日本七鳃鳗转化生长因子βⅠ型受体基因(L-Tgfbr1)的克隆与表达分析

作为无颌类脊椎动物的现存代表之一,日本七鳃鳗(Lampetrajaponica)是研究免疫系统起源与进化的重要模型。为了探究TGF-β(Transforming growth factor beta)信号通路在日本七鳃鳗免疫调节中的功能,本研究利用PCR技术克隆了日本七鳃鳗TGF-βⅠ型受体基因(L-Tgfbr1)的编码序列,开放阅读框长度为1335 bp,编码444个氨基酸残基。L-Tgfbr1蛋白含有已知的TGF-βⅠ型受体分子的主要功能结构域,其中位于胞内的丝/苏氨酸激酶催化结构域保守性较高。系统进化树分析表明,L-Tgfbr1处于脊椎动物Tgfbr1蛋白的底端进化枝上,表明其在Tgfbr1进化史中具有原始性地位。实时定量PCR结果发现,L-Tgfbr1在心脏等组织中的转录水平较高。利用脂多糖注入七鳃鳗激活其先天性免疫应答,L-Tgfbr1在肾脏、鳃、髓小体、肝脏、白细胞、口腔腺中的转录水平呈现一过性的迅速上调。利用免疫印迹进一步验证了脂多糖免疫24 h时后L-Tgfbr1在白细胞中的蛋白表达水平显著上调。利用免疫荧光染色发现L-Tgfbr1蛋白主要分布于七鳃鳗白细胞和髓小体细胞的细胞质中。以上结果表明L-Tgfbr1及其介导的TGF-β通路可能在七鳃鳗免疫调控中发挥重要功能。

盆炎通络方对输卵管炎性阻塞性不孕症模型大鼠转化生长因子-β1、Ⅱ型转化生长因子-β受体和Smad3表达的影响

目的:研究盆炎通络方对输卵管炎性阻塞性不孕症(Salpingitis Obstructive Infertility,SOI)模型大鼠转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、Ⅱ型TGF-β受体(TGF-βTypeⅡReceptor,TβRⅡ)和Smad3表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用双侧输卵管注射苯酚糊剂法制备SOI大鼠模型。造模成功后随机分为假手术组、模型组、康妇炎胶囊组、盆炎通络方低剂量组、盆炎通络方中剂量组、盆炎通络方高剂量组共6组。灌胃治疗30 d后,观察输卵管外观形态,并收集输卵管组织,采用苏木精-伊红染色法观察病理情况,免疫组化法检测输卵管组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达。结果:肉眼观察,与模型组对比,各治疗组输卵管组织充血、肿胀现象均有不同程度的改善,以盆炎通络方高剂量组最为明显。光镜下,各治疗组均不程度地减轻了大鼠输卵管组织炎性反应、改善了输卵管组织纤维化。与假手术组对比,模型组输卵管组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达量明显增加(P<0.01)。与模型组对比,各治疗组输卵组织中TGF-β1、TβRⅡ和Smad3表达量均减少(P<0.05,P<0.01)。结论:盆炎通络方是治疗SOI的有效方剂,其可能的机制是下调输卵管组织中TGF-β1及TβRⅡ和Smad3表达,减轻炎症反应、抑制输卵管组织纤维化,从而改善输卵管组织结构。

韧带愈合过程中转化生长因子β_1及其Ⅰ型受体表达的实验研究

目的 :探索TGFβ1及TGFβRI在韧带愈合过程中的作用机制。方法 :应用大白鼠膝MCL损伤模型 ,通过免疫组化的方法 ,研究TGFβ1及TGFβRI在韧带愈合过程中的表达特点。结果 :TGFβ1及TGFβRI的表达具有一定的规律性 ;表达主要分布于成纤维细胞和血管内皮细胞中 ,呈带状分布 ,越靠韧带断端 ,表达越丰富 ,表达高峰期在伤后 9d ,其中TGFβ1的峰值较TGFβRI略早些 ,表达强度的下降也更快。结论 :韧带愈合过程中TGFβ1及TGFβRI的规律性变化与韧带关系密切 ,TGFβ1对韧带愈合具有调节作用 ,结合其变化规律 ,合理应用外源性的TGFβ1可能促进韧带愈合。

转化生长因子β_1及其Ⅰ型和Ⅱ型受体在子宫内膜腺癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)在子宫内膜腺癌组织中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组织化学的方法检测48例子宫内膜腺癌、19例子宫内膜非典型增生、20例正常增殖期子宫内膜组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达情况,并结合临床资料进行分析。结果 TGF-β1、TβRⅠ在子宫内膜腺癌、子宫内膜非典型增生中的表达明显低于正常增殖期子宫内膜(P<0.01),TβRⅡ在子宫内膜腺癌、子宫内膜非典型增生及正常增殖期子宫内膜之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ在中、低分化癌组织中的表达明显低于高分化癌组织(P<0.05,P<0.01),但三者的表达与临床分期、肌层浸润、淋巴结转移无明显关系(P>0.05)。正常增殖期子宫内膜、子宫内膜非典型增生组织中TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ三者之间表达呈一致性,两两均呈正相关,但子宫内膜腺癌组织中TβRⅠ、TβRⅡ的表达缺乏相关性。结论 TGF-β1、TβRⅠ、TβRⅡ表达的异常共同参与了子宫内膜腺癌的发生和发展,但TβRⅠ表达的下调可能是始动因素,起着更关键的作用。

瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子-βⅠ、Ⅱ型受体的表达及调控

目的 :了解瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子 (Transforminggrowthfactor ,TGF) βⅠ、Ⅱ型受体的表达及TGF β1 、β3对其的影响。方法 :体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)和正常皮肤成纤维细胞 (NFB) ,利用免疫组化及计算机图象分析系统测定TGF βⅠ、Ⅱ型受体含量。 结果 :KFB胞浆内阳性信号明显强于NFB (P <0 0 5 ) ;经TGF β1 、β3处理组胞浆内阳性信号差别均不明显 (P >0 0 5 )。结论 :KFB存在高表达的TGF βⅠ、Ⅱ型受体 ;TGF β1 、β3均能促进KFBTGF βⅠ。

转化生长因子βⅠ型受体、Ⅰ型胶原在人皮肤增生性瘢痕组织周边区和中心区的表达

背景:近年来国内外学者对转化生长因子β及其受体的研究较多,但转化生长因子β受体1在增生性瘢痕组织周边区分布情况尚未见报道。目的:比较转化生长因子βⅠ型受体和Ⅰ型胶原在人皮肤增生性瘢痕组织周边区和中心区表达与分布。方法:收集新疆医科大学第一附属医院整形外科和新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺、头颈外科1999/2002住院及门诊各类瘢痕手术患者30例,其中增生性瘢痕20例;非增生性瘢痕10例。取材瘢痕中心区、周边区及正常皮肤组织,每例6块共180块。用免疫组织化学方法检测组织转化生长因子βⅠ型受体、Ⅰ型胶原蛋白含量,对其阳性反应进行定量统计分析。结果与结论:增生性瘢痕组织转化生长因子βⅠ型受体、Ⅰ型胶原水平明显高于非增生性瘢痕组织和正常皮肤,且免疫阳性反应强。增生性瘢痕周边区转化生长因子βⅠ型受体含量100%,明显高于中心区20%(P<0.05);而Ⅰ型胶原中心区与周边区均为100%,差异无显著性意义。非增生性瘢痕周边区、中心区转化生长因子βⅠ型受体、Ⅰ型胶原差异无显著性意义(P>0.05);正常皮肤组织转化生长因子βⅠ型受体、Ⅰ型胶原含量极少。结果提示,增生性瘢痕周边区转化生长因子βⅠ型受体表达高于中心区,增生性瘢痕周边区的防治可能是临床防治工作的重点。

鼠反义转化生长因子βⅠ型受体真核表达质粒的构建与鉴定

目的:构建鼠反义转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)基因pcDNA3.1(+)真核表达质粒,为进一步研究通过TβRⅠ干预肝纤维化的发生发展提供实验基础.方法:将取冰冻保存的大鼠肝组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度.使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的基因TβRⅠcDNA片段,采用巢式PCR扩增TβRⅠ基因片断.用CaCl2法诱导感受态细胞.将真核表达载体pcDNA3.1(+)在多克隆位点处用EcoRⅠ、XholⅠ双酶切线性化,切胶纯化回收;TβRⅠ基因片断双酶切后切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1(+)线性化载体和TβRⅠ基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1(+)为载体的反义TβRⅠ基因真核表达质粒.转化JM109大肠杆菌.酶切证实的阳性克隆行测序分析.结果:琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好;并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9150,认为RNA纯度良好;RNA浓度为770mg/L.阳性克隆质粒经双酶切后行10g/L琼脂糖凝胶电泳在DNAMarker430bp和线性化纯化后pcDNA3.1(+),5.3kb附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功.DNA测序结果与预期目的片段序列一致.结论:鼠反义TβRⅠ/pcDNA3.1(+)真核表达重组质粒构建成功.

转化生长因子β型受体Ⅰ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人胚肺成纤维细胞中的表达

目的:构建转化生长因子β型受体Ⅰ(transforming growth factor beta receptorⅠ,TGFβRⅠ)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并在人胚肺成纤维细胞株MRC-5上鉴定其沉默效应。方法:构建4种针对人TGFβRⅠ基因不同干扰靶点的慢病毒干扰载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,将筛选出的4种有效重组慢病毒干扰载体和其它辅助质粒一起共转染293T细胞并测定病毒滴度。最后将4种重组的慢病毒干扰载体分别感染MRC-5细胞,采用Real-time PCR和Western blot检测它们对靶基因的沉默效率。结果:经双酶切鉴定和DNA测序,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体且插入的序列正确。4种重组慢病毒干扰载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度分别为:si RNA-1 6.37×107 TU/ml、si RNA-2 1.65×108 TU/ml、si RNA-3 4.50×108TU/ml、si RNA-4 2.31×108TU/ml,阴性对照组载体包装后的病毒滴度为:1.79×109 TU/ml。4种重组慢病毒干扰载体感染MRC-5细胞的效率均为93%左右。与正常对照组和阴性对照组比较,在感染4种重组慢病毒干扰载体(si RNA-1~4)后,MRC-5细胞内TGFβRⅠm RNA表达水平均明显下降(P=0.000),其中TGFβRⅠ-si RNA-2下降最明显,沉默效率最好。Western blot结果与q RT-PCR结果一致,4种重组慢病毒干扰载体均能使MRC-5细胞内TGFβRⅠ蛋白表达明显下降(P=0.000),且TGFβRⅠ-si RNA-2干扰效率最大。结论:筛选并构建了能有效沉默TGFβRⅠ基因的最佳RNAi重组慢病毒载体——TGFβR-si RNA-2,从而为后续研究奠定基础。

非小细胞肺癌中转化生长因子βⅠ型受体基因的缺陷表达(英文)

转化生长因子β(TGF-β)信号转导通路的紊乱可使细胞逃避TGF-β介导的生长抑制效应,从而导致多种肿瘤的发生.本研究探讨了转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的作用.采用免疫组化进行TGFβRⅠ基因的表达分析:采用单链构象多态性(SSCP)分析TGFβRⅠ基因结构的变异.结果发现37.2％NSCLC中TGFβRⅠ的表达下降,表明TGFβRⅠ在NSCLC发生中起着重要的作用.同时在TGFβRⅠ基因的第7号内含子中发现了一个单核苷酸多态性(SNP),SNP与TGFβRⅠ的表达下降无显著关系(P>0.05).

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体与凝血纤溶因子的相关研究及其促使肾小球硬化的机制探讨

目的 探讨TGF β1 (transforminggrowthfactorβ1 、TGF β1 )、TGF βRⅠ、Ⅱ (TGF βRTypeⅠ ,Ⅱreceptor,TGF βRⅠ、Ⅱ )在人类各种肾小球疾病中的作用及与凝血纤溶因子 (FRA、FN、α2 PI、PLG)之间的相互关系及其促使肾小球硬化的作用机理 ,从而寻找影响肾小球疾病发生发展的主要因素。方法 采用免疫组化SABC法检测系膜增生性肾炎 (MsPGN)、系膜毛细血管性肾炎(MPGN)、局灶节段性肾小球硬化 (FGS)、膜性肾病 (MN)共 4 1例中TGF β1 、TGF βRⅠ、Ⅱ的表达 ;直接免疫荧光法检测FN和FRA ;间接免疫荧光法检测α2 PI和PLG ;共 6 5例。全部数据采用Ridit分析、Spearman’s等级相关。结果 (1 )TGF β1 、TGF βRⅠ、Ⅱ与FRA、FN、α2 PI、PLG之间存在显著正相关 ,随肾组织炎症程度及纤维化程度加重 ,其表达增强。 (2 )肾小球纤维化是多因素共同作用的结果。其中TGF β1 、TGF βRⅠ、Ⅱ与FRA、FN起着非常重要的主因素作用。 结论 TGF β1 、TGF βRⅠ、Ⅱ与FRA、FN、α2 PⅠ、PLG在肾组织内的共同表达及协同作用 。

转化生长因子βⅠ型受体与胆囊癌细胞增殖的关系

目的 :研究转化生长因子 βI型受体 (TβRⅠ )与胆囊癌细胞增殖的关系 ,并探讨TβRⅠ在胆囊癌变过程中的作用机理。方法 :应用S P免疫组织化学技术对 35例原发性胆囊癌 ,1 0例胆囊腺瘤及 1 0例慢性胆囊炎进行TβRⅠ及增殖细胞核抗原 (PCNA)两种基因蛋白的检测。 结果 :胆囊癌中TβRⅠ阳性率为 34 .2 9% ,显著低于胆囊腺瘤、胆囊炎 (阳性率均为 70 % ) (P <0 .0 5) ,伴淋巴结和远处转移者TβRⅠ阳性表达率明显低于无转移者 (P <0 .0 5) ,Nevin分期与TβRⅠ强阳性表达率呈负相关 (r =- 0 .3986 ,P =0 .0 1 77)。胆囊癌TβRⅠ表达水平与增殖细胞核抗原标记指数 (PCNALI)呈负相关 (r =- 0 .40 2 4 ,P =0 .0 1 66)。TβRⅠ表达与病理组织学分级及性别、年龄无关。结论 :胆囊癌TβRⅠ表达减少 ,可促进肿瘤细胞的增殖、浸润和转移 ;TβRⅠ的低表达而导致的转化生长因子 β(TGFβ)负性生长调控作用的逃逸 。

转化生长因子βⅠ型受体多态性与食管鳞状细胞癌发病风险的关联

目的:探讨转化生长因子βI型受体(transforming growth factor-beta receptor type 1 gene,TGFBR1)*6A和Int7G24A多态性与中国北方人群食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)遗传易感性的关系。方法:选择482名食管鳞癌患者和584名正常健康体检者作对照,分别采用PCR和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测两组受试者外周血单个核细胞染色体DNA中,TGFBR1第1外显子*6A和第7内含子Int7G24A的多态性分布情况。同时对ESCC患者术后的切除肿瘤组织采用免疫组织化学方法检测TGFBR1的蛋白表达情况,并与其基因型进行相关分析。结果:TGFBR1基因*6A多态性位点的基因型及等位基因型频率,在ESCC患者组和对照组之间,其分布差异均无统计学意义(P>0.05)。TGFBR1基因Int7G24A多态性位点的基因型和等位基因型频率,在ESCC组和对照组间分布的差异均具有统计学意义(P<0.05),A等位基因携带者患ESCC的风险是G等位基因的1.38倍(经性别、年龄和上消化道肿瘤家族史校正后的OR=1.38,95%CI=1.04～1.75),与GG基因型相比,携带AA基因型可显著增加ESCC的发病风险(校正后的OR=2.23,95%CI=1.19～3.81)。当按肿瘤分期进行分层分析时发现,与GG基因型相比,Ⅲ期和Ⅳ期ESCC患者中携带GA和AA基因型可显著增加发病风险(校正后的OR=1.61,95%CI=1.10～2.21)。ESCC组织中TGFBR1的蛋白阳性表达率(32.1%)显著低于癌旁正常组织(97.7%)(P<0.01),TGFBR1在ESCC中的蛋白表达与*6A和Int7G24A位点的基因型之间无明显相关性(P>0.05)。结论:转化生长因子βI型受体Int7G24A位点A等位基因可能是我国北方人群食管癌的遗传易感基因,携带A等位基因的个体可增加食管鳞癌的发病风险。

转化生长因子β_1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在人类肾小球疾病中的表达及促使肾组织硬化的机理

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体(TGF-βRⅠ、Ⅱ)在人类肾小球疾病中的肾内表达位点及其与各肾小球疾病的关系。方法采用免疫组化SABC法检测系膜增生性肾炎(MsPGN)22例,系膜毛细血管性肾炎(MPGN)6例,局灶节段性肾小球硬化(FGS)9例,膜性肾病(MN)4例中TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ的表达。结果TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ在各肾小球疾病中均有不同程度的阳性表达。各组中MPGN表达均呈强阳性,差异显著(P<0.05);各组球-管染色强度存在显著差异(P<0.05)。结论TGF-β1、TGF-βRⅠ、Ⅱ的过度表达参与肾小球疾病的进展;其在肾小球、小管及间质细胞均有表达位点,但在肾小管-间质表达呈强阳性,而肾小球呈弱表达。

甲状腺乳头状癌及滤泡状癌I型转化生长因子β受体与增值细胞核抗原的表达状态及意义(英文)

目的观察高分化甲状腺癌I型转化生长因子β(Transforming Growth Factor-β), TGF-β受体与增值细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达状态,讨论TGF-β抵抗机制在甲状腺乳头状癌及滤泡状癌中的可能途径。方法取25例甲状腺乳头状癌、7例甲状腺滤泡状癌及19例正常甲状腺组织标本,免疫组化检测I型TGF-β受体和PCNA蛋白的表达水平。结果I型TGF-β受体与PCNA在甲状腺癌中的阳性率显著高于正常甲状腺组织(P<0.05),两者在甲状腺癌呈正相关关系(r=0.3637、P= 0.0437)。结论TGF-β抵抗机制在本组甲状腺癌中的实现并非通过I型TGF-β受体的丢失,而更可能是II型TGF-β受体丢失或TGF-β合成水平降低所至。

阿托伐他汀对新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA的影响(英文)

目的探讨阿托伐他汀对醛固酮诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达的影响。方法采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养乳鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR检测心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA的表达。结果给予醛固酮(10-7mol/L)4h后,TGF-βRⅠmRNA表达开始增加,8h达高峰;提前给予阿托伐他汀(10-6,10-5,10-4mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮诱导的TGF-βRⅠmRNA表达,而甲羟戊酸可逆转阿托伐他汀的这种抑制作用。结论阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βRⅠmRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。

转化生长因子βⅠ型受体在胆囊癌中的表达及意义

转化生长因子βⅠ型受体(TβRⅠ)在转化生长因子β(TGFβ)信号传递过程中是不可缺少的.本实验采用SP免疫组化染色技术,检测TβRⅠ在35例原发性胆囊癌,10例胆囊腺瘤及10例慢性胆囊炎中的表达情况,探索其在胆囊癌发生、发展过程中的表达规律.

转化生长因子βⅠ型受体对组织纤维化形成及发展的影响

目的探讨转化生长因子βⅠ型受体(TGFβR-Ⅰ)对组织纤维化的形成及发展的影响。方法采用RNA干扰技术阻断人成纤维细胞系HFL-Ⅰ细胞的TGFβR-Ⅰ表达,Western blot法检测RNA干扰前后TGFβR-Ⅰ的表达水平,MTT法分析干扰前后的细胞生长状态,采用动物模型结合HE染色观察RNA干扰阻断TGFβR-Ⅰ表达前后的中毒性肝纤维化模型大鼠的肝脏病理学变化。结果特异性TGFβR-Ⅰ干扰RNA能有效抑制TGFβR-Ⅰ蛋白质合成和成纤维细胞株HFL-Ⅰ细胞的生长,正常鼠肝组织处于纤维化S0期,中毒性肝纤维化模型鼠肝组织处于纤维化S2期,特异性TGFβR-Ⅰ干扰RNA治疗组模型鼠肝组织则呈现纤维化S1期特征。结论抑制TGFβR-Ⅰ的表达可明显减轻中毒性肝纤维化模型大鼠的肝纤维化程度,对进一步优化肝纤维化的预防和治疗策略具有重要意义。

黄芪总黄酮对肝硬化大鼠肝组织转化生长因子βⅠ型膜受体表达的影响

目的:研究黄芪总黄酮对肝硬化大鼠肝组织转化生长因子βⅠ型膜受体(TGFβR1)表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、高剂量组、低剂量组等4组。除正常组外其余3组大鼠均给予二甲基亚硝胺(DMN)腹腔注射造肝硬化模型,共4周。两治疗组从第3周起各予高、低剂量的黄芪总黄酮灌胃,共4周。实验结束后处死大鼠采集标本,肝组织经甲醛固定、石蜡包埋后4m切片,经脱蜡、洗涤、微波抗原修复、5%BSA封闭后,与TGFβR1抗体37℃孵育,以PBS代替一抗做阴性对照,使用二步法免疫组化检测试剂盒,采用SABC法进行检测。肝组织总蛋白使用RIPA裂解液进行抽提,10%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,采用Western blot检测目标蛋白表达水平,采用GAPDH进行校正。结果:免疫组化染色结果显示,与模型组相比,两黄芪总黄酮治疗组TGFβR1染色显著减少,尤以高剂量组为明显。Western blot检测结果显示,与模型组相比,两治疗组大鼠TGF R1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),高剂量组表达水平显著低于低剂量组存(P<0.05)。结论:黄芪总黄酮能够抑制肝硬化大鼠肝组织TGFβR1表达。

5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响

背景:很多实验已证明5-氟尿嘧啶应用于瘢痕疙瘩治疗可收到良好的效果。但作者所查针对5-氟尿嘧啶经由转化生长因子β信号通路作用于瘢痕疙瘩分子机制的报道较少。目的:实验拟观察5-氟尿嘧啶对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7和转化生长因子βⅠ型受体表达的影响。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2007-02/10在安徽医科大学微生物教研室完成。材料:标本分别取自因瘢痕疙瘩入院的6例整形手术患者。方法:①瘢痕疙瘩组织成纤维细胞原代培养,取4～6代传代细胞加入5个不同浓度5-氟尿嘧啶(10,20,40,80,160μmol/L)干预24,48,72h。②待细胞长至80%汇合时,加入5-氟尿嘧啶配成10,20,30μmol/L3个药物干预浓度组,每组再加入转化生长因子β1继续培养。设空白对照和单纯加转化生长因子β1(5μg/L)的阳性对照。主要观察指标:①利用四甲基偶氮唑盐法测定瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力。②蛋白免疫印迹检测各组瘢痕疙瘩成纤维细胞中Smad7和转化生长因子βⅠ型受体的表达。结果:①5-氟尿嘧啶浓度为10,20μmol/L作用24h时未发现成纤维细胞死亡,与空白对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);其他浓度下作用各组均有显著的成纤维细胞死亡现象(P<0.01)。②与空白对照组相比,转化生长因子β1组Smad7表达明显减弱,转化生长因子βⅠ型受体表达则显著增强(P均<0.01)。③加入5-氟尿嘧啶干预后可显著增强Smad7的表达,且在5-氟尿嘧啶浓度为20μmol/L时的表达最强(P<0.01)。④不同浓度5-氟尿嘧啶对转化生长因子βⅠ型受体表达无明显影响。结论:5-氟尿嘧啶浓度为10～20μmol/L时无细胞毒性,与转化生长因子β1共同培养成纤维细胞,能够提高该细胞转化生长因子β1诱导的Smad7表达,但对于转化生长因子βⅠ型受体的表达没有明显影响。

内皮素受体拮抗剂对肝硬化大鼠转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨内皮素受体拮抗剂对肝硬化大鼠转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响。方法:40只雄性SD大鼠,随机分成四氯化碳组、正常对照组、内皮素A受体拮抗剂治疗组、内皮素B受体拮抗剂治疗组和联合治疗组5组,每组8只。后3组在四氯化碳灌胃的基础上2次/d(间隔10h)分别皮下注射BQ-123(12.5μg/kg)和BQ-788(15μg/kg)以及BQ-123+BQ-788(12.5μg/kg+15μg/kg)。取部分肝组织进行常规病理学检测,部分采用RT-PCR测定大鼠肝组织转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:常规病理结果显示内皮素受体拮抗剂处理组肝脏炎症反应及纤维化明显减轻。5组大鼠肝组织转化生长因子β1mRNA表达水平比较,差异无统计学意义(F=2.857,P=0.765);Ⅰ型胶原mRNA表达水平比较[(0.437±0.082)、(0.623±0.142)、(0.655±0.124)、(0.558±0.183)和(0.874±0.170)],差异有统计学意义(F=11.235,P=0.023)。结论:内皮素受体拮抗剂能有效抑制肝硬化大鼠Ⅰ型胶原mRNA的表达,缓解肝脏炎症反应和肝纤维化。