Ⅱ型囊泡单胺转运体基因过表达对多巴胺含量影响的体外研究

目的 获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因 ,转染至MN9D细胞 ,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2 基因促进单胺类递质循环利用的效应。 方法 从人胎脑中提取总RNA ,RT PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM Easy T载体中 ,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK RSV VMAT2 ,转染MN9D细胞 ,免疫细胞化学检测VMAT2 的表达 ,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。 结果 RT PCR扩增到 16 37bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV VMAT2 能在COS7细胞表达 ;免疫组织化学证实转基因的MN9D细胞 (实验组 )VMAT2 免疫着色明显高于对照组。高效液相色谱结果表明 ,实验组中细胞内外的多巴胺含量均升高 (P <0 0 1) ,细胞外HVA、DOPAC降低 (P <0 0 5 ) ,而胞内升高 (P <0 0 1)。 结论 克隆的VMAT2cDNA片段可在真核细胞中表达 ,该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用 ,有望用于帕金森病的基因治疗。

Ⅱ型囊泡单胺转运体示踪剂^(18)F-FP-DTBZ临床显像使用剂量对比研究

目的探讨优化Ⅱ型囊泡单胺转运体示踪剂^(18)F-FP-DTBZ临床显像的使用剂量。方法对比分析健康志愿者和帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者不同给药剂量的PET图像。11例健康志愿者及18例Hoehn-Yahr I期PD患者,均随机分为低剂量组(low dose,LD)和高剂量组(high dose,HD),LD组给药量(222±18.5)MBq,HD组为(370±18.5)MBq。注射示踪剂90 min后采集PET数据15 min。PET图像通过视觉分析和半定量分析。结果视觉分析:健康志愿者的壳核区域均有较高摄取;健康志愿者和PD患者图像均存在视觉可辨差异,给药剂量差异未增加图像视觉评判难度。半定量分析:LD组和HD组的健康志愿者壳核相对枕叶的标准摄取比(standardizeduptakevalueratio,SUVr)差异无统计学意义;PD患者双侧壳核前、后部SUVr差异均无统计学意义。结论LD组和HD组给药剂量差异不影响显像效果和结果判定,临床检查时推荐采用低剂量(222 MBq),在保证显像效果的同时减少患者和操作人员的辐射剂量,同时降低用药成本。

Ⅱ型囊泡单胺转运体与帕金森病

帕金森病是常见的神经系统变性疾病，在普通人群中的发病率约为300／100000，多发于50岁之后，并且随年龄增长，发病率逐渐增高。帕金森病的病因至今未明，研究显示其主要的病理特征是黑质多巴胺（dopamine）能神经元进行性丢失和残存神经元路易小体（Lewybodies）形成。

帕金森病基因治疗的理论:VMAT_2基因的表达及其对MN9D细胞多巴胺代谢的影响

目的:获得人Ⅱ型囊泡单胺转运体(vesicularmonoaminetransporter-2,VMAT2)基因,转染至MN9D细胞,通过检测细胞内外单胺类递质含量的变化评价VMAT2基因促进单胺类递质循环利用的效应。方法:从人胎脑中提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的cDNA片段并将其重组于pGEM-Easy-T载体中,进行全序列测定。重组真核表达载体pBK-RSV-VMAT2,转染MN9D细胞,免疫细胞化学检测VMAT2的表达,HPLC检测细胞内外单胺类递质含量的变化。结果:RT-PCR扩增到1637bp的带有Kozak序列的cDNA片段。原位杂交证实pAAV-VMAT2能在COS7细胞表达;免疫组化证实转基因的MN9D细胞(实验组)VMAT2免疫着色明显高于对照组。HPLC结果表明实验组中细胞内外的多巴胺含量分别升高至(227.2±20.8)%和(302.6±15.7)%(P<0.01),而细胞外HVA、DOPAC分别降低至(48.1±5.3)%和(55.7±4.9)%(P<0.05),细胞内HVA,DOPAC分别升高至(332.1±28.2)%和(1176.8±82.5)%(P<0.01)。结论:克隆了VMAT2cDNA片断,可在真核细胞中表达。该基因的过表达可促进多巴胺的循环利用,有望用于帕金森病的基因治疗。

缩短PET/CT采集时间对帕金森病诊断的影响

目的探究缩短氘代-氟[^(18)F]丙那嗪(^(18)F-D6-AV133)PET/CT采集时间对图像质量及帕金森病诊断效能的影响,减少长时间显像造成的运动伪影。资料与方法回顾性选取2021年10月—2022年6月广州医科大学附属第一医院帕金森病患者27例与健康对照者24例,受试者注射示踪剂^(18)F-D6-AV133(371.04±16.30)MBq,60 min后进行图像采集,时长10 min。应用CT衰减校正重建为采集时间3、5、7、10 min的4组图像,对所得PET图像进行半定量分析,计算纹状体相对枕叶的标准化摄取值比值(SUVR),2位医师分别对不同组图像进行定性分析。比较不同采集时间SUVR、视觉评分的差异,使用受试者工作特征曲线分析获得SUVR最佳临界值。结果2位医师图像质量视觉分析一致性较强(ICC=0.853,P<0.001),采集时间为5 min的图像能达到临床工作中普遍的质量水平,占78.4%(40/51)。图像质量半定量结果显示,采集时间5 min和10 min所得SUVR与诊断效能差异无统计学意义(Z=1.821,P=0.069),且两组最佳临界值一致,均为3,即适当缩短采集时间对帕金森病诊断结果无影响。结论随着技术设备的发展进步,PET图像质量逐步提高,扫描时间逐渐缩短,可以将^(18)F-D6-AV133采集时间从常规的10 min缩短为5 min。

^(18)F-FDG及^(18)F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像诊断帕金森病

目的探讨^(18)F-FDG及^(18)F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像诊断帕金森病(PD)的价值。方法对28例PD患者(PD组)和10名健康志愿者(对照组)行^(18)F-FDG脑代谢和^(18)F-FP-DTBZ PET/CT显像。对PD患者采用PD统一评分量表第Ⅲ部分(UPDRSⅢ)和Hoehn-Yahr(H-Y)进行临床评分。在^(18) F-FDG PET图像上观察代谢减低脑区;在^(18) F-FPDTBZ PET图像上测得尾状核、壳核前部及壳核后部标准摄取值(SUV)。比较PD组与对照组间的差异,并与临床评分进行相关性分析。结果 PD组中23例(23/28,82.14%)大脑皮层代谢减低,8例(8/28,28.57%)基底核代谢减低。PD组尾状核^(18)F-FP-DTBZ SUV与对照组差异无统计学意义(P=0.1^(18)),壳核前部及后部SUV均低于对照组(P均<0.01)。PD组早期PD患者尾状核^(18) F-FP-DTBZ SUV与对照组差异无统计学意义(P>0.05),壳核前部及后部^(18) F-FPDTBZ SUV均低于对照组(P均<0.01);中晚期PD患者尾状核、壳核前部及后部^(18) F-FP-DTBZ SUV均低于对照组(P均<0.05)。壳核前部及后部^(18)F-FP-DTBZ SUV均与UPDRSⅢ运动评分、H-Y分期均呈负相关(壳核前部:r=-0.463、-0.564,P=0.002、0.001;壳核后部:r=-0.412、-0.585,P=0.005、0.001)。单侧肢体症状PD患者症状对侧壳核前部及后部^(18)F-FP-DTBZ SUV较症状侧减低(P均<0.05)。结论 ^(18) F-FDG及^(18) F-FP-DTBZ双示踪PET/CT显像可为诊断PD和评估病情提供有益信息。

分子影像学在帕金森病临床中的应用价值

单光子发射计算机断层扫描（SPECT）和正电子发射断层成像（PET）是近年来在帕金森病（PD）研究领域里进展最为迅速的分子成像技术，利用放射性示踪剂追踪PD患者脑内多巴胺代谢情况，通过对黑质纹状体多巴胺系统功能显像和定量反映PD病理改变。目前常用示踪剂包括多巴、多巴胺转运体（DAT）示踪剂和Ⅱ型囊泡单胺转运体（VMAT2）示踪剂等。