粉尘螨Ⅰ类变应原的cDNA克隆测序及亚克隆

目的 获得粉尘螨I类变应原 (Derf 1)cDNA克隆及亚克隆 ,并进行测序。 方法 设计合成引物 ,从粉尘螨体内提取RNA ,经逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)获得cDNA ,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD 18T ,转化大肠埃希菌 (E .coli)JM10 9,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序 ,将PCR筛检阳性重组子及pET 3 2a( +)表达载体分别用BamHⅠ和SacⅠ双酶切 ,连接转化至E .coli感受态细胞JM10 9中过夜培养 ,挑选菌落进行酶切鉴定。 结果 从粉尘螨基因组RNA中扩增出Derf 1基因 ,获得pET 3 2a( +) Derf 1亚克隆 ,酶切产物的大小与预期相符。 结论 对粉尘螨Derf 1基因进行体外扩增并获得pET 3 2a( +) Derf 1亚克隆。

尘螨Ⅰ类变应原所致过敏性哮喘治疗的研究进展

尘螨是引起哮喘等过敏性疾病的主要气传变应原之一,其变应原种类繁多,尘螨Ⅰ类变应原是主要的致敏成分之一。本文就尘螨Ⅰ类变应原引起的螨性过敏性哮喘的发病机制、治疗及其研究进展做一综述。

抗粉螨Ⅰ类变应原单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的建立粉螨Ⅰ类变应原(dermatophagoides farinaeⅠ,Der fⅠ)杂交瘤细胞株,并对其分泌的Der fⅠ单克隆抗体进行鉴定。方法用重组Der fⅠ蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和3次克隆化,制备出单克隆抗体,Western blot法确定单克隆抗体的丙种球蛋白特异性,对单克隆抗体进行鉴定。结果获得2株可稳定分泌高效价Der fⅠ单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Western blot试验证明2株单抗与DerfⅠ蛋白均有特异性反应。结论成功制备2株抗Der fⅠ的单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力。