旋毛虫ITSⅡ区基因的克隆及其在分类学上的应用

克隆了6个不同旋毛虫隔离种的核糖体RNA ITSⅡ区的基因片段,序列分析结果表明,黑龙江省猪旋毛虫和猫旋毛虫为旋毛形线虫(Trichinella spiralis);犬旋毛虫为本地毛形线虫(Trichinella nativa),与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了基础依据。

旋毛虫各隔离种ITSⅡ区基因克隆和序列分析

克隆了6个不同旋毛虫隔离种的核糖体RNAITSⅡ区的基因片段,序列分析结果表明,黑龙江省猪旋毛虫和猫旋毛虫为旋毛形线虫(Trichinellaspiralis);犬旋毛虫为本地毛形线虫(Trichinellanativa)。结果与传统的分类结果基本一致,为传统的分类学方法提供了基础依据。

HLAⅡ类基因区与1型糖尿病

目的 :综述HLAⅡ类基因区与1型糖尿病的关系。方法 :查阅国外有关文献20余篇加以综述。结果 :HLAⅡ类基因区内的DQ、DR基因位点与1型糖尿病具有相关性。结论

放养型和野生型柞蚕的核糖体基因转录间隔区Ⅱ(ITS-2)的克隆与序列比较

核糖体基因转录间隔区Ⅱ(ITS-2)在物种间甚至种内群体间均表现出较高的差异,被用于种内或近缘种的研究。测定了放养型和野生型柞蚕(Antheraea pernyi)的rDNA ITS-2全长序列(GenBank登录号:GU073314、GU073315),并分析了二者之间的遗传差异。放养型和野生型柞蚕的rDNA ITS-2全长分别为1 111、1 112 bp,2个序列的GC含量达到61%,相似性高达98%。序列比对后得到1 117 bp的对齐序列,共鉴定变异位点19个,其中转换位点8个,无颠换,有11处发生核苷酸的插入/缺失。基于K2P模型计算的2条rDNA ITS-2序列的遗传距离为0.007,这一数值与估算的鳞翅目昆虫rDNA ITS-2序列种内平均遗传距离(0.009)基本一致。

大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac(3)—Ⅱ基因保守区分析

常规分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3)—Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)—Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3)—Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T。

人VEGF受体II基因3区的克隆、表达研究

用RT PCR法从人胎儿脐静脉内皮细胞中克隆人VEGF受体II基因 3区 ,将其重组到 pAYZ表达载体中 ,构建成人VEGF受体II基因 3区表达载体。将该载体转化大肠杆菌 16C9,获得稳定表达 ,表达产物以可溶性状态存在 ;SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,其分子量约为 14kD。以纯化的表达产物免疫Balb/c小鼠 ,眼球采血制备抗血清 ,抗血清效价在 10 3以上 ,并具有抑制VEGF诱导内皮细胞增殖的作用 ,在抑制肿瘤血管新生中具有潜在的应用前景。

拓扑异构酶II基因区PCR-RFLP法鉴别常见皮肤癣菌

目的：探讨拓扑异构酶Ⅱ基因区PCR～RFLP法鉴别常见皮肤癣菌的可行性。方法：用真菌拓扑异构酶Ⅱ基因区通用引物dPsD1、dPsD2，先后对6种34株临床常见皮肤癣菌和2株白念珠菌以及4株曲霉的DNA进行巢式PCR（nested PER）扩增，扩增后的阳性产物分别用限制性内切酶HincⅡ和HinfⅠ酶切，进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析，根据结果来鉴定皮肤癣菌并在种的水平上区分这6种常见皮肤癣菌。结果：通用引物dPsD1对6种皮肤癣菌均能扩增出3390bp、dPsD2能扩增出2380bp的片段，而白念珠菌和曲霉则未见阳性扩增条带。扩增出的产物分别经HincⅡ和HinfⅠ酶切后表现为58—1670bp长短不等的片段组合，根据这些特异性条带谱可以区分这6种临床常见皮肤癣菌。结论：拓扑异构酶Ⅱ基因区的巢式PCR—RFLP方法，是鉴定和区分常见皮肤癣菌的有效方法。

烟台地区汉族人群HLA-Ⅱ类基因区五个基因位点多态性分析

目的探讨烟台地区汉族人群人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DPA1、-DPB1、-DQA1、-DQB1、-DRB1五个位点基因分布多态性及基因型。方法收集2020年6月至2020年12月烟台市中心血站检测合格的汉族无偿献血者外周血样本135例,利用下一代测序(next-generation sequencing,NGS)技术对入组人群进行HLA-DPA1、-DPB1、-DQA1、-DQB1、-DRB1五个位点基因检测和基因型分析,统计分析HLA-DPA1、-DPB1、-DQA1、-DQB1、-DRB1基因频率特点,并与其它地区人群基因分布进行比较。结果在HLA-DRB1、DQA1、DQB1、DPA1、DPB1五个位点检出分布频率最高的等位基因分别是DRB1*09:01、DQA1*01:02、DQB1*03:01、DPA1*02:02、DPB1*05:01;五个位点等位基因中,发现98种HLA-DRB1基因型,频率高于1.48%的有7种;66种HLA-DQB1基因型,频率高于1.48%的有14种;68种HLA-DQA1基因型,频率高于1.48%的有14种;36种HLA-DPB1基因型,频率高于1.48%的有13种;10种HLA-DPA1基因型,频率高于1.48%的有6种。烟台地区汉族人群HLA-DRB1*01:01基因频率明显高于南方汉族人群和沈阳汉族人群(χ^(2)值分别为18.97,7.58,P值均<0.05),-DRB1*07:01、-DRB1*13:01基因频率仅明显高于南方汉族人群(χ^(2)值分别为20.10,12.08;P值均<0.05),而HLA-DRB1*14:54基因频率则明显低于南方汉族人群(χ^(2)=7.76,P<0.05),HLA-DQA1*02:01、-DQA1*05:08、-DQB1*02:02、-DQB1*05:01、-DQB1*06:02、-DQB1*06:03、-DQB1*06:04基因频率明显高于南方汉族人群(χ^(2)值分别为20.93,13.26,12.45,4.95,8.30,10.64,6.53;P值均<0.05),HLA-DQA1*03:03、-DQA1*05:05基因频率明显高于沈阳汉族人群(χ^(2)值分别为13.40,7.50;P值均<0.05),HLA-DQA1*05:03、-DQB1*05:02、-DQB1*06:01则明显低于南方汉族人群(χ^(2)值分别为4.51,13.87,6.43;P值均<0.05),HLA-DPA1*01:03、-DPA1*02:07、-DPB1*02:01、-DPB1*04:02、-DPB1*17:01基因频率明显高于南方汉族人群(χ^(2)值分别为18.34,10.72,254.85,5.11,13.83;P值均<0.05),HLA-DPA1*01:03、-DPB1*05:01基因频率明显高于沈阳汉族人群(χ^(2)值分别为6.54,14.18;P值均<0.05),HLA-DPA1*02:02、-DPA1*04:01、-DPB1*02:02、-DPB1*05:01、-DPB1*13:01、-DPB1*21:01基因频率则明显低于南方汉族人群(χ^(2)值分别为15.41,6.62,6.86,8.20,5.98,29.59;P值均<0.05),其他基因频率与南方及沈阳汉族人群差异无统计学意义(P>0.05)。结论烟台地区汉族人群HLA-Ⅱ类基因区五个位点有其独特的基因频率和基因型分布。

HLA—DM基因多态性与SLE疾病活动性及肾损害相关性分析

SLE是一种自身免疫性疾病。HLA—DM基因属于抗原加工提呈相关基因，定位于HLAⅡ类基因区域，分DMA和DMB两个位点，均由其第三外显子决定其多态性，其多态性位点较经典的HLAⅡ类基因相对较少。本研究旨在探讨HLA—DM基因多态性与SLE患者自身抗体、活动性及肾损害等的相关性。