大麻素1型受体参与疼痛调节机制的研究进展

大麻素1型受体(CB1R)是近年来研究较为广泛的内源性大麻素受体之一,在中枢和外周神经系统均有表达。CB1R位于突触前膜,通过逆行抑制性突触传递调节神经递质的释放,是治疗疼痛的有效靶点。激活CB1R对伤害性、病理性和炎性疼痛均具有镇痛效应,拮抗CB1R可引起疼痛敏化。本文通过对CB1R结构功能、信号转导、镇痛机制方面进行综述,为进一步了解疼痛的病理生理学机制及探索更优疼痛治疗方法提供参考。

吲哚类大麻素受体选择性激动剂共同特征药效团模型的研究

大麻素受体与疼痛、炎症、骨质疏松等多种疾病紧密相关,是极具潜力的药物靶点。本研究分别选取吲哚类CB2选择性激动剂和CB1选择性激动剂为研究对象,采用Discovery studio 2019软件分别构建两种激动剂共同特征药效团模型,首次对这两种药效团模型进行比较分析。随后通过测试集和ROC曲线两种验证方法对CB2选择性激动剂药效团模型的可靠性进行验证和筛选,得到一个最佳模型,该模型可用于天然化合物数据库的筛选,为发现新型CB2选择性激动剂提供理论基础。

大麻素2型受体在加速正畸牙移动中的作用

目的 探讨大麻素2型受体(CB2)在正畸过程中对小鼠正畸牙移动(OTM)速率和压力侧牙周组织改建的作用。方法 筛选CB2^(-/-)和同窝WT型各30只雄性小鼠,6周龄时建立牙齿移动模型,建模时间分别为0、3、7、14、21 d(n=6)后取材,经体视显微镜测量牙移动距离;HE染色观察根压力区牙周组织变化;TRAP染色统计根压力区破骨细胞数量;免疫组织化学染色观察根压力区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)阳性单核细胞和多核细胞的数量变化。结果 正畸牙移动距离测量结果显示,在21 d内,随着时间延长,牙齿移动距离逐渐增加,且3、7、14、21 d时CB2^(-/-)组牙齿移动距离均较WT小鼠增加;HE染色显示OTM第14天时CB2^(-/-)小鼠压力区牙周膜间隙宽度大于WT小鼠(P<0.000 1);TRAP染色显示14 d时,在第一磨牙远中根压力区硬骨板处,CB2^(-/-)小鼠的破骨细胞数量大于WT小鼠(P<0.001);MMP-9免疫组织化学染色显示OTM 14 d时,在压力区牙周膜区域,CB2^(-/-)小鼠的MMP-9(+)单核细胞和MMP-9(+)多核细胞数量均大于WT小鼠(P<0.05)。结论 CB2可加速正畸力作用下牙齿移动速率。CB2缺失加速正畸牙移动是通过加速牙移动过程中压力侧骨吸收实现的。

血管紧张素Ⅱ1型受体在氧化三甲胺促进ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化中的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)在氧化三甲胺(TMAO)促动脉粥样硬化中的作用。方法用分子对接预测TMAO与AT1R可能的相互作用。将21只6周龄ApoE^(-/-)小鼠随机分为对照组、TMAO组、TMAO+替米沙坦组,每组7只。TMAO组在饲料中加1%胆碱复制高TMAO血症模型。TMAO+替米沙坦组采用替米沙坦10 mg/(kg·d)灌胃治疗。12周后采血,采用高效液相色谱串联质谱法测定血浆TMAO含量;油红O染色确定主动脉根部斑块面积;免疫组织化学法检测斑块内炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-6(IL-6)的浸润;构建AT1R表达质粒,转染293T细胞,加入TMAO(200μmol/L)或TMAO(200μmol/L)+替米沙坦(1μmol/L)作用0、5、10、15、30和60 min,检测AT1R下游信号通路ERK、PKC磷酸化活化情况。结果分子对接预测到TMAO与AT1R之间的存在直接结合位点。3组小鼠主动脉根部斑块面积占比、斑块内MCP-1和IL-6表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);TMAO组较对照组主动脉根部斑块面积占比增加(P<0.05),斑块内MCP-1和IL-6表达升高(P<0.05),而替米沙坦组较TMAO组主动脉根部斑块面积占比下降(P<0.05),斑块内MCP-1和IL-6表达降低(P<0.05)。3组主动脉组织的AT1R、p-ERK1/2、p-PKC蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);TMAO组较对照组升高(P<0.05),而替米沙坦组较TMAO组下降(P<0.05)。在转染AT1R质粒的293T细胞中,TMAO组(200μmol/L)不同时间点的p-ERK1/2、p-PKC蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05);与0 min比较,作用15和30 min时p-ERK1/2蛋白相对表达量升高(P<0.05),作用10和15 min时p-PKC蛋白相对表达量升高(P<0.05)。而替米沙坦(1μmol/L)作用后,各个时间点的p-ERK1/2和p-PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论TMAO加重ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化机制可能包含了其对AT1R的作用。

大麻素Ⅱ型受体激动剂促进小鼠心肌梗死后心脏干/祖细胞增殖的作用

目的:探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2)选择性激动剂AM1241对小鼠心肌梗死(MI)模型中心脏干/祖细胞增殖的作用。方法:40只雄性C57BL/6小鼠通过结扎小鼠心脏左冠状动脉前降支建立MI模型并随机分为4组,每组10只(n=10):①假手术(Sham)组;②MI组;③MI+CB2受体激动剂AM1241(MI+AM1241)组;④MI+CB2受体激动剂AM1241+CB2受体拮抗剂AM630(MI+AM1241+AM630)组。采用小动物超声系统观察小鼠左室射血分数(LVEF)的变化。用免疫荧光染色法观察MI周边区表达干细胞生长因子受体(c-kit)、干细胞抗原1(Sca-1)的阳性细胞数,实时荧光定量PCR测定MI周边区c-kit、Sca-1和多药耐药蛋白P糖蛋白(MDR1)的表达水平。结果:与MI组相比,MI+AM1241组小鼠7 d和14 d心脏LVEF值显著提高(P<0.01)。免疫荧光染色的结果提示,MI+AM1241组c-kit和Sca-1的表达较MI组增多(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,MI+AM1241组c-kit和Sca-1的基因表达水平明显高于MI组(P<0.05)。同时,CB2受体拮抗剂AM630可阻断AM1241的上述作用。结论:CB2受体激活可促进梗死心肌干/祖细胞的增殖,改善心脏的收缩功能。

大麻素2型受体激动剂JWH-015对阿尔茨海默病样小鼠认知功能的改善作用及其可能机制

目的观察大麻素2型受体(CB2R)激动剂JWH-015对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知功能下降的改善作用,并探讨其作用机制是否与脑内小胶质细胞激活表型转化密切相关。方法 20只成年雄性C57BL/6J小鼠随机分为溶剂对照组、JWH-015对照组、AD模型组和JWH-015治疗组。侧脑室注射4μg寡聚态β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)和等体积生理盐水构建AD模型和模型对照组后,分别接受连续3周腹腔注射JWH-015 0.5 mg/kg或等量溶剂处理。采用新物体识别实验检测小鼠认知功能;实时定量PCR方法检测皮质、海马脑区M1型小胶质细胞标记分子诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和M2型小胶质细胞标志物几丁质酶3样蛋白(Ym1/2)m RNA表达水平。同时,取15只CB2R基因敲除C57BL/6J小鼠(CB2RKO)和5只同窝野生型(CB2RWT)小鼠按基因型和处理随机分为CB2RKO溶剂对照组、CB2RKO AD模型组、JWH-015处理组和CB2RWT小鼠溶剂对照组,用来研究CB2R对认知功能改善作用和小胶质细胞激活表型转化作用的特异性。结果与溶剂对照组相比,C57BL/6J AD模型组小鼠新奇物体识别指数显著降低(P<0.01),同时伴随皮质和海马脑区i NOS m RNA表达显著升高(均为P<0.05)和Ym1/2 m RNA表达显著降低(均为P<0.01);而JWH-015处理可显著提高C57BL/6J AD模型组小鼠新物体识别指数(P<0.05),下调皮质和海马区i NOS m RNA表达水平(均为P<0.05),上调Ym1/2 m RNA表达水平(均为P<0.05);与脑室注射生理盐水的CB2RKO溶剂对照组小鼠相比,CB2RKO AD模型组小鼠识别指数显著降低(P<0.05),皮质和海马脑区i NOS m RNA表达显著升高(均为P<0.05),皮质脑区Ym1/2 m RNA表达显著降低(P<0.05);与CB2RKO AD模型组小鼠相比,JWH-015处理组长时程给药对新奇物体识别指数无显著影响,并对皮质、海马脑区内i NOS及Ym1/2 m RNA的表达水平无显著影响。结论 JWH-015通过特异性激动CB2R改善Aβ诱导的AD模型小鼠的认知能力下降,其机制可能与其直接作用于相关脑区小胶质细胞CB2受体,引起小胶质细胞M1/M2表型转化,减轻脑内小胶质细胞介导的神经源性炎症反应有关。

Ⅱ型大麻受体激动剂JWH133对大鼠局灶性脑缺血—再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨Ⅱ型大麻受体(CB2)激动剂JWH133预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后作用的机制。方法将健康成年雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、脑缺血-再灌注模型组(模型组)、JWH133给药组和溶剂对照组。用改良Zea Longa线栓法建模。Longa评分法评价神经功能,TTC染色法测定缺血侧脑组织及周围血清中白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,TUNEL免疫荧光染色检测大鼠神经元凋亡情况。结果 4组试验大鼠均不同程度出现神经行为功能异常,但JWH133给药组大鼠的神经行为功能恢复明显优于其他3组(P<0.05)。脑切片染色显示,3个手术组大鼠均出现供血区白色梗死灶,但JWH133给药组白色梗死灶较模型组和溶剂对照组缩小(P<0.05)。模型组大鼠脑组织及血清中IL-6、IL-1β水平较假手术组显著升高,JWH133给药组治疗后2种炎性因子水平均有不同程度降低,与溶剂对照组对比均有显著性差异(P<0.05)。TUNEL染色显示,假手术组几乎无凋亡细胞,模型组及溶剂对照组凋亡细胞数量显著增加,JWH133给药组凋亡神经细胞显著减少。结论 JWH133预处理通过抑制脑缺血-再灌注损伤过程发挥神经保护作用,其机制可能与降低IL-6、IL-1β水平及发挥抗凋亡作用有关,尚待进一步探讨。

脊髓β-内啡肽参与大麻素2型受体激动剂调节的癌痛吗啡耐受

目的探讨脊髓β-内啡肽是否参与大麻素2型(cannabinoid type 2 receptor,CB2)受体调节的癌症疼痛(以下简称"癌痛")吗啡耐受。方法采用Walker 256乳腺癌细胞注射到大鼠右后侧脚掌趾部建立癌痛模型。荷瘤大鼠随机分为6组,每组6只。按需要分别接受鞘内注射CB2受体激动剂、拮抗剂、皮下吗啡注射或联合给药,每天早晚两次,持续8 d。每天早上给药后30 min应用von Frey纤维丝和热平板实验评估大鼠的机械性疼痛阈值和热刺激回缩潜伏期。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脊髓β-内啡肽表达水平。结果慢性吗啡治疗可降低荷瘤大鼠机械性疼痛阈值和热疼痛阈值。相对于空白对照组,慢性吗啡治疗可下调脊髓β-内啡肽表达水平[(5.24±1.41)ng vs(12.46±3.50)ng,P<0.01]。共同给予非镇痛剂量的CB2受体激动剂8 d可明显抑制吗啡所引起的机械性疼痛[(19.33±3.36)g vs(9.5±1.07)g,P<0.01]和降低热疼痛阈值[(21.83±2.89)s vs(9.5±2.01)s,P<0.01],同时抑制脊髓β-内啡肽表达下调[(10.11±2.08)ng vs(5.24±1.41)ng,P<0.05]。结论鞘内注射非镇痛剂量的CB2受体激动剂可能通过抑制吗啡诱导的脊髓β-内啡肽表达下调而调节癌痛吗啡耐受。

大麻素2型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响

目的探讨大麻素2型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响。方法选取健康成年雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法将大鼠分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症+CB2R激动剂JWH133组(Sep+JWH133组),每组8只。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,Sep+JWH133组于术后1 h腹腔注射JWH1331.5 mg/kg,Sham组和Sep组分别于上述时间点腹腔注射等量生理盐水,模型复制24 h后,心脏采血。采用ELISA法检测血清肌酐(Scr)水平;HE染色法观察小肠组织及肾脏组织病理改变;免疫组织化学法测定肾脏自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5的表达水平。结果光镜下Sham组为正常小肠和肾脏组织,无出血及炎症浸润,小肠组织损伤程度为0级。Sep组小肠绒毛上皮组织缺失或连续性中断,黏膜血管出血,炎症细胞大量浸润,组织损伤程度≥3级;肾脏近端小管上皮细胞排列紊乱,肾小球体积明显增大,系膜细胞肿胀,间质有明显出血及大量炎症细胞浸润。Sep+JWH133组病理改变明显减轻,小肠绒毛上皮组织较完整,仅有少许血管出血,少量炎症细胞浸润,组织损伤程度≤2级;肾脏结构较完整,间质仅有少量出血及炎症细胞浸润。Sep组和Sep+JWH133组Scr、肾小管Paller评分较Sham组升高(P<0.05),Sep+JWH133组SCr、肾小管Paller评分较Sep组降低(P<0.05)。Sep组和Sep+JWH133组自噬相关蛋白Beclin-1和Atg5的表达较Sham组上调(P<0.05),Sep+JWH133组Beclin-1和Atg5的表达较Sep组上调(P<0.05)。结论大麻素2型受体激动剂可以减轻脓毒症大鼠急性肾损伤,其作用机制可能与诱导肾脏自噬表达上调有关。

内生大麻素受体激动剂抑制异动症大鼠纹状体单胺类神经递质的释放

目的观察内生大麻素受体激动剂WIN 55,212-2对帕金森病左旋多巴相关异动症模型大鼠纹状体内单胺类神经递质释放的影响。方法采用脑内微透析和高效液相色谱在线递质测量法观察WIN 55,212-2腹腔内注射对异动症模型大鼠左旋多巴相关异动症状和纹状体内单胺类神经递质释放的影响。结果与溶剂注射相比,WIN 55,212-2注射显著抑制异动症模型大鼠左旋多巴皮下注射后的异动样症状(F1 263=44.071,P<0.001),同时明显减少纹状体内多巴胺的释放(F1 263=5.091,P<0.05)。结论纹状体内生大麻素受体可能通过抑制性的调节单胺类神经递质的释放来影响异动症模型大鼠的异动样症状。

大麻素2型受体激动剂JWH133对人永生化角质形成细胞体外增殖以及细胞因子表达影响的研究

目的探讨JWH133对人永生化角质形成细胞CHaCaT细胞)体外增殖以及经肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导后细胞因子表达的影响。方法首先用不同浓度JWH133(15、30、60μmol/L)分别作用于HaCaT细胞。采用CCK-8法检测JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪检测JWH133对HaCaT细胞凋亡率的影响。其次采用抗体芯片检测技术分别检测20 ng/ml TNF-α组、20 ng/ml TNF-α.+30μmol/L JWH133组中细胞因子表达的变化,并采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验CELISA)法进行定量分析,以验证抗体芯片检测结果的可靠性。结果15、30、60μmol/L JWH133作用12、24、36 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随着时间延长和JWH133浓度的增加,JWH133对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强(F=187.1、2678.9,P<0.05)。60μmol/LJWH133作用24h后,凋亡率由(4.34±0.07)%(阴性组〕增加至(21.77±0.40)%(JWH133组)(P<0.05)。20 ng/ml TNF-α能够诱导HaCaT细胞不同程度增加白细胞介素19CIL”19)、IL-22、IL-23等细胞因子的高表达,而30μmol/L JWH133处理后可降低上述细胞因子的表达。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制HaCaT细胞体外增殖、促进凋亡,且能够抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞中一些重要免疫分子的表达。

к阿片受体选择性激动剂U50488H对心肌梗死大鼠血管紧张素Ⅱ、内皮素和一氧化氮的影响

目的:采用选择性к阿片受体激动剂U50488H激活κ阿片受体,观察其对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积以及血管紧张素Ⅱ、内皮素和NO的影响。方法:实验于2002-03/2003-05在解放军第四军医大学生理学教研室完成。选用健康雄性成年SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):①对照组:未结扎冠状动脉左前降支。②缺血再灌注组:结扎冠状动脉左前降支,给予心肌缺血45min,并再灌注15min。③U50488H组:预先给予U50488H1.5mg/kg,15min后造模,方法同缺血再灌注组。④Nor-BNI组:在给予U50488H10min前先给予选择性к阿片受体阻断剂Nor-BNI0.5mg/kg,余同U50488H组。观察各组大鼠心肌超微结构、心肌梗死面积以及血浆肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶、血管紧张素Ⅱ、内皮素和一氧化氮等因子的水平。结果:32只大鼠进入结果分析。①心肌梗死面积:U50488H组小于缺血再灌注组和Nor-BNI组[(0.039±0.01),(0.085±0.01),(0.077±0.02)cm2,P<0.01],后两组差异不显著。②血浆中肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶活性:缺血再灌注组大鼠高于对照组(P<0.01),U50488H组明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。③血管紧张素Ⅱ水平:缺血再灌注组大鼠高于对照组[(305±38),(134±26)ng/L,P<0.01],U50488H组明显低于缺血再灌注组[(197±23)ng/L,P<0.01]。④内皮素:缺血再灌注组大鼠高于对照组[(366±32),(179±24)ng/L,P<0.01],U50488H组明显低于缺血再灌注组[(242±27)ng/L,P<0.01]。⑤一氧化氮浓度:缺血再灌注组大鼠低于对照组[(21±6),(58±9)mol/L,P<0.01],U50488H组明显高于缺血再灌注组[(44±8)mol/L,P<0.01]。结论:U50488H可通过激活心脏к阿片受体发挥心脏保护作用,并可以减少心肌酶的漏出,下调血管紧张素Ⅱ、内皮素水平以及上调一氧化氮水平。

一种GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型

目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒(ELISA)进行验证。结果成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。

先兆子痫患者血清血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体对血管平滑肌细胞ERK1/2信号途径的激动效应

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)的自身激动性抗体(AT1-AAs)激动培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)AT1受体并激活细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号途径的能力。方法采用亲和层析法提取先兆子痫患者血清中的AT1-AAs。培养大鼠主动脉VSMCs。应用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或AT1-AAs刺激培养的细胞。而后,采用免疫印迹法测定细胞中ERK1/2的表达;逆转录PCR检测细胞c-fos基因的表达;应用钙离子的荧光探针Fluo-3/AM负载培养VSMCs,应用共聚焦显微镜检测细胞荧光强度变化以反映细胞内游离钙水平的变化。结果 AT1-AAs能够发挥与血管紧张素Ⅱ类似的效应,能够激动AT1受体,促使ERK1/2的磷酸化并促进其下游的c-fos在VSMCs中的表达;并且ERK1/2的磷酸化一定程度依赖于钙离子信号。结论由于ERK1/2信号通过促进血管炎症、纤维化及血管收缩造成血管重塑,AT1-AAs可能通过该途径参与先兆子痫患者的循环障碍。

血管紧张素Ⅱ1型受体A1166C基因多态性与中国人原发性高血压相关性的Meta分析

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)A1166C基因多态性与中国人原发性高血压的相关性。方法系统检索PubMed、Web of science、Embase、Cochrane Library、中国知网(CNKI)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(SinoMed)中关于AT1R A1166C基因多态性与中国人原发性高血压相关性的文献。两名研究者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并进行文献质量评价后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入39篇文献,其中病例组12,638例,对照组8,494例。Meta分析结果显示AT1R A1166C的C等位基因(OR:1.80,95%CI:1.51~2.15,P<0.0001)和AC/CC基因型(OR:1.81,95%CI:1.49~2.20,P<0.0001)可增加患高血压的风险。通过亚组分析发现,在汉族、彝族人群和东部、中部人群中,C等位基因、AC/CC基因型增加原发性高血压的易感性,在西部人群中只有AC/CC基因型展现这种相关性,而年龄可能不是影响A1166C与高血压相关性的因素。结论AT1R A1166C基因的C等位基因和AC/CC基因型与中国人高血压易感性相关。

非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平改善及预后的影响

目的明确非选择性大麻素受体激动剂WIN55，212—2对心肺复苏后大鼠体内炎症因子水平及预后的影响，探讨可能的机制。方法30只SD大鼠分别诱导室颤，持续6min后开始机械胸外心脏按压，8min后进行电除颤。成功复苏后30min，动物被随机分为3组：①药物处理＋正常温度组（WIN＋Normo）；②药物处理组（WIN）；③对照组。药物组与对照组分别给予WIN55，212—2和生理盐水，按照1．0mg／（kg·h）速率静脉滴注给药。所有动物的环境温度均保持相同，药物处理＋正常温度组采用一个额外的加热灯泡使得该组和对照组体温维持在（37±0．2）℃。监测复苏后4h各组大鼠白细胞介素-6（IL-6）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平，并记录复苏后72h各组动物的存活情况。结果药物处理组大鼠IL-6（98．40±8．80）pg／mL以及TNF-α（40．36±9．21）pg／mL的水平较对照组[（120．30±15．20）pg／mL和（68．29±9．58）pg／mL]及药物处理＋正常温度组[（118．50±16．60）pg／mL和（64．33±10．19）pg／mL]明显下降，大鼠神经系统缺陷评分（NDS）及存活率较另外两组明显升高（P〈0．05）。结论在大鼠心肺复苏模型中，静脉注射WIN55，212—2能够降低IL-6与TNF-α的水平，并改善复苏后NDS和72h存活率。但当该药物产生的低温作用消失时，其对于大鼠体内炎症因子及预后的影响也随之明显减弱。故WIN55，212—2所致的心肺复苏后保护作用可能与其产生的降温作用有关。

鞘内注射大麻素受体激动剂与右美托咪定在大鼠骨癌镇痛中的相互作用

目的研究鞘内注射大麻素受体激动剂(WIN 55,212-2)与右美托咪定在大鼠骨癌痛模型中的镇痛作用,并了解其相互作用。方法选取120只6周雌性SD大鼠,在七氟烷麻醉下于胫骨注入大鼠乳腺癌MRMT-1细胞(1×105)建立骨癌痛模型,运用放射线和HE染色法判断骨癌形成。注入MRMT-1后第10天,将大鼠按随机数字表法分为两组:WIN 55,212-2(W组)和右美托咪定组(D组)。W组(n=40)分为对照组和WIN 55,212-2的1μg、3μg、10μg和30μg组。D组(n=32)分为对照组和右美托咪定的3μg、10μg、30μg组。通过von Frey纤维细丝测定大鼠机械缩爪阈值(MWT),观察鞘内注WIN 55,212-2和右美托咪定的镇痛效果。用等辐射分析法(n=32)分析两种药物的相互作用。结果放射线、病理学结果表明注入MRMT-1肿瘤细胞后成功建立骨癌模型,注入肿瘤细胞后大鼠MWT明显减小,产生骨癌疼痛(机械性痛觉超敏)。与对照组相比,WIN 55,212-2和右美托咪定能剂量依赖性的增加MWT(P<0.05),而等辐射分析法显示两种药物是相加作用。结论鞘内注射大麻素受体激动剂与右美托咪定有效抑制大鼠骨癌痛,两种药物的镇痛效果是相加作用。

大麻素Ⅱ型受体在尖锐湿疣和Ⅰ级宫颈上皮内瘤变组织中的表达

目的:探讨大麻素Ⅱ型受体(CB2)在正常宫颈组织、宫颈尖锐湿疣(CA)和Ⅰ级宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)中的表达规律和意义。方法:采用免疫组织化学方法分别检测正常宫颈组织、宫颈CA皮损、CINⅠ组织中CB2受体的表达情况。结果:CB2受体在正常宫颈组织、宫颈CA皮损、CINⅠ组织中均有表达,CINⅠ组织中CB2受体表达水平明显高于宫颈CA皮损,两组CB2受体表达水平均明显高于对照组。结论:CB2受体的表达可能与宫颈尖锐湿疣和宫颈上皮内瘤变的发生发展相关。

脑血管紧张素能AT_1受体对侧脑室注射胆碱能激动剂后促钠排泄反应和肾神经元型一氧化氮合酶活性的影响

目的:探讨大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱后肾排钠量和肾脏神经元型一氧化氮合酶表达的变化以及阻断脑血管紧张素能AT1受体对上述变化的影响。方法:实验于2003-05/2004-08在大连医科大学生理教研室完成。选用健康雄性SD大鼠48只,实验前5～7d于侧脑室埋置导管,1周后待动物恢复健康即进行实验。实验时随机分为4组,每组12只:①生理盐水组:侧脑室先注射0.85%NaCl5μL,20min后再注射0.85%NaCl5μL。②氨甲酰胆碱组:侧脑室先注射0.85%NaCl5μL,20min后再注射0.5μg氨甲酰胆碱5μL。③洛沙坦预处理组:侧脑室先注射20μg洛沙坦5μL,20min后再注射0.5μg氨甲酰胆碱5μL。④洛沙坦组:侧脑室先注射20μg洛沙坦5μL,20min后再注射0.85%NaCl5μL。侧脑室注药后用整体实验、免疫组织化学方法和图像分析技术,检测各组大鼠肾排钠量及肾神经元型一氧化氮合酶免疫反应阳性颗粒的平均灰度。结果:48只大鼠均进入结果分析。侧脑室注射氨甲酰胆碱(0.5μg)后1h,大鼠肾排钠量为(5.48±0.49)μmol/(min·kg),肾近曲小管上皮细胞内神经元型一氧化氮合酶免疫反应阳性颗粒平均灰度为(177.50±8.34),明显高于生理盐水组[(1.33±0.72)μmol/(min·kg),(126.88±11.34),P<0.05];洛沙坦预处理后肾排钠量为(2.49±0.67)μmol/(min·kg),肾近曲小管上皮细胞内神经元型一氧化氮合酶免疫反应阳性颗粒平均灰度为(151.30±5.69),明显低于氨甲酰胆碱组(P<0.05)。结论:侧脑室给予氨甲酰胆碱后,肾促钠排泄反应增强,肾小管上皮细胞内神经元型一氧化氮合酶免疫反应活性增强,洛沙坦预处理可下调氨甲酰胆碱在肾脏诱导的上述变化。

抗血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体是狼疮性肾炎活动和系统损伤的新标记

目的:探究抗血管紧张素Ⅱ-1型受体抗体(AT1R-AA)与狼疮性肾炎(LN)患者临床和病理特征的相关性。方法:98例经肾活检确认活动性LN患者,ELISA法检测血清AT1R-AA(>17 U/mL定义为阳性)。狼疮活动所致3个及以上其他系统损伤定义为多系统受累。根据AT1R-AA与抗dsDNA或抗-C1q抗体是否同时阳性分为抗体单阳性和双阳性两组。选择18例性别年龄与LN患者匹配的健康人作为正常对照,14例患者免疫抑制治疗获得缓解时重复检测AT1R-AA。结果:98例LN患者中位SLE疾病活动度评分(SLE-DAI)13(10,16)分,近一半存在多器官系统受累,中位血清AT1R-AA水平显著高于正常对照(17.6 U/mL vs 7.93 U/mL,P<0.001),51%患者血清AT1R-AA阳性,各病理类型间AT1R水平和阳性率无差异。相关性分析发现AT1R-AA水平与SLE-DAI呈正相关(r=0.490,P<0.001),与C3(r=-0.279,P=0.005)和C4(r=-0.270,P=0.007)水平呈负相关。与AT1R-AA阴性患者相比,AT1R-AA阳性患者的SLE-DAI(P<0.001)、系统受累数(P<0.001)和多系统损伤比例(P<0.001)均显著增加,血清C3水平(P=0.021)和慢性化指数(CI)(P=0.049)显著降低,肾脏损伤指标两组间无统计学差异。与抗体单阳组比较,抗体双阳组的SLE-DAI(P<0.001)、多系统受累(P=0.037)和急性肾损伤比例(P=0.016)显著增高,而血清C3(P=0.021)和C4(P=0.022)水平显著降低。治疗后获得肾脏缓解的14例患者血清AT1R-AA水平(22.9 U/mL vs 12.4 U/mL,P=0.001)和阳性率(78.6%vs 21.4%,P=0.008)均显著下降。结论:AT1R-AA是LN患者活动的血清学新标记,其水平与SLE-DAI及系统受累相关;AT1R-AA与抗dsDNA或抗C1q抗体共阳性患者的狼疮活动性、系统受累及肾损伤程度显著增加。