鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因在生物被膜内的表达及耐药分析

目的:研究携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜状态和普通液相培养状态下Ⅰ类整合酶基因(Class Ⅰ integrase gene,intI 1)mRNA的表达,并分析Ⅰ类整合子阳性菌耐药情况。方法:收集鲍曼不动杆菌临床株,并经过基因扩增筛选出携带Ⅰ类整合子的阳性菌株。提取携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜和液相培养2种生长状态下的总RNA,采用半定量RT-PCR方法分析2种生长状态下细菌的Ⅰ类整合酶表达情况。并用纸片扩散法对携带Ⅰ类整合子的临床分离鲍曼不动杆菌进行药敏试验。结果:携带Ⅰ类整合子的鲍曼不动杆菌在生物被膜状态和液相培养状态下均有intI 1基因mRNA表达。但生物被膜生长状态下的intI 1mRNA表达量高于液相培养状态下表达量约4倍。在收集的64株鲍曼不动杆菌中有46株携带intI 1基因,而且Ⅰ类整合子基因盒阳性菌株的部分耐药率高于整合子基因阴性的菌株。结论:鲍曼不动杆菌在生物被膜状态intI 1mRNA的表达上调,Ⅰ类整合子在细菌耐药中发挥作用。提示整合子在生物被膜状态下可进行更活跃的基因捕获。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在情况。方法根据美国CLSI/NCCLS2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-I阳性23株(85.2%)、aac(6′)-Ⅰ阳性18株(66.7%)、ant(3")-Ⅰ阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。

肺炎克雷伯菌老年人分离株氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解肺炎克雷伯菌(KPN)老年人分离株氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在状况。方法对80株PKN菌进行2种氨基糖苷类修饰酶基因和Ⅰ类整合子的遗传标记-Ⅰ类整合酶基因检测。结果80株KPN菌中aac(3)-Ⅱ阳性60株(75%)、aac(6)-Ⅰb阳性5株(6.3%),共有60株检出氨基糖苷类修饰酶基因(75%),intI1基因阳性62株(77.5%),与庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星耐药率分别为75%、80%、65%和60%。结论该80株老年人分离株PKN菌氨基糖苷类抗菌药物耐药与产氨基糖苷类修饰酶及Ⅰ类整合酶基因密切相关。

某院4株携带Ⅰ类整合酶基因的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制研究

目的分析该院4株不同耐药程度的Ⅰ类整合酶基因(IntⅠ)阳性铜绿假单胞菌(PA)的相关耐药机制,从而进一步研究不同耐药机制之间的相互作用。方法采用qPCR检测头孢他啶(CAZ)、亚胺培南(IMP)诱导下的4株PA的IntⅠmRNA的相对表达水平;采用PCR检测4株PA的β-内酰胺酶(blaTEM、blaNDM-1、blaVIM、blaIMP)、主动外排系统(MexAB-OprM)、外膜蛋白(OprD2)的表达水平,并采用qPCR检测4株PA的OprM、OprD2的表达水平;采用1%结晶紫染色检测4株PA的生物膜形成能力。结果编号为PA01、PA02、PA04的菌株在CAZ、IMP诱导下,IntⅠmRNA的相对表达水平均较对照组高(P<0.05),PA01、PA02的IntⅠmRNA的相对表达水平高于PA04,组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05),并且在一定浓度范围内,IntⅠmRNA的相对表达水平随着抗菌药物的浓度增加而增加。但PA03菌株的IntⅠmRNA的相对表达水平较PA01、PA02、PA04低,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。PA01、PA02检测到blaTEM,而blaNDM-1、blaVIM和blaIMP均未被检测到;PA01、PA02的外排泵相对表达水平高于PA03、PA04(P<0.05);PA01、PA02的OprD2 mRNA的相对表达水平低于PA03、PA04(P<0.05);PA01、PA02的生物膜形成能力弱于PA03、PA04,且PA03菌株的生物膜形成能力最强。结论PA01、PA02、PA04的IntⅠ在抗菌药物的选择性压力下表达增强,并且PA01、PA02对碳青霉烯类耐药主要由IntⅠ高表达、外排泵过表达及膜通透性降低介导,与β-内酰胺酶及生物膜形成关系不大。

嗜麦芽寡养单胞菌氨基糖苷类修饰酶与Ⅰ类整合酶基因的研究

目的了解医院嗜麦芽寡养单胞菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在的情况。方法收集2006年1月-2007年10月武警总医院住院患者标本中分离到的嗜麦芽寡养单胞菌27株,微量肉汤释释法测定14种抗菌药物的敏感性;PCR方法对嗜麦芽寡养单胞菌进行氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因检测。结果嗜麦芽寡养单胞菌对14种抗菌药物耐药严重,27株嗜麦芽寡养单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ阳性5株(18.5%),aac(3)-Ⅱ3株(11.1%)、aac(6′)-Ⅱ1株(3.7%)、Ⅰ类整合酶(intⅠ)阳性8株(29.6%)。结论嗜麦芽寡养单胞菌对氨基糖苷类耐药的主要原因是ant(2″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ,携带Ⅰ类整合子可能是导致其对氨基糖苷类耐药性高的原因。

鸡粪模拟堆肥中多重耐药菌、耐药基因和整合酶基因的消减动力学解析

为掌握多重耐药菌、耐药基因和整合酶基因在鸡粪堆肥过程中的消减动力学规律,试验外源添加多重耐药菌,并以其携带的磺胺类耐药基因(sul2)、多肽类耐药基因(mcr-1)、喹诺酮类基因(oqxB)和Ⅰ类整合酶基因(intI1)作为典型污染物,开展模拟堆肥试验.结果表明:可培养的多重耐药大肠杆菌数量在3 d的高温后得到完全灭活;堆肥10 d后,多重耐药菌总量下降了4~6个数量级.在高温堆肥过程中耐药基因的绝对丰度随着堆肥过程的进行而逐渐降低,耐药基因aadA、sul2、mcr-1、oqxB的消减率分别为89.39%、97.99%、99.89%、99.81%,intI1基因的消减率高于80%;大多数耐药基因的相对丰度表现出先降低后略微升高的趋势.基于基因绝对丰度的非线性回归分析表明,“独立”耐药基因(oqxB、mcr-1)的消减速率明显高于与Ⅰ类整合酶基因相连的基因(aadA),多重耐药大肠杆菌16S rRNA基因消减速率为0.128 d^(-1),半消减期为5.41 d.堆肥对耐药基因绝对丰度的消减速率高于相对丰度.研究显示,堆肥可以有效消减鸡粪中多重耐药菌,耐药基因消减规律符合一级动力学方程,与Ⅰ类整合酶基因相连耐药基因消减速率慢于“独立”耐药基因,4种耐药基因的半消减期为1.69~5.81 d.

烧伤病房鲍曼不动杆菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因研究

目的:了解烧伤病房鲍曼不动杆菌耐药性及耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-su l1)存在情况。方法:76株临床分离菌株采用K-B法进行抗菌药物敏感性试验,采用聚合酶链反应(PCR)法检测qacE△1-su l1基因和Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)。结果:抗菌药物敏感率分别为:哌拉西林/他唑巴坦(TZP)35.52%、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)57.89%、头孢他啶(CAZ)31.57%、头孢吡肟(FEP)34.21%、亚胺培南(IPM)33.39%、阿米卡星(AK)36.84%、环丙沙星(C IP)23.68%。76株鲍曼不动杆菌检测qacE△1-su lⅠ基因阳性62株(81.58%),intⅠ1基因阳性64株(84.21%)。qacE△1-su lⅠ基因和intⅠ1基因具有相关性。结论:烧伤病房分离的鲍曼不动杆菌有非常高的耐药率,并且qacE△1-su l1基因携带率较高,这和qacE△1-su l1基因与Ⅰ类整合酶基因整合在一起有关。

鲍曼不动杆菌消毒剂——磺胺耐药基因研究

目的了解鲍曼不动杆菌耐消毒剂-磺胺基因（qacE△1-sul1）存在情况。方法自临床分离27株鲍曼不动杆菌，采用聚合酶链反应法检测qacE△1-sul1基因和Ⅰ类整合酶基因（intⅠ1）。结果27株AB菌检测qacE△1-su1Ⅰ基因阳性22株（81-4％），intⅠ1基因阳性23株（85.2％）。qacE△l-su1Ⅰ基因和intⅠ1基因具有相关性。结论我院临床分离的鲍曼不动杆菌qacE△1-sul1基因携带率较高。这和qacE△1-sul1基因与Ⅰ类整合酶基因整合在一起有关。