海芦笋内生真菌基于PKS Ⅰ型功能基因的分离与鉴定

以采自新疆盐湖的野生海芦笋为研究对象,以聚酮合成酶(polyketide synthase,PKS)Ⅰ型功能基因为指标,采用平板划线技术、斜面分离纯化技术分离内生真菌,从中筛选出1株含有PKSⅠ型基因、编号为Salix1的内生真菌,进而PCR扩增该菌的18S rDNA和ITS1-5.8S-ITS2 rDNA目标序列,在美国国立生物技术信息中心(National Center of Biotechnology Information,NCBI)上进行同源性分析,构建系统发育树,结合形态学观察,将菌株Salix1鉴定为杂色曲霉。

基于PKS Ⅰ基因海芦笋内生真菌及其次级代谢产物筛选鉴定

一般研究内生真菌的方法都无法预测内生真菌次级代谢产物的类型,本实验以Ⅰ型聚酮合成酶(polyketide synthase,PKS)基因为探针,野生海芦笋(Salicornia bigelovii Torr.)为原料,筛选出菌株Salicorn 3,并对其发酵产物中的化合物进行分离鉴定。结果表明:经过ITS1-5.8S-ITS4 rDNA同源序列鉴定的菌株Salicorn 3为圆弧青霉(Penicillium cyclopium),通过系统发育树分析并结合文献数据比较,表明该菌株具有产生聚酮类化合物的潜力。通过常压硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析从其发酵产物中分离得到两个单体化合物,采用核磁共振和电喷雾质谱鉴定其化学结构分别为二酮哌嗪生物碱和脑苷脂C。

抗农作物病原真菌微生物的筛选及其聚酮合酶基因的分析

以5种农作物病原真菌为指示菌,从湖北省神农架地区的土壤中筛选得到1株抗真菌放线菌,命名为ⅡR21菌株.经过形态观察、培养特征、生理生化分析和16S rDNA序列同源性分析,初步鉴定该菌株属于链霉菌属.发酵液稳定性研究表明：ⅡR21菌株发酵液在-20℃～80℃范围内具有较强的稳定性;在pH 4.0～7.0范围内,ⅡR21菌株发酵液的抑菌活性比较稳定;紫外光照射对发酵液的抑菌活性没有影响.对放线菌ⅡR21菌株中Ⅰ型PKS基因族中KS基因进行PCR扩增和分析,与其他KS序列相似性比较低,与其系统分类最近的Streptom yces natalensis相似性达77％.