFs COL1A1表达,Ang-(1-7)及U0126对AngⅡ诱导的COL1A1表达均有抑制作用。TGF-β1免疫组化阳性反应分级示对照组(+)、AngⅡ组(+++)、Ang-(1-7)组(++)、U0126组(+)。结论Ang-(1-7)、U0126可部分抵消AngⅡ刺激导致的RVCFs增殖,抑制TGF-β1和COL1A1的蛋白表达。

COL1A1、KPNA2在三阴性乳腺癌组织中的表达及与远期预后的关系

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、核转运蛋白α2(KPNA2)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与远期预后的关系。方法收集2016年6月—2017年6月本院收治的87例TNBC患者为研究对象,患者均经手术留取癌组织及癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测COL1A1、KPNA2在各组织标本中的表达情况,分析两者表达情况与患者病理特征的关系,绘制生存曲线分析二者表达情况与患者5年预后的关系,采用COX回归模型分析影响患者预后生存的因素。结果COL1A1、KPNA2在TNBC患者癌组织中高表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。在TNBC癌组织中,COL1A1、KPNA2高表达与组织学分级、脉管侵犯、淋巴结转移情况有关(P<0.05),COL1A1高表达还与临床分期有关(P<0.05)。随访5年,87例患者总生存率78.16%(68/87),COL1A1高表达者生存期较低表达者更短(P<0.05),KPNA2高表达者较低表达者生存期更短(P<0.05)。COX回归分析显示,临床分期Ⅲ期、有淋巴结转移、COL1A1高表达、KPNA2高表达是三阴性乳腺癌患者预后生存的影响因素(P<0.05)。结论COL1A1、KPNA2在TNBC患者癌组织中表达均增加,两者高表达与患者组织学分级、脉管侵犯、淋巴结转移情况均有关,且影响患者远期预后。

血清COL1A1/2表达与颅内动脉瘤破裂的相关性研究

目的检测颅内动脉瘤(IA)患者血清Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)的表达水平,探讨其与动脉瘤破裂的相关性。方法以我院收治的110例IA患者为IA组,另选取同期在我院进行健康体检的志愿者100例为对照组。采用ELISA法检测血清COL1A1、COL1A2表达水平。根据有无动脉瘤破裂将IA患者分为破裂组(n=66)与未破裂组(n=44),比较2组患者临床资料及血清COL1A1、COL1A2表达水平。比较不同Hunt-Hess分级患者血清COL1A1、COL1A2表达水平。采用多因素Logistic回归分析影响IA患者动脉瘤破裂的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清COL1A1、COL1A2对IA患者动脉瘤破裂的预测价值。采用Spearman相关性分析破裂组患者血清COL1A1、COL1A2与Hunt-Hess分级的相关性。结果IA组患者血清COL1A1、COL1A2表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。破裂组患者高血压、糖尿病、高脂血症、动脉瘤直径>10 mm例数及COL1A1、COL1A2表达水平均明显多/高于未破裂组(P<0.05)。Hunt-Hess分级Ⅲ~Ⅳ级患者血清COL1A1、COL1A2表达水平明显高于Ⅰ~Ⅱ级患者(P<0.05)。破裂组患者血清COL1A1、COL1A2表达水平与Hunt-Hess分级均呈正相关(r=0.562、0.414,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压,糖尿病,动脉瘤直径>10 mm,COL1A1、COL1A2表达水平升高是IA患者动脉瘤破裂的危险因素(P<0.05)。血清COL1A1、COL1A2联合预测IA患者动脉瘤破裂的曲线下面积(AUC)显著大于COL1A1单独预测(Z=1.905,P=0.028)及COL1A2单独预测(Z=1.754,P=0.040)。结论COL1A1、COL1A2表达水平升高是IA患者动脉瘤破裂的危险因素,二者联合预测IA患者动脉瘤破裂有一定的临床价值。

结直肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平及临床意义

目的探讨结直肠癌组织的Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)和α2链(COL1A2)水平及临床意义。方法采用GEPIA分析来自TCGA数据库的367例结直肠癌(275例结肠癌+92例直肠癌)的COL1A1、COL1A2水平,实时定量PCR检测2016年1月至2018年12月手术切除的106例结直肠癌组织和93例癌旁组织的COL1A1、COL1A2水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估组织两者水平诊断结直肠癌的效能,分析组织两者水平与结直肠癌临床病理特征的关系,采用GEPIA分析两者水平与结直肠癌总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的关系。结果GEPIA在线分析显示,275例结肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平均高于对应41例正常组织,而92例直肠癌组织中仅COL1A1水平高于10例正常组织(P<0.05)。106例结直肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平分别为4.013±1.705和3.535±1.354,高于93例癌旁组织的1.544±0.678和1.613±0.741(P<0.05),且COL1A1和COL1A2水平呈正相关(r=0.518,P<0.001)。ROC曲线显示组织COL1A1和COL1A2水平诊断结直肠癌的曲线下面积分别为0.894(95%CI:0.848~0.941)和0.882(95%CI:0.837~0.927)。两者水平均与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期和T分期有关(P<0.05)。COL1A1水平仅与DFS有关,而COL1A2水平与OS和DFS均有关,其中高水平者的OS和DFS较差。结论COL1A1和COL1A2在结直肠癌中高表达,在该肿瘤的诊断、病情预测和预后评估上有一定价值,两者共同促进了结直肠癌的发生发展。

皮肤桥蛋白通过转化生长因子β1促进皮肤纤维化的机制研究

目的探讨皮肤桥蛋白在转化生长因子β1介导的成纤维细胞活化促进皮肤纤维化过程中的作用机制。方法2022年3月至2023年7月,实验在上海交通大学医学院附属第九人民医院开展。于体外培养C57BL/6J小鼠皮肤成纤维细胞,用小干扰RNA进行皮肤桥蛋白的敲除并筛选沉默效率最高的小干扰RNA序列。确认转化生长因子β1刺激成纤维细胞的活化的最佳作用浓度。在体外建立敲除皮肤桥蛋白的小鼠皮肤成纤维细胞模型并加入转化生长因子β1促进其纤维化,利用CCK-8实验、流式细胞术等方法观察转化生长因子β1刺激后对成纤维细胞增殖、凋亡和细胞周期调控的影响,通过实时荧光定量反转录聚合酶链式反应检测纤连蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白α1链的RNA表达水平。结果小干扰RNA序列-3为沉默皮肤桥蛋白效率最高的序列(F=80.77,P<0.05)。转化生长因子β1刺激成纤维细胞活化的最佳浓度为10 ng/ml。CCK-8实验显示,敲除皮肤桥蛋白可显著抑制转化生长因子β1促进的成纤维细胞增殖(F=71.06,P<0.05)。流式细胞仪结果显示,敲除皮肤桥蛋白可阻止成纤维细胞进入G2/M期,差异均有统计学意义(F=11.15、8.30,均P<0.05),但对成纤维细胞凋亡无明显影响,显示皮肤桥蛋白主要通过加快细胞周期进程促进转化生长因子β1介导的细胞增殖。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应的结果显示敲除皮肤桥蛋白后,纤连蛋白和Ⅰ型胶原蛋白α1链的表达下降,差异均有统计学意义(F=109.30、8.82,均P<0.05),α-平滑肌肌动蛋白的表达变化差异无统计学意义,证明皮肤桥蛋白可促进转化生长因子β1介导的成纤维细胞纤维化指标的表达。结论皮肤桥蛋白在转化生长因子β1介导的成纤维细胞活化引起的皮肤纤维化过程中起着重要的调控作用。

COLIA1调控小鼠神经细胞迁移在神经管畸形中的作用

目的探讨Ⅰ型胶原蛋白α1(COLIA1)调控神经细胞迁移活动对小鼠神经管闭合的作用。方法利用全反式维甲酸(ATRA)诱导建立神经管畸形(NTDs)小鼠模型。采用Western blotting检测COLIA1,上皮细胞间质转化(EMT)相关指标E-cadherin、Snail、Vimentin表达情况。在C17.2神经干细胞中沉默COLIA1后,Western blotting检测COLIA1对E-cadherin、Snail和Vimentin表达的调节作用,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验观察细胞迁移生物学活动变化。结果在ATRA诱导的NTDs小鼠模型中,COLIA1表达下调,迁移相关的EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调。在C17.2神经干细胞中,沉默COLIA1表达后,EMT指标Snail、Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,细胞迁移能力降低。结论COLIA1通过影响细胞迁移抑制NTDs的形成。

逍遥舒坤颗粒对大鼠盆腔炎性疾病后遗症的治疗作用及其机制

目的 探讨逍遥舒坤颗粒灌胃治疗对大鼠盆腔炎性疾病后遗症(SPID)的治疗作用及其机制。方法 将39只Wistar雌性大鼠随机分为对照组、模型组、药物干预组,每组各13只。对照组常规饲养,模型组和药物干预组以疲劳、饥饿辅助大肠杆菌上行感染法建立SPID模型。药物干预组于造模成功后给予逍遥舒坤颗粒浓缩药液灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃,连续14 d。治疗结束后,取各组大鼠子宫、输卵管组织,先观察外观形态,然后采用HE染色法观察组织形态和结构;Western blotting法检测子宫组织纤维化相关蛋白Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达情况。结果 与对照组比较,模型组和药物干预组均有不同程度的输卵管增粗、阻塞、积水,输卵管卵巢粘连、包块、囊肿,盆腔结缔组织增生、粘连。与模型组比较,药物干预组子宫和输卵管外观形态、病理形态均有所改善。与对照组比较,模型组子宫组织COL1A1表达升高、MMP-9表达下降;与模型组比较,药物干预组子宫组织COL1A1表达下降、MMP-9表达升高(P均<0.05)。结论 逍遥舒坤颗粒能够抑制SPID大鼠子宫成纤维细胞增殖,减轻纤维化程度,防止和减轻粘连形成,从而治疗SPID;其机制可能与上调子宫组织中MMP-9表达、抑制COL1A1合成有关。

麦洼牦牛初乳期乳腺中2个特异表达EST片段的克隆与分析

为研究牦牛初乳期乳腺特异表达的基因,采用抑制消减杂交和斑点杂交法对麦洼牦牛初乳期(产犊后2 d)和常乳期(产犊后18 d)特异表达的基因进行了分离鉴定。结果发现2个在初乳期间特异表达的EST片段,并命名为LAO和COL1α1。测序结果LAO片段长698 bp,GenBank比对,其核苷酸序列与西藏黄牛(Bos taurus)、小家鼠(Mus musculus)、家犬(Canis familiaris)等的L-氨基酸氧化酶基因有较高的序列相似性,其序列一致性分别达到96%、73%、72%;COL1α1片段长337 bp,比对结果,其序列与Bos taurus、马鹿(Cervus elaphus)、家犬(Canis lupus fa-miliaris)等的Ⅰ型胶原蛋白α1有较高的序列相似性,其序列一致性分别为100%、100%、99%。2个序列与牛基因组的Blast分析表明,LAO片段定位于3号染色体LOC782545区,该区域编码1个L-氨基酸氧化酶基因;另一片段定位于19号染色体LOC615867区,该区域编码1个Ⅰ型胶原α1基因。研究表明,L-氨基酸氧化酶基因和Ⅰ型胶原蛋白α1基因是牦牛初乳期乳腺特异表达蛋白,这2个基因在牦牛初乳期乳腺组织中较高的表达水平可能与初乳期乳腺特殊的生理状态有关。

恶性胸膜间皮瘤组织中COL1A1和COL1A2基因的表达及临床意义

目的:探讨恶性胸膜间皮瘤(MPM)组织的Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)和Ⅰ型胶原蛋白α2链(COL1A2)基因的表达水平及临床意义。方法:于2020年1月,收集26例MPM患者的MPM组织及相邻的正常胸膜组织,采用定量反转录PCR测定组织中COL1A1和COL1A2基因表达水平,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估两者诊断MPM的效能。通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析COL1A1和COL1A2基因表达与临床病理特征的关系,采用基因表达谱动态分析两者表达水平与MPM患者总生存率(OS)和无疾病进展生存率(DFS)的关系,通过Cox比例风险回归模型探讨影响MPM患者预后的因素。采用TIMER 2.0平台探讨COL1A1和COL1A2基因在MPM中的表达与肿瘤免疫浸润性细胞的关系。结果:与正常胸膜组织比较,MPM组织中COL1A1和COL1A2基因表达量明显增加(P<0.01),且两者表达呈正相关(P<0.001);ROC曲线显示,COL1A1和COL1A2表达水平诊断MPM的曲线下面积分别为0.900和0.897。COL1A1基因表达量与MPM患者肿瘤类型有关(P<0.05),COL1A2基因表达量与MPM患者T分期有关(P<0.05)。COL1A1和COL1A2基因表达量与MPM患者OS均有关联(Logrank P<0.05),与DFS的关联均无统计学意义(Logrank P>0.05)。Cox多因素分析结果显示,COL1A1和COL1A2基因高表达及双相混合型MPM患者的死亡风险较高(P<0.05)。TIMER 2.0平台分析结果显示,COL1A1和COL1A2基因在MPM中的表达与巨噬细胞均呈正相关,COL1A2基因在MPM中的表达与中性粒细胞呈负相关(P<0.05)。结论:COL1A1和COL1A2基因在MPM组织中高表达,对MPM的诊断、病情预测和预后评估有一定的价值,两者可能共同促进了MPM的发生发展。