人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体β基因(PILRβ)的克隆、表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:表达和纯化人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体蛋白PILRβ,制备并鉴定其多克隆抗体。方法:应用RT-PCR从人的外周血细胞总RNA中反转录并扩增出PILRβ基因,将其克隆到表达载体pET-32a,在大肠杆菌中IPTG诱导表达,经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,纯化后的蛋白多次注射免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清,ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性。结果:获得了较高纯度的PILRβ蛋白(Mr约为42 000)及其抗体,多抗效价达到1:10 000,且特异性较好。结论:成功克隆了PILRβ基因并表达纯化了其蛋白,获得了效价较高、特异性较强的多克隆抗体,为进一步研究PILRβ蛋白的功能和潜在的药物开发打下了基础。

病毒性反复呼吸道感染患者Toll样受体、D-二聚体及分泌型免疫球蛋白A/白蛋白的表达及预后意义

目的探讨Toll样受体(TLR)、血浆D-二聚体及分泌型免疫球蛋白A(sIgA)/白蛋白(ALB)在病毒性反复呼吸道感染(RRTIs)患者中的表达及与病情严重程度、预后的关系。方法选取75例病毒性RRTIs患者作为病例组,根据病情严重程度将其分为轻、中、重3组,分别25例、30例、20例,另选30例健康人群作为对照组。比较病例组和对照组及轻、中、重3组患者外周血TLR2、TLR9、血浆D-二聚体及唾液中sIgA/ALB表达情况,根据病例组患者预后情况分为预后良好组和预后不良组,比较这两组患者上述指标表达情况。结果病例组患者外周血TLR2、TLR9及血浆D-二聚体水平均明显高于对照组,唾液中sIgA/ALB表达水平明显低于对照组(P<0.001)。轻、中、重3组患者外周血TLR2、TLR9及血浆D-二聚体水平均呈逐渐升高趋势,唾液中sIgA/ALB表达水平呈逐渐降低趋势(P<0.001)。预后良好组患者外周血TLR2、TLR9及血浆D-二聚体水平均明显低于预后不良组,唾液中sIgA/ALB表达水平明显高于预后不良组(P<0.01)。结论病毒性RRTIs患者血浆D-二聚体水平升高,黏膜免疫功能下降,临床可根据上述指标表达情况预测患者病情严重程度及预后。

山东地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型P、AE、AG和单体型1、6、17与梅毒的关系

目的分析山东地区汉族梅毒患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因型和单体型的多态性,探讨其与梅毒发生之间的关联性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,对山东汉族梅毒患者190名和健康对照者192名的KIR基因进行检测和分析。结果共检出KIR基因型25种,其中包括新的基因型11种。25种KIR基因型共由12种单体型和6种未知单体型组成。在健康对照组中,KIR基因型P的频率显著高于梅毒患者组(P<0.05),其OR值为0.304;在梅毒患者组中,基因型AE和AG的频率显著高于健康对照组(P<0.05)。在健康对照组中,单体型17的表型频率显著高于梅毒患者组(P<0.05),其OR值为0.321;在梅毒患者组中,单体型1和6的表型频率显著高于健康对照组(P<0.05)。单体型A和B在这2组人群的分布频率差异相比无统计学意义(P>0.05)。结论 KIR基因型AE和AG可能是梅毒的易感基因型,基因型P可能是梅毒的抗性基因型;KIR单体型1和6可能是梅毒的易感单体型,单体型17可能是梅毒的抗性单体型。

白细胞相关免疫球蛋白样受体1在糖尿病中的研究现状

白细胞相关免疫球蛋白样受体1(LAIR-1)是一种免疫抑制受体,介导了免疫抑制,可以通过调节炎症反应来影响多种代谢性及免疫性疾病的发生发展。糖尿病是导致胰岛素产生缺陷的最常见的疾病形式。现在公认的是炎症反应是对高血糖水平免疫反应的结果,这种低度的慢性炎症损害了胰腺的β细胞,并导致胰岛素分泌不足,从而导致高血糖。在这篇综述中,我们重点讲述了糖尿病发生机制、炎症引起胰岛素抵抗导致糖尿病以及LAIR-1免疫激活后开启下游抑制信号通路调节炎症反应。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体和人白细胞抗原C基因型特定前葡萄膜炎的关系

目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIRs)和人类白细胞抗原C(HLA-C)与HLA-B27相关的急性前葡萄膜炎(B27AAU)和特发性AAU(IAAU)的关系。方法:应用序列特异性引物聚合酶链反应对196例B27AAV和IAAU患者和210例正常人进行KIR基因和HLA-C等位基因分析。结果:B27AAU组的HLA-C2和KIR2DL1/HLA-C2的频率分别为0.009和0.044,而HLA-C1C1和HLA-C1的频率较低(P=0.034和P=0.009)。在IAAU中,KIR2DL2和KIR2DL2/HLA-C1的频率高于对照组(P=0.009和P=0.044),而KIR2DL3和KIR2DL3/HLA-C1的频率较低(分别为P=0.000和P=0.001)。结论:HLA-C2和KIR2DL1/HLAC2、KIR2DL2和KIR2DL2/HLA-C1可能分别对B27AAU和IAAU敏感。HLA-C1C1和HLA-C1、KIR2DL3和KIR2DL3/HLA-C1可能分别对B27AAU和IAAU起保护作用。

浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

本研究的目的是分析浙江汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的多态性及基因型。采用序列特异性引物PCR法(PCRSSP)进行KIR基因低分辨率检测和基因型分析。结果表明:①在浙江汉族人群中共检出目前已知的17个KIR基因。2DL4、3DL2和3DL3基因存在于所有个体,其基因频率为1.00。2DL1、2DL3、2DP1、3DP1003、3DL1、2DS4001/002基因较为常见,频率分别为0.902、0.902、0.902、0.902、0.7598、0.5615;而2DL2、2DL5A、2DL5B、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4003、2DS5、3DS1和3DP1001/002基因频率较低。②浙江汉族人群中以A型单倍型为主,频率高达74.7%。在检测样本中共明确检出12种单倍型,最常见的是单倍型2,频率为53.0%。③共检出26种基因型,最常见为AJ(2,2)、AF(1,2)型,其次为AH(2,5)、NN2(2,6)、AI(1,5)和AG(1,1)。其中有15种基因型在白人中尚未见报道,4种基因型无法根据相关文献标准分析出单倍型。结论:浙江汉族人群有其独特的KIR基因频率和基因型频率分布。

江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

目的分析江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及单倍型,为研究K IR基因与疾病相关性提供依据。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对江苏地区163名汉族献血员进行K IR基因低分辨率检测和基因型、单倍型分析。结果共检出除框架基因及假基因外的12个K IR基因,其中2DL1和2DL3存在于所有个体,3DL1和2DS4较为常见;其次为1D、2DL5、2DS1、3DS1及2DS5;2DS2、2DL2及2DS3基因频率较低;检出的17种基因型中,以AJ(2,2)和AF(1,2)型最为常见,其次为AH(5,2)和AG(1,1)型。有3种基因型(New1、New11及New19)在白人中未见报道,其中New19国内未见报道;163例个体中明确检出9种单倍型,最常见的是单倍型2,其次是单倍型1。结论江苏地区汉族人群有其独特的K IR基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与原发性胆汁性肝硬化的相关性分析

目的探讨江苏汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法收集2011-06-01/2013-07-31期间江苏省常州三院住院的PBC患者122例和198例相匹配的无血缘关系健康人群外周血标本。采用实时荧光定量PCR检测KIR基因多态性,分析KIR基因及基因型频率在2组人群间的差异。结果 PBC患者KIR2DL2和2DS2基因频率比对照组显著性降低,与降低疾病的患病风险有关。共检测出55种KIR基因型,其中PBC组24种,对照组47种。最常见的基因型为AA1,其次为BX2、BX8、BX4、BX14。对存在于5个或以上个体的11个基因型进行分析,未发现PBC组与对照组之间有显著性差异。结论 KIR2DL2和2DS2的缺失可能是江苏地区汉族人群PBC发病潜在的保护因子。

白细胞免疫球蛋白样受体A2基因多态性与上海地区汉族系统性红斑狼疮相关性的研究

目的:检测系统性红斑狼疮(SLE)患者LILRA2基因多态性位点(rs2241524)的基因型频率,探讨其与SLE易感性的相关性。方法:采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对SLE患者组(230例)及对照组(260例)LILRA2基因rs2241524位点进行基因分型。结果:SLE患者组LILRA2(rs2241524)基因型AA频率(6.5%)高于对照组(1.9%),差异有统计学意义(P<0.05);基因型AG频率(36.1%)和GG频率(57.4%)分别与对照组(34.6%、63.5%)比较,差异均无统计学意义(P均>0.05);SLE患者组等位基因A基因频率(24.6%)高于对照组(19.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:上海地区汉族LILRA2基因多态性位点rs2241524(G>A)与SLE发生相关。

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与宫颈癌的相关性分析

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白(Ig)样受体(KIR)基因多态性与宫颈癌的相关性。方法收集167例宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)/宫颈癌患者和163例年龄匹配的无血缘关系健康女性外周血标本。采用SYBR GreenⅠ实时荧光PCR分析KIR基因及基因型频率在两组人群间的差异。结果 CIN3/宫颈癌组的KIR2DL2和2DS2基因频率低于健康人对照组(10.2%vs28.8%,P=0.000;9.6%vs 25.2%,P=0.000)。KIR2DL2/2DS2共表达个体的频率在病例组低于健康人对照组(9.0%vs22.7%,P=0.001),与降低疾病的患病风险有关(OR=0.336)。基因型AA1和BX8与增加CIN3/宫颈癌的患病风险有关(49.1%vs 35.6%,OR=1.746,P=0.013;10.8%vs 4.3%,OR=2.692,P=0.026),而BX4与降低疾病的患病风险有关(2.4%vs 7.4%,OR=0.309,P=0.036)。结论 KIR2DL2/2DS2对宫颈癌的发生可能具有保护性作用。

南方汉族急性髓细胞白血病患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的研究

目的研究和分析南方汉族急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的基因频率和单倍型。方法采用序列特异性引物PCR(polymerase chain reaction with sequence-specific primers,PCR-SSP)技术对南方地区76例急性髓细胞白血病患者进行KIR基因的检测和分析,并与77例随机健康对照人群KIR基因频率进行比较。结果共检出16个KIR基因;在AML患者中检出15种基因型,正常人群中检出18种基因型。结论与正常人比较,AML患者各KIR基因频率无显著性差异。

中国新疆地区维吾尔族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

背景:研究发现,杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因具有遗传多态性,不同个体和NK细胞克隆表达不同的杀伤细胞免疫球蛋白样受体库。目的:分析新疆维吾尔族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性及基因型和单倍型特点。方法:采用序列特异性引物PCR方法检测84名新疆维吾尔族志愿者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因频率,采用Hsu等的标准进行基因型和单倍型分析。结果与结论:①共检测已知的16个杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因,其中3DL3、2DL4、3DL2基因存在于所有个体;2DL1、3DP1、2DP1、2DL3基因较为常见;其次为2DS4、3DL1、2DL5、2DS2、2DL2、2DS1、2DS5、3DS1;而2DS3基因频率最低。②共检测19种基因型,其中以AJ(2,2)、AH(5,2)和M(2,8)型较常见,频率分别为25.00%,10.71%和10.71%,其次为P(2,17)、AI(1,5)、H(2,4)和C(5,3),频率为9.52%,5.95%。5.95%和4.76%;比对发现U(17,21)、T(8,8)基因型共4例在国内文献汉族人群中未见报道。③共检出11种单倍型,最常见单倍型2占48.7%,其次是单倍型5,占15.8%;另外,发现有3种新基因型,且无法根据现有相关文献标准进行单倍型分析。表明新疆维吾尔族人群具有其独特的杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

抗苗勒管激素及其Ⅱ型受体在子宫内膜样腺癌中的表达

目的:观察抗苗勒管激素(AMH)及其Ⅱ型受体(AMHR-Ⅱ)在子宫内膜样腺癌组织中的表达及分布,探讨二者在子宫内膜样腺癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组织化学方法对39例不同分化级别(高分化腺癌16例、中分化腺癌13例、低分化腺癌10例)的子宫内膜样腺癌组织进行AMH及AMHR-Ⅱ的检测,并对其阳性表达进行比较。结果:在不同分化级别的子宫内膜样腺癌组织中均有AMH及AMHR-Ⅱ的阳性表达,免疫反应阳性物质主要位于腺癌细胞质内,细胞核阴性。AMH在低分化腺癌的阳性表达率(30.0%)低于高分化腺癌(87.5%)和中分化腺癌(76.9%),差异均有统计学意义(P<0.05);AMHR-Ⅱ在低分化腺癌的阳性表达率(20.0%)低于高分化腺癌(81.3%)和中分化腺癌(69.2%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:AMH及AMHR-Ⅱ与子宫内膜样腺癌的发生有一定关系,而且随着分化程度的降低,二者的表达呈递减趋势。

激活素A及其ⅡA型受体在小鼠肝损伤模型肝组织中的表达

目的:探讨激活素A及其ⅡA型受体在Con A诱导的小鼠肝损伤模型肝组织中的表达形式及其可能的作用。方法:小鼠尾静脉注射Con A(10 mg.kg-1),每周1次,连续4周,建立小鼠肝损伤模型(n=24),另设正常对照组(n=24),于末次注射后的24、72、120及168 h,各组(n=6)分批检测小鼠血清酶变化及肝脏组织病理损伤程度,同时采用荧光定量RT-PCR法检测激活素A及其ⅡA型受体的表达水平。结果:在末次注射后72 h肝组织病理损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,肝细胞索消失,细胞肿胀,呈气球样变,以后逐渐恢复;激活素A蛋白水平及其mRNA表达与其ⅡA型受体mRNA表达呈平行状态,于注射后72 h达高峰,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:激活素A与其ⅡA受体变化与肝组织病理损伤呈平行状态,提示激活素A可能参与了Con A诱导肝损伤模型小鼠的肝损伤。

miR-146a在肺泡Ⅱ型上皮细胞抗结核分枝杆菌感染中的免疫调控作用

利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)的方法分析了强毒株人型结核分枝杆菌H37Rv和减毒株卡介苗(BCG)感染肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)株A549中微小RNA-146a (miR-146a)的表达情况;构建miR-146a腺病毒过表达载体,分析在结核分枝杆菌(Mtb)感染A549细胞中,过表达miR-146a对toll样受体(TLRs)信号通路及炎症因子的表达调控作用.结果表明, Mtb感染可引起A549细胞中miR-146a表达上调;当在A549细胞中过表达miR-146a时,在BCG感染组中TLR2的表达表现为感染后显著抑制, H37Rv感染组中TLR2表达差异不显著;TLR4在BCG和H37Rv感染组中均表现为显著下调.过表达miR-146a时,在BCG和H37Rv感染组中对TLR信号通路的下游分子髓样分化因子(MyD88)、TNF受体关联因子6 (TRAF6)、核因子κB (NF-κB)和促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6的表达均表现为感染后的抑制作用,而IL-8表达影响不明显.说明在AECⅡ细胞抗Mtb感染过程中, miR-146a负调控TLRs信号通路中MyD88、TRAF6、NF-κB和IL-6等来调控AECⅡ细胞对Mtb的感染过程.

抗苗勒管激素及其2型受体在子宫内膜样腺癌中的表达

目的分析研究抗苗勒管激素(AMH)及其Ⅱ型受体对于子宫内膜样腺癌的作用,探讨其分布表达情况。方法 60例子宫内膜样腺癌患者,根据其分化级别进行分组,包括低分化组(Ⅲ级)15例、中分化组(Ⅱ级)30例和高分化组(Ⅰ级)15例,对患者腺癌组织进行免疫组化分析,统计对比三组患者AMH以及AMHR-Ⅱ得到阳性率。结果资料中所有患者子宫内膜样腺癌组织中均检测到AMH以及AMHR-Ⅱ的阳性表达,高分化组患者AMH阳性率及AMHR-Ⅱ阳性率高于中低分化组,阳性率随着分化程度的升高而增高,三组患者阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着子宫内膜样腺癌患者分化程度的升高,患者AMH以及AMHR-Ⅱ阳性率呈现上升趋势,其表达与患者腺癌的发生密切相关。

rhTNFR:Fc联合免疫球蛋白治疗复发性流产患者临床研究

目的:探究注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白联合免疫球蛋白治疗复发性流产患者的效果。方法:选取2017年1月~2020年1月收治的128例复发性流产患者,按治疗方案不同分对照组和研究组,各64例。对照组接受免疫球蛋白治疗,研究组接受注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白联合免疫球蛋白治疗。对比两组临床疗效、治疗前后血清孕酮、人绒毛膜促性腺激素茁亚单位、肿瘤坏死因子-琢、白介素-6水平。结果:研究组治疗总有效率为87.50%(56/64),高于对照组的70.31%(45/64)(P<0.05);治疗后研究组血清人绒毛膜促性腺激素茁亚单位、孕酮水平高于对照组(P<0.05);治疗后研究组血清肿瘤坏死因子-琢水平较对照组低,血清白介素-6水平较对照组高(P<0.05)。结论:注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白联合免疫球蛋白治疗复发性流产患者效果显著,可有效调节血清人绒毛膜促性腺激素茁亚单位、孕酮水平,抑制免疫应答反应。

上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性及单倍型组合研究

目的 分析上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体 (killer Ig-like receptors,KIR)基因多态性及单倍型 ,为进一步研究不同人群 KIRs与某些疾病的相关性提供线索。方法 采用序列特异性引物 PCR法对 87名无关汉族健康志愿者进行 KIR基因低分辨率检测和单倍型分析。结果 (1)共检出Xv、KIR1D在内的 18个 KIRs基因。 3 DL 3、2 DL 4、3 DL 2和 3 DL 1存在于所有个体 ;较常见为 2 DL 3、Z、2 DL 1、X;其次为 2 DS4、1D、2 DL 5、2 DS1、3 DS1、2 DS5;2 DS2、2 DL 2、2 DS3、Xv频率较低。 (2 )共检出 13种单倍型 ,最常见的是单倍型 2。 (3 )共检出 18种基因型 ,以 AJ(2 ,2 )、AF(1,2 )型最常见 ,其次为 AH(5,2 )、AI(1,5)和 AG(1,1)。另外有 5种基因型 FZ1(2 ,9或 6,16)、FZ2 (1,16或 2 ,15)、FZ3 (6,17)、FZ4(4,13 )和FZ5(2 ,6) ,目前在白人中尚未发现。结论 上海地区汉族人群有其独特的 KIRs基因频率。

人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因PCR-SSP分型方法的建立及其应用

目的建立PCR-SSP方法检测人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因。方法参照KIR基因数据库,采用计算机软件设计一系列特异性引物建立PCR-SSP方法,以人类生长激素基因特异性引物作为内对照,以Dynal公司的KIRPCR-SSP分型试剂盒作为验证。结果本实验所设计的KIR特异性引物可检测出所有KIR基因,扩增产物条带清晰,特异性强。结论本实验建立的KIRPCR-SSP方法结果准确,具有可行性。

强直性脊柱炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因型和单倍型分析

目的分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因型和单倍型在强直性脊柱炎患者中的分布特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应方法，分析105例强直性脊柱炎患者、62例骨关节炎患者和412名健康对照KIR基因型和单倍型。结果（1）强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3-2DL3-2DL1-2DPI-2DL4—3DL1-2DS4-3DL2阳性率（6．67％）明显低于健康对照组和骨关节炎组（20．15％，17．74％；P=0．001，0．037）。（2）强直性脊柱炎组KIR基因型3DL3—2DL3-2DL2—2DL1—2DPI—2DIA-3DLI-2DL5-2DS1-2DS2-2DS3-2DS4-2DS5-3DS1—3DL2阳性率（9．52％）及基因型3DL3-2DL3—2DL2-2DLI-2DPI—2DIA-3DL1—2DL5-2DS1—2DS4—3DL2阳性率（5．71％）明显高于健康对照组（2.18％，0．49％；P=0．001，0．001），骨关节炎组未检出这2种基因型。（3）三组人群KIR单倍型差异无统计学意义。结论KIR基因型分布异常，可能是强直性脊柱炎的免疫遗传因素，其分子机制有待进一步研究。