Prx Ⅱ缺失的真皮间充质干细胞提前衰老加速皮肤老化进程研究

通过比较野生型和Prx Ⅱ(Peroxiredoxin Ⅱ)基因敲除型小鼠皮肤老化情况,阐明皮肤老化过程中Prx Ⅱ对真皮间充质干细胞的保护作用。体内试验采用病理组织切片,蛋白免疫印迹等方法检测两种129/SvJ小鼠皮肤组织及生理功能的差异;体外试验采用SA-β-gal染色对比两种真皮间充质干细胞衰老情况。结果表明同月龄的PrxⅡ基因敲除型小鼠与野生型小鼠相比真皮厚度层变薄,伤口愈合速度减慢,皮肤组织中P16、p21表达水平增加,PCNA表达水平降低;同代数的PrxⅡ基因敲除型的真皮间充质干细胞与野生型相比衰老细胞数量明显增多。综合分析,Prx Ⅱ基因敲除小鼠皮肤细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子表达上升,皮肤发生提前老化,与真皮间充质干细胞的细胞衰老存在相关性,为通过Prx Ⅱ延缓皮肤老化,减少因皮肤老化而引发的多种疾病提供基础理论。

沉默Prx Ⅱ基因促进5-FU诱导HepG2细胞凋亡研究

旨在探究Prx Ⅱ对5-FU诱导HepG2(人肝癌细胞系)细胞凋亡的影响,阐明沉默Prx Ⅱ基因提高5-FU促进HepG2发生细胞凋亡的作用。利用慢病毒介导的shRNA干扰技术建立Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系、MTT法检测细胞存活率、荧光显微照相测定凋亡情况、蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达水平。结果表明Prx Ⅱ基因沉默的HepG2细胞系构建成功;MTT检测发现在1mmol·L^-15-FU处理下,shPrx Ⅱ组细胞存活率明显低于Scramble组;荧光显微照相结果表明shPrx Ⅱ组细胞凋亡率明显高Scramble组;蛋白质免疫印迹结果表明PrxⅡ基因沉默的HepG2细胞中凋亡标志物PARP、促凋亡蛋白Bad的表达水平明显升高,抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平明显下降。研究表明,沉默PrxⅡ基因能提高HepG2对5-FU促凋亡作用的敏感性,导致HepG2细胞凋亡水平上升,研究结果可为提高肝癌细胞对于5-FU的敏感性提供新的潜在靶目标。

氧化应激时Peroxiredoxin Ⅱ膜质转移对红细胞渗透脆性的影响

为了探讨氧化应激时peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)膜质转移对红细胞渗透脆性的影响,检测了H_2O_2处理后红细胞渗透脆性的变化,并利用蛋白质免疫印迹法(Western-blot)检测了红细胞内PrxⅡ膜质转移情况,以及红细胞膜蛋白——带3蛋白(band 3)和血影蛋白(spectrin)的变化情况。研究结果显示,氧化应激时红细胞渗透脆性增加,红细胞内PrxⅡ从细胞膜转移至细胞质中,同时维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质——band 3和spectrin在红细胞膜上表达量减少。实验结果证明氧化应激时红细胞内PrxⅡ发生膜质转移,引起维持红细胞膜稳定、细胞骨架结构功能完整的相关蛋白质band 3和spectrin表达量降低,导致红细胞渗透脆性增加。

过氧化物还原酶Ⅰ、Ⅱ在先兆流产患者子宫内膜中的表达及意义

目的 探讨过氧化物还原酶Ⅰ（PrxⅠ）、Ⅱ在先兆早期流产患者子宫内膜中的表达及意义,从氧化应激方面探讨先兆早期流产的发病机制。方法 选取2014年4月～2016年4月就诊于惠州市惠东县人民医院计划生育门诊的流产患者60例,其中符合早期自然流产患者30例（实验组）,自愿人工流产终止妊娠者30例（对照组）。采集两组患者的流产蜕膜标本,采用免疫组化及免疫蛋白印记法检测组织中PrxⅠ、Ⅱ蛋白含量,比较两种蛋白在自然流产及正常早孕患者中的表达差异。结果 实验组患者的蜕膜组织中PrxⅠ蛋白定性表达阳性率（40.0%）显著低于对照组（90.0%）,其中实验组＋＋阳性率为6.7%、＋＋＋阳性率为3.3%,对照组＋＋阳性率为53.3%,＋＋＋阳性率为16.7%,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验组患者的蜕膜组织中PrxⅡ白定性表达阳性率（40.0%）显著低于对照组（93.3%）,其中实验组＋＋阳性率为13.3%,＋＋＋阳性率为3.3%,对照组＋＋阳性率为56.7%,＋＋＋阳性率为20.0%,差异均有统计学意义（P〈0.05）。实验组患者的蜕膜组织中PrxⅠ及PrxⅡ蛋白表达量（0.217±0.018、0.224±0.021）均明显低于对照组（1.174±0.114、1.184±0.181）,差异有统计学意义（t=31.942、29.481,均P〈0.05）。Pearson相关性分析结果显示,实验组滋养细胞中PrxⅠ和PrxⅡ在实验组蜕膜组织中的表达量呈正相关（r=0.782,P〈0.05）。结论 PrxⅠ和PrxⅡ两种蛋白表达具有相关性,均具有较强的抗氧化应激作用,该蛋白的大量丢失可能是自然先兆流产发生的主要机制之一。

抑癌基因PTEN和抗氧化蛋白PeroxiredoxinⅡ在自然流产患者绒毛组织的表达及意义

目的:分析并探讨绒毛组织中抑癌基因PTEN和抗氧化蛋白PeroxiredoxinⅡ(Prx2)与自然流产的关系。方法:应用RT-PCR法及免疫组织化学SP法检测PTEN和Prx2蛋白及mRNA在30例自然流产患者(实验组)绒毛组织中的表达,并以同期非意愿妊娠要求人工流产的30例正常妊娠患者为对照组。结果:①实验组绒毛组织中PTEN和Prx2蛋白阳性表达率(70.0%,36.7%)明显低于对照组(93.3%,93.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。②实验组绒毛组织中PTEN和Prx2 mRNA的表达(0.929±0.100,1.131±0.125)明显低于对照组(0.059±0.010,0.222±0.029),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PTEN和Prx2在自然流产患者绒毛组织中表达明显下降,说明可能与自然流产的发生有一定关系。